谭建蓉
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市科委地方病重大专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗免疫BALB/c小鼠诱导免疫应答的动态研究被引量：3
- 2015年
- 目的动态观察日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗免疫BALB/c小鼠后诱导的免疫应答,探讨该疫苗的免疫机制。方法将日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗分别经口服（PO）和滴鼻（IN）途径免疫BALB/c小鼠,在免疫后0~20周,每隔2周每组随机剖杀4只小鼠,取脾并制备脾细胞悬液,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测脾细胞增殖水平、流式细胞仪（FACsort）检测脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群和脾细胞凋亡、双抗体夹心ELISA法检测血清及脾细胞培养上清液中细胞因子IL-10、IL-12和TNF-α水平和血清抗体IgG及其亚类、IgE和IgA的动态变化。结果当SjAWA和ConA刺激或不刺激时,PO组和IN组脾细胞增殖水平均于免疫后6周达最高水平,分别于6周和8周达最高脾细胞凋亡发生率,脾CD4＋T细胞亚群百分比分别在6周和8周达峰值,两组CD8＋T细胞亚群百分比在免疫后2~20周升高不显著,PO组脾细胞因子IL-10、IL-12和TNF-α水平均分别于10周、6周和8周达峰值,IN组分别在10周、8周和8周达峰值,口服组血清抗体IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgA水平均于8周达峰值,而IN组除IgG和IgA于8周达峰值外,其余均于12周达最高水平,IgE于14周达峰值,两组血清细胞因子IL-10、IL-12和TNF-α水平分别在免疫后（PO组）14、6和8周及（IN组）8、6和8周达最高水平。结论该疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。
- 谭建蓉李文桂覃婷
- 关键词：日本血吸虫免疫
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗的构建及其表达被引量：2
- 2016年
- 目的构建和鉴定日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗,并研究日本血吸虫Sj14-3-3-Sj32融合基因在两歧双歧杆菌中的表达情况。方法将重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32电转化至两歧双歧杆菌中,构建重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析鉴定。结果酶切、PCR证实重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32成功转入两歧双歧杆菌中,SDS-PAGE分析显示,诱导表达产物为相对分子质量(Mr)约73kDa的重组蛋白,与预期结果相符,表达的蛋白占菌体总蛋白的8.2%。Western blot显示日本血吸虫感染的兔血清可识别所表达的重组蛋白。结论成功构建日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗,双歧杆菌可表达具有特异的抗原性的Sj14-3-3-Sj32重组蛋白。
- 覃婷李文桂谭建蓉
- 关键词：日本血吸虫双歧杆菌
- 日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达被引量：2
- 2015年
- 目的构建日本血吸虫重组质粒pGEX—Sjl4—3—3-Sj32，探讨重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达。方法以重庆医科大学附属第-医院传染病寄生虫病研究所保存的质粒pGEX—sj14—3-3和pET28ct。Si32为模板，通过PCR扩增Sil4—3-3和Si32抗原编码基因，然后采用基因拼接法（geneSOEing）剪接Sil4-3-3和Sj32基因，得到Sjl4-3-3-Sj32融合基因。定向克隆人穿梭载体pGEX-1kT，构建重组质粒pGEX-Sjl4-33Sj32，并采用双酶切法进行验证。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），经异丙基硫代-B-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达后，用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质免疫印迹（Westernblot）法对表达产物进行分析鉴定。结果基因拼接法得到约1750bp的Sjl4—3—3-Sj32融合基因；双酶切证实sj14-3-3-Sj32融合基因成功插入pGEX-1kT载体中；SDS—PAGE分析显示，表达产物为相对分子质量约为73×100的重组蛋白；Westernblot显示，重组蛋白可被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建日本血吸虫重组质粒pGEX—sj14-33Sj32，该重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中得到了高效融合表达，且表达的融合蛋白具有特异的抗原性。
- 覃婷李文桂谭建蓉
- 关键词：血吸虫质粒大肠埃希菌
- 日本血吸虫Sj14-3-3疫苗研究进展被引量：1
- 2014年
- 日本血吸虫病是由日本血吸虫引起的一类严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,研制疫苗防治该病是目前的研究热点.Sj14-3-3蛋白是一种有效的疫苗分子,该文就Sj14-3-3蛋白疫苗和核酸疫苗的研究进展进行综述.
- 谭建蓉李文桂
- 关键词：日本血吸虫疫苗
- 日本血吸虫重组两歧双歧杆菌（pGEX-Sj32）疫苗构建及鉴定被引量：6
- 2015年
- 目的 构建和鉴定日本血吸虫重组两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum,Bb）pGEX-Sj32疫苗.方法 从重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所构建的重组大肠埃希菌BL21 （pET28α-Sj32）中抽提质粒pET28α-Sj32,通过PCR扩增Sj32抗原编码基因;将Sj32基因定向克隆至大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-Sj32,将该重组质粒转化至大肠埃希菌BL21感受态细胞（DE3）,抽提质粒后进行双酶切鉴定;采用电穿孔法,将重组质粒pGEX-Sj32转化至Bb,构建Bb（pGEX-Sj32）疫苗,再从该疫苗中抽提重组质粒pGEX-Sj32,以其为模板进行PCR鉴定.结果 从抽提质粒pET28α-Sj32中PCR扩增出长度约为1 270 bp的Sj32基因片段;重组质粒pGEX-Sj32经双酶切鉴定,获得长度为4 947 bp的载体片段和长度为1 270 bp的Sj32基因片段;以抽提的疫苗质粒pGEX-Sj32为模板进行PCR扩增,得到了长度约为1 270 bp的Sj32基因片段,与预期结果相符.结论 成功构建了日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗.
- 谭建蓉李文桂张丽
- 关键词：两歧双歧杆菌疫苗
- 日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21中的表达
- 2014年
- 目的构建日本血吸虫(Sj)重组质粒pGEX-Sj32并研究其在大肠埃希菌BL21中的表达效率。方法从该实验室保存的BL21(pET28α-Sj32)重组菌中抽提质粒pET28α-Sj32,PCR扩增Sj32抗原编码基因,定向克隆入穿梭载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Sj32。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达;表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果 PCR成功扩增出Sj32编码基因,并成功构建了重组质粒pGEX-Sj32;SDS-PAGE显示相对分子质量约为58×103的重组蛋白,薄层扫描分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的21%;Western blot显示重组蛋白可被日本血吸虫感染兔血清识别。结论成功构建日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj32,该重组质粒在大肠埃希菌BL21中得到了高效表达,且表达蛋白具有特异的抗原性。
- 谭建蓉李文桂张丽
- 关键词：日本血吸虫聚合酶链反应大肠埃希菌
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠脾细胞动态观察被引量：2
- 2014年
- 目的观察日本血吸虫重组Bb（pGEX—Sj26GST）疫苗免疫BALB／c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射（SC组）和鼻腔粘膜接种（IN组）免疫BALB／c鼠，在免疫后O～22周每2周每组随机剖杀4只小鼠，无菌取脾，制成单个悬浮脾细胞，用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测脾细胞增殖水平、用流式细胞仪（FACsort）检测T细胞亚群和脾细胞凋亡状况。结果未刺激及sjAWA刺激时SC组小鼠脾细胞增值水平于免疫后4～20周明显升高，ConA刺激时于4～18周显著升高，均于免疫后8周达最高水平；IN组脾细胞增殖水平原液组、SjAwA组和ConA组分别于2～18周、2～10周及14～18周、2～8周和12～18周显著升高，均于免疫后4周达最大值（P〈0．01或P〈0．05）。SC组和IN组CD＋T细胞分别于免疫后2～14周、2周及6～16周升高，并于8周达峰值（P〈0．01或P〈0．05）；两组CD＋T细胞均于2～20周轻微升高，分别于8周和6周达较高值（P〉0．05）。未刺激和ConA刺激时SC组脾细胞凋亡水平分别于免疫后2～4周、2～6周升高显著，均于免疫后2周达最大值（P〈O．01或P〈O．05）；IN组均于4周显著升高并达峰值（P〈O．01）。结论日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj26GST）疫苗可诱导脾细胞的增殖，增加cD＋T细胞的数目，抑制脾细胞的凋亡而发挥保护性免疫应答。
- 张丽李文桂谭建蓉
- 关键词：日本血吸虫脾细胞增殖脾细胞凋亡
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗诱导小鼠脾细胞增殖、凋亡及亚群变化的研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗诱导BALB/c鼠脾细胞增殖、凋亡及亚群的动态变化。方法将88只BALB/c小鼠随机分为2组,每组44只,分别经口服和滴鼻接种日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周每组剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,经SjAWA刺激培养(设原液和ConA刺激对照组)后采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测脾细胞增殖情况;经Annexin V-FITC和碘化丙啶(PI)双染色后采用流式细胞仪检测脾细胞凋亡率;采用流式细胞仪检测免疫小鼠脾CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群百分比。结果口服组和滴鼻组小鼠脾细胞增殖均于免疫后6周(口服组原液、SjAWA刺激及ConA刺激时分别为0.609±0.144、0.638±0.013及0.638±0.013;滴鼻组三者分别为:0.687±0.009、0.705±0.006及0.728±0.002)达高峰;口服免疫组小鼠脾细胞凋亡率无论有无刺激物作用,均在免疫后4周(原液和ConA刺激组峰值分别为0.092±0.005和0.126±0.002)达最高水平,而滴鼻免疫组在免疫后8周(原液和ConA刺激组峰值分别为0.086±0.005和0.109±0.008)达峰值;口服组CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群分别于免疫后6周(0.321±0.001)和8周(0.080±0.001)达峰值,滴鼻组CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群分别于免疫后8周(0.327±0.010)和12周(0.082±0.002)达峰值,口服组较滴鼻组峰值提前。结论日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞增殖、T细胞亚群升高和抑制脾细胞凋亡,产生有效的免疫应答。
- 谭建蓉李文桂覃婷
- 关键词：两歧双歧杆菌细胞增殖
- 日本血吸虫重组Bb疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠不同时间诱导的免疫应答作用被引量：2
- 2015年
- 目的：探讨日本血吸虫重组两歧双歧杆菌（rBb）疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠后不同时间诱导的免疫应答作用,阐明该疫苗的免疫应答机制。方法：将88只BALB/c小鼠随机分为2组,每组44只,分别经皮下注射（皮下注射组,SC组）和鼻腔黏膜（鼻腔黏膜接种组,IN组）接种免疫小鼠,在免疫后0-20周每2周每组随机取4只小鼠,无菌取脾,制备悬浮脾细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测脾细胞增殖活性,流式细胞仪（FACsort）检测T细胞亚群和脾细胞凋亡率,双抗体夹心ELISA法检测脾细胞上清液中干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）和白细胞介素17（IL-17）的动态变化。结果：与免疫0周时比较,SC组小鼠脾细胞增殖活性于免疫后8周达到峰值（P〈0.05）,IN组小鼠于免疫后4周达到峰值（P〈0.05）。与免疫0周时比较,SC组和IN组小鼠CD4＋T细胞均于免疫后8周达到峰值（P〈0.05）;CD8＋T细胞分别于8周和6周达到峰值,但差异无统计学意义（P〉0.05）。与免疫0周时比较,2组小鼠脾细胞上清液中IFN-γ水平均于免疫后2周达到峰值（P〈0.05）,SC组和IN组IL-17水平分别于免疫后14和12周达到峰值（P〈0.05）。与免疫0周时比较,SC组小鼠脾细胞凋亡率于免疫后2周达到峰值（P〈0.05）,IN组于4周达到峰值（P〈0.05）。IN组与SC组小鼠各检测指标比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：经皮下注射和鼻腔黏膜途径接种的日本血吸虫重组Bb疫苗早期即可诱导小鼠产生有效的免疫应答,以Th1型免疫应答为主,2种免疫途径所诱导的免疫应答无明显差异。
- 张丽李文桂谭建蓉
- 关键词：日本血吸虫脾细胞
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗诱导BALB/c鼠脾细胞增殖、亚群及细胞因子的动态变化被引量：4
- 2015年
- 目的观察日本血吸虫重组Bb（p GEX-Sj32）疫苗诱导免疫鼠脾细胞免疫应答的动态变化,探讨该重组疫苗的免疫机制。方法 88只BALB/c鼠随机分为口服组和滴鼻组,口服组小鼠经口服单次接种106克隆形成单位（CFU）重组疫苗,滴鼻组小鼠经滴鼻单次接种105CFU重组疫苗;于免疫后0~20周内间隔2周每组随机剖杀4只小鼠,取脾并制备脾细胞悬液,分别经未刺激（脾细胞悬液）、Sj AWA刺激和Con A刺激培养。MTT法检测脾细胞增殖效率,流式细胞术检测脾CD4＋T细胞和CD8＋T细胞亚群变化,双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中TNF-α、IL-10和IL-12表达水平。结果与0周相比,未刺激、Sj AWA刺激和Con A刺激时,口服组和滴鼻组脾细胞均分别在免疫后2~16周和2~18周发生极显著增殖（P〈0.01）;两组CD4＋T细胞亚群均于免疫后2~12周显著升高（P〈0.01）,CD8＋T细胞亚群在观察期间升高不明显;不同培养条件下,口服组脾细胞因子TNF-α、IL-10和IL-12水平均分别在免疫后2~14周、2~18周和2~14周升高,于8周、10周和6周达峰值;滴鼻组3者分别在免疫后2~14周、2~18周和2~18周升高,于8周、10周和8周达峰值。结论日本血吸虫重组Bb（p GEX-32）疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。
- 谭建蓉李文桂覃婷
- 关键词：日本血吸虫细胞增殖细胞因子
