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山羊PTHrP基因干扰重组腺病毒的制备与鉴定: 甲状旁腺激素相关蛋白(Parathyroid hormone related protein, PTHrP)具有广泛的生物学作用,在哺乳动物泌乳期间可促进机体的骨转移,使得钙由骨组织转移至乳汁中。本研究通过制备山羊PTH...; 邢瑞芳; 关键词：山羊 PTHRP RNA干扰腺病毒; 文献传递

抗山羊ΔfosB基因表达产物抗体的制备及应用: 2010年; ΔfosB是fosB基因的自然截短型,稳定存在于许多组织中,在脂肪细胞和成骨细胞的形成和分化中起到重要作用。ΔFosB蛋白可能与钙在骨和乳腺中的代谢有关,并且调控钙从骨向乳腺转移的信号通路。将奶山羊的ΔfosB基因亚克隆到pET32a载体得到pET32a-ΔfosB原核表达载体,IPTG诱导其在大肠杆菌中表达,纯化融合蛋白免疫兔子制备多克隆抗体。ELISA检测显示抗体效价达1:51200,Western blotting结果显示制备的抗体能特异性检测原核表达的ΔFosB蛋白以及在HEK-293细胞中表达的ΔFosB蛋白。进一步的组织差异表达检测表明ΔFosB在山羊的乳腺、骨髓、脑髓、肌肉、心脏、肝和肺组织中均有表达。; 郑惠玲祝珍珍安俊辉杨振宇邢瑞芳闫林慧; 关键词：山羊原核表达多克隆抗体

山羊PTHrP基因干扰重组腺病毒的制备与鉴定: 甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)是在生命过程中广泛表达的一种分毫分泌性蛋白质，具有参与组织器官生长发育、促进细胞增殖分化、影响心肌收缩和心率等多种生物学功能。研究报道哺乳动物乳腺中的PTHrP表达量在泌乳期达到峰值，且...; 邢瑞芳郑惠玲安俊辉; 关键词：山羊 RNA干扰腺病毒

山羊PTHrP基因CDs区克隆及其融合蛋白的表达: 2010年; 【目的】克隆山羊甲状旁腺相关肽(Parathyroid hormone related protein,PTHrP)基因,并进行原核表达,获得具有生物学活性的融合蛋白。【方法】无菌采集山羊乳腺组织,采用TRIZOL法提取总RNA,RT-PCR克隆山羊PTHrP基因全CDs区。将山羊PTHrP基因全CDs区插入pET-32a(+)表达质粒构建pET-PTHrP质粒,经酶切和测序鉴定后,将其转化E.coliBL21(DE3)菌株,经2mmol/LIPTG、37℃诱导表达8h后,进行SDS-PAGE和Westernblotting分析。【结果】获得了山羊PTHrP基因全CDs区,长534bp(GenBank登录号GU573787);酶切和测序显示,原核表达载体pET-PTHrP构建成功;SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,在E.coliBL21(DE3)中成功诱导表达了pET-PTHrP融合蛋白。【结论】克隆了山羊PTHrP基因,获得了PTHrP融合蛋白。; 杨振宇郑惠玲邢瑞芳祝珍珍安俊辉; 关键词：原核表达蛋白纯化山羊

山羊PTHrP基因的多克隆抗体制备和组织表达图谱分析被引量：4: 2011年; 旨在获得山羊PTHrP多克隆抗体,检测其在山羊各组织中的表达图谱,以便进一步研究山羊PTHrP的功能。本研究构建山羊PTHrP基因的原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达获得融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后多点免疫大耳白兔,制备多克隆抗体,最后使用West-ern blot检测PTHrP在山羊各组织中的表达。结果,酶切和测序显示原核表达载体构建成功;SDS-PAGE电泳结果说明融合蛋白(约36.5 ku)被成功纯化;间接ELISA检测所制备的抗体效价达1∶51 200;表达谱显示PTHrP在山羊乳腺、肾脏、垂体、脑、心脏、肝脏、骨、肌肉、脾脏等组织中均有表达。本研究成功制备了山羊PTHrP的多克隆抗体,发现PTHrP在山羊各组织中广泛表达。; 郑惠玲杨振宇祝珍珍安俊辉邢瑞芳; 关键词：原核表达多克隆抗体山羊

山羊PTHrP基因干扰重组腺病毒的制备与鉴定被引量：2: 2011年; 甲状旁腺激素相关蛋白(Parathyroid hormone related protein,PTHrP)具有广泛生物学功能,对调控钙代谢具有重要作用。采用RNA干扰和重组腺病毒技术,对山羊乳腺上皮细胞中PTHrP基因表达进行沉默,为进一步研究该基因在乳腺上皮细胞中的功能奠定基础。采用BLOCK-iT shRNA腺病毒干扰系统,将设计好的寡聚shRNA-322/357经退火复性后插入穿梭质粒pENTR/CMV-GFP/U6中。经Western blotting检测干扰效率后,选择pENTR/CMV-GFP/U6-322与病毒骨架质粒pAd/PL-DEST进行同源重组,成功获得重组干扰腺病毒载体pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-322,并转染HEK-293细胞,通过包装、扩增后产生干扰重组腺病毒AD-PTHrP-322,TCID50法测定其滴度为2.0×109 PFU/mL。用AD-PTHrP-322感染山羊原代乳腺上皮细胞(MOI=200),经实时定量PCR及Western blotting检测表明在病毒感染24 h、48 h和72 h后,山羊乳腺上皮细胞中PTHrP mRNA表达量分别下调了29.2%、68.1%和82.6%(P<0.05),其蛋白表达水平也明显下调,干扰效果明显。; 邢瑞芳郑惠玲刘雪梅闫林慧安俊辉杨振宇祝珍珍; 关键词：山羊甲状旁腺激素相关蛋白腺病毒

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邢瑞芳