郭永坤
- 作品数：11 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军陆军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 10例尸头标本经额纵裂入路及鞍区的显微解剖学研究
- 2015年
- 目的对尸头标本经额纵裂入路及鞍区的显微解剖学进行研究。方法将经10%甲醛固定的10例成人尸头标本(经红、蓝乳胶血管灌注处理)作为对象,显微镜下对其行模拟经额纵裂入路鞍区手术,对该入路中的解剖结构进行观察。结果经额纵裂入路可清晰的显露鞍区结构包括嗅神经、视神经、视交叉、垂体柄、颈内动脉及分支、前交通动脉复合体、下丘脑和终板等。结论经额纵裂入路利于手术视野的暴露,鞍区显微解剖结构为手术的设计和改进提供依据。
- 娄永利郭永坤张辉闵有会
- 关键词：蝶鞍区显微解剖学
- hTfR基因在体外神经干细胞的表达研究
- 2015年
- 目的将人转铁蛋白受体(hTfR)基因克隆到慢病毒表达载体pLENTI6.3,鉴定其正确性,体外感染小鼠神经干细胞并检测其表达,为活体神经干细胞(NSCs)MR分子成像提供实验基础。方法利用聚合酶链反应技术(PCR)扩增hTfR基因,并克隆到pLENTI6.3载体;通过菌落PCR初步筛选、BamH1酶切鉴定和测序鉴定构建的pLENTI6.3-hTfR-IRESEGFP重组载体,利用Lipofectin2000试剂将PLP1、PLP2、PLP-VSVG和pLenti6.3-hTfR-IRES-EGFP共转染293T细胞进行慢病毒包装,48h后收集病毒上清。体外感染NSCs,Western bolt检测hTfR的表达。结果成功构建了hTfR基因慢病毒表达载体,包装的慢病毒颗粒成功感染NSCs,Western bolt鉴定hTfR在NSCs过表达。结论 pLENTI6.3-hTfR-IRES-EGFP慢病毒表达载体构建成功,并建立其慢病毒表达系统,为下一步进行活体干细胞MR分子成像实验研究奠定基础。
- 岳四海郭永坤
- 关键词：转铁蛋白受体慢病毒载体干细胞磁共振成像
- EB病毒性脑炎并发慢性硬脑膜外血肿1例
- 2012年
- 1病历摘要（图1）女,2岁;因突发高热、昏迷伴肢体抽搐3 d于2010年11月入住当地医院。确诊为EB病毒性脑炎,头部MRI示双顶叶高信号。经对症处理后病儿肢体及语言功能部分恢复,双眼仅存光感（皮质盲）。2011年6月入住八一脑科医院拟行神经干细胞移植。查体：左侧肢体肌力Ⅲ级,右侧Ⅴ级,左侧巴氏征（＋）。视觉诱发电位示：左侧P100潜伏期正常,波形分化及重复性尚可;
- 吴月奎郭永坤马灿吕俊梁春阳戴宜武
- hTfR报告基因慢病毒载体构建及其在神经干细胞的表达研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨人转铁蛋白受体（hTfR）基因慢病毒载体构建方法及其在神经干细胞（NSCs）中的表达情况,为NSCs的MR分子成像提供实验基础。方法利用聚合酶链反应技术伊CRl扩增hTfR基因，并克隆到pLenti6.3载体，构建出慢病毒表达载体pLentil6．3-hTfR-IRES-EGFP。利用Lipofectin2000试剂将PLP1、PLP2、PLP-VSVG和pLenti6．3-hTfR-IRES-EGFP共转染293T细胞进行慢病毒包装，48h后收集病毒上清，体外感染NSCs。细胞流式筛选稳定表达hTfR的细胞，通过实时定量PCR和Westernboltting检测hTfR的表达，细胞免疫荧光技术对过表达的hTfR进行亚细胞的定位。结果成功构建危珊基因慢病毒表达载体，包装的慢病毒颗粒成功感染NSCs。实时定量PCR和Westernboltting鉴定出hT瓜在NSCs中过表达，hTfR基因表达相对值为2．275±0．281。细胞免疫荧光检测到过表达的hTfR主要在细胞膜上表达。NSCs分化后，hTfR在胶质细胞和神经元中稳定表达。结论本研究所用方法能成功构建hTfR慢病毒表达载体并筛选出稳定表达hTfR的NSCs系,为下一步活体内移植NSCs行MR分子成像实验研究奠定了基础。
- 郭永坤张业森刘春颖戴宜武黄瑾姚慧吴炳山姚学勤杨志军徐如祥
- 关键词：转铁蛋白受体慢病毒载体神经干细胞增强型绿色荧光蛋白
- 经额底前纵裂入路显微手术治疗鞍区病变的解剖研究
- 2015年
- 目的对经额底前纵裂入路视野下的鞍区重要结构及其解剖学参数作客观分析,为其显微手术临床应用提供数据支撑。方法以9具成人尸头标本为研究对象,模拟经额底前纵裂入路显微手术过程,在手术显微镜下观察该入路条件下鞍区关键解剖结构、显露范围及手术操作范围;并深入解剖,观察重要血管、神经及其毗邻结构。结果鸡冠至前床突、视神经管颅内口、视交叉前缘及垂体柄的距离分别为40.4±3.2、35.6±3.5、39.8±3.6、42.1±3.9 mm;眉间至各部分的距离分别为69.9±4.2、63.4±4.3、68.1±4.8、72.6±5.3 mm。经额底前纵裂入路可良好暴露下嗅三角、视神经、视交叉等重要结构;终板面积为(50.9±2.9)mm2,终板到额叶前段距离为(57.6±2.8)mm。结论经额底前纵裂入路不仅适用于鞍区局部病变的手术,还可用于其上方、前上方及向三脑室生长的病变,本研究对鞍区重要结构及解剖学参数的客观观察可为临床医生设计手术入路、改进手术操作技巧提供指导。
- 娄永利郭永坤张辉闵有会
- 关键词：鞍区病变显微手术
- 人转铁蛋白受体基因慢病毒表达载体的构建和鉴定
- 2015年
- 目的将人转铁蛋白受体(hTfR)基因克隆到慢病毒表达载体pLENTI6.3,并鉴定其正确性,为活体干细胞MR分子成像提供实验基础。方法利用聚合酶链反应技术(PCR)扩增hTfR基因,并克隆到pLENTI6.3载体;经过菌落PCR初步筛选、Bam H1酶切鉴定和测序鉴定构建的pLENTI6.3-hTfR-IRES-EGFP重组载体。结果通过PCR技术成功扩增了hTfR基因;hTfR基因片段重组到pLENTI6.3载体;菌落PCR和酶切鉴定,凝胶电泳结果均显示得到和理论大小相符的片段;DNA测序结果与Genbank序列完全一致。结论 pLENTI6.3-hTfR-IRES-EGFP慢病毒表达载体构建成功,为下一步进行活体干细胞MR分子成像实验研究奠定基础。
- 杨志军郭永坤张业森戴宜武姚学勤徐如祥
- 关键词：转铁蛋白受体慢病毒载体干细胞磁共振成像
- 转铁蛋白受体基因在大鼠脑内表达成像的研究被引量：1
- 2013年
- 基因治疗是目前神经系统疾病的一种重要前沿治疗方法,已应用于多种疾病的治疗[1],病毒载体作为一种基因转移工具已被广泛用于基因治疗和细胞分子生物学研究[2].转铁蛋白受体基因是目前研究较多的磁共振报告基因之一[3],其配体转铁蛋白能够通过配体-受体系统通过血脑屏障[4].我们以转铁蛋白受体基因（TfR）为研究对象,利用核共振成像（MRI）的活体示踪技术将这些探针特异性结合的脑内转基因神经细胞.一、材料与方法1.材料：健康成年SD大鼠12只（清洁级）,Buker Sigma 7.0T超导型磁共振,转铁蛋白纳米铁螯合物（Tf-USPIO）购自北京万德高科.
- 张业森郭永坤姚慧徐如祥戴宜武杨志军
- 关键词：成年SD大鼠转铁蛋白受体基因成像脑内细胞分子生物学
- 显微外科手术对颅脑肿瘤患者症状缓解情况和生活质量的影响被引量：9
- 2016年
- 目的研究显微外科手术对颅脑肿瘤患者症状缓解情况和生活质量的影响。方法选择2012-01—2014-12我院收治的颅脑肿瘤病人80例,其中脑桥小脑角肿瘤20例,岩斜区肿瘤13例,丘脑-基底节区肿瘤10例,蝶骨嵴脑膜瘤11例,颅前窝底肿瘤11例,小脑肿瘤15例。(1)脑桥小脑角部肿瘤:通过乙状窦后入路进行显微外科手术进行全切或次全切治疗;(2)岩斜区肿瘤患者:通过改良后的乙状窦前入路对患者进行显微外科手术,肿瘤的部分将被暴露的部分或全部行切除手术;(3)丘脑基底节区部肿瘤患者:作3cm×3cm颅内的骨窗,使用电凝对其作一切口,切口直径约2cm,进行全切或次全切手术;(4)蝶骨峭部肿瘤:作5cm长的直切口及3cm×3cm骨窗,行显微外科的全切或次切手术;(5)颅前窝底肿瘤,右额眉间上或眉上切口入路;(6)小脑肿瘤患者,切口取枕下旁正中。显微镜下切除肿瘤。结果手术后患者出现头疼、头晕、内分泌症状、恶心呕吐、肿瘤压迫症状等临床症状的患者例数较手术前明显降低(P<0.05),术后3个月和6个月患者的生活质量较术前均明显提高(P<0.05)。结论在采用显微外科手术方法对颅脑肿瘤患者的治疗后,患者头痛、头晕、内分泌症状、恶心呕吐、肿瘤压迫症状等临床症状得到了明显缓解,且生活质量得到明显提高和改善。
- 张衍张辉岳四海郭永坤
- 关键词：显微外科手术颅脑肿瘤生活质量
- 神经干细胞活体示踪的研究现状与前景
- 2013年
- 神经干细胞（neuralstemcells，NSCs）是一类具有自我更新能力和多分化潜能的细胞，在一定的条件可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。近年来，NSCs移植治疗神经系统疾病中的有效性和潜能日益受到重视，已在诸多中枢神经系统疾病显现出独特的优势，具有广阔的应用前景[1-3]。但NSCs移植治疗的疗效机制目前仍不详。为了明确NSCs移植后症状改善的原因，了解细胞移植后的生存状态，区分移植细胞和宿主细胞，监测移植后NSCs在宿主内的活力、分化、迁移、代谢机制以及整合情况，需要对移植的NSCs进行非侵袭性活体示踪。
- 郭永坤杨志军徐如祥
- 关键词：神经干细胞细胞移植分子影像学
- Tf-USPIO纳米微粒的合成及TfR转基因神经干细胞过表达的研究
- 2016年
- 目的合成Tf-USPIO纳米微粒以及建立稳定表达TfR的神经干细胞。方法利用慢病毒转染神经干细胞,通过流式细胞仪筛选出稳定表达TfR的神经干细胞,运用WB检测其表达水平。将Tf与USPIO进行偶联,合成Tf-USPIO纳米微粒,通过DLS方法测出USPIO和Tf-USPIO的直径分别为(36±0.7)nm,(43.5±0.08)nm。结果慢病毒成功的转染神经干细胞,通过流式细胞仪器筛选出稳定表达的神经干细胞,并用WB证实了TfR的过表达;通过偶联的方法合成了稳定的Tf-USPIO微粒。结论成功构建了TfR神经干细胞系,合成出稳定的Tf-USPIO纳米微粒。
- 杨志军白妙春张业森郭永坤戴宜武
- 关键词：转铁蛋白受体
