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FGF21基因优化及其生物活性研究被引量：6: 2012年; 成纤维细胞生长因子21(FGF21)是FGF家族的一员,它具有独立、安全以及有效地调节生物体内血糖水平的能力。为了提高FGF21蛋白的活性,将人FGF21(hFGF21)与鼠FGF21(mFGF21)的功能区互换,构建了一种新的FGF21基因(命名为hmFGF21)。通过基因重组的方法构建SUMO-hmFGF21表达载体后,转化大肠杆菌Rosetta中诱导表达。对融合蛋白进行纯化和酶切,获得的hmFGF21突变体纯度在95%以上,并在细胞水平和动物水平上检测了突变体的生物学活性。结果表明,与野生型hFGF21相比,相同菌量hmFGF21可溶性蛋白表达量提高了约2倍。人肝细胞模型HepG2的糖吸收实验显示,hmFGF21的葡萄糖吸收显著优于野生型hFGF21。2型糖尿病动物速效降糖实验和长效降糖实验表明,hmFGF21的降糖效果显著优于野生型hFGF21。这些结果说明,野生型hFGF21经优化改造后显著提高了其生物学活性。; 叶贤龙高华山王文飞任桂萍刘明瑶何昆张雅坤赵景壮于丹李德山; 关键词：葡萄糖吸收 2型糖尿病

人FGF21突变基因及制备重组人FGF21蛋白方法: 本发明公开了人FGF21突变基因及制备重组人FGF21蛋白方法。本发明将人FGF21基因进行突变，突变后碱基序列为SEQ IDNO.1所示，突变后的基因在原核细胞中的表达量有显著提高。本发明还提供了一种提高人FGF21蛋...; 任桂萍李德山高华山刘铭瑶王文飞; 文献传递

定点突变FGF21提高表达量研究被引量：2: 2013年; FGF21是一类具有重要糖脂代谢调节功能因子,是治疗2型糖尿病候选药物。但其在大肠杆菌中表达量低且主要以包涵体形式表达,为此根据FGF21与FGF家族同源序列差异,对FGF21进行定点突变以提高其表达量。以pSUMO-FGF21表达载体为模板,在突变位点两端设计引物,采用定点突变方法,将FGF21141位甘氨酸(G)突变为苯丙氨酸(F),构建突变FGF21表达载体pSUMO-mutFGF21;在大肠杆菌中进行表达,纯化mutFGF21蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析突变蛋白,HepG2细胞糖吸收试验检测突变蛋白活性。结果成功对pSUMO-hFGF21进行突变,突变蛋白在大肠杆菌中成功表达,经SDS-PAGE分析,主要以可溶形式表达;与野生型FGF21(hFGF21)相比,表达量提高50%。Western blot表明mutFGF21可与FGF21抗体特异性反应。糖吸收试验显示mutFGF21具有与hFGF21一样生物活性并存在剂量依赖性,相比hFGF21,mutFGF21活性略有提高,说明定点突变FGF21(141位G突变为F)可显著提高FGF21表达量。; 李德山曹荣邱高华山任桂萍刘明瑶; 关键词：定点突变表达量

治疗Ⅱ型糖尿病创新药物的研究: 李德山任桂萍李璐刘向宇王文飞刘铭瑶孙国鹏李晋南姜媛媛高华山侯玉婷于艺雪王菁; 分别克隆了鼠源FGF-21基因和人源FGF-21，在原核系统进行表达，利用融合标签纯化有活性的鼠源FGF-21和人源FGF-21。以鼠成纤维细胞3T3-L1为细胞模型，发现FGF-21具有调节脂肪细胞吸收葡萄糖的作用。在...; 关键词：; 关键词：创新药物胰岛素

应用抗体工程技术研发治疗类风湿性关节炎创新药物的研究: 李德山任桂萍李璐王文飞朱慧萌吴云舟高华山徐黎明李晋南; 《应用抗体工程技术研发治疗类风湿性关节炎创新药物的研究》项目(编号：2006RFXXS002)成功建立了基因工程抗体研发的关键技术平台，如抗体基因的克隆、单链抗体和Fab抗体基因文库的构建、细菌和酵母展示技术的建立、鼠抗...; 关键词：; 关键词：类风湿性关节炎治疗基因工程抗体药物

人源FGF-21在脂肪细胞糖代谢中的作用被引量：6: 2009年; 近年来研究发现,成纤维细胞生长因子(FGF)-21是一种新的代谢调节因子.为了深入研究人源FGF-21(hFGF-21)的生物活性,本实验利用SUMO高效表达载体,高效表达成熟的hFGF-21,并利用小鼠3T3-L1脂肪细胞检测hFGF-21的糖代谢活性.实验结果表明,hFGF-21可促进脂肪细胞的葡萄糖吸收,且葡萄糖吸收效率呈剂量依赖性.hFGF-21作用4h即可促进脂肪细胞糖吸收,其活性可持续24h以上.hFGF-21与胰岛素共同作用的葡萄糖吸收效果,明显优于它们的单独作用结果,说明hFGF-21与胰岛素发挥协同作用.脂肪细胞经hFGF-21预处理后,显著增加了胰岛素促进脂肪细胞吸收葡萄糖的效率,说明hFGF-21可以增加胰岛素的敏感性.本实验为临床应用hFGF-21治疗糖尿病,增加胰岛素敏感性提供了依据.; 李晋南刘铭瑶侯玉婷任桂萍高华山张振宇李德山; 关键词：糖代谢胰岛素抵抗

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高华山