刘开春
- 作品数：9 被引量：28H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划江苏省“青蓝工程”基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 两株不同宿主来源的基因Ⅶ型新城疫病毒的生物学特性比较及全基因组序列分析
- 引言新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起禽类的一种以呼吸道、消化道、胃肠道和中枢神经系统损伤为特征的急性、高度接触性传染病,是危害养禽业的重要传染病之一。本实验室前期已分离得到鸡...
- 刘开春孟春春陈素娟仇旭升李仕超孙英杰谭磊宋翠萍彭大新丁铲
- 家禽疫苗诱导的粘膜免疫应答被引量：3
- 2014年
- 本文首先对黏膜免疫系统组成、特征和黏膜免疫应答的机理研究进展进行了论述,同时归纳比较了几种主要禽病疫苗的免疫接种途径和刺激黏膜免疫应答的相关性,为日后更好地利用黏膜免疫研制和应用家禽疫苗奠定理论基础。
- 刘开春孟春春仇旭升孙英杰谭磊宋翠萍彭大新丁铲
- 关键词：黏膜免疫家禽疫苗
- 伪狂犬病病毒gN基因缺失株的构建及其在小鼠上的免疫效力分析
- 2014年
- 为了确定伪狂犬病病毒(PRV)gN基因的功能,以PRV-JSZ双基因缺失株rPRV-gE^-/TK^-和疫苗株Bartha K61为亲本株,通过同源重组技术构建这两种病毒的gN缺失株。PCR扩增鉴定和序列分析结果显示成功获得了gN缺失株rPRV-gE^-/TK^-/gN^-和rPRV-Ba-gN^-。与亲本株相比,rPRV-gE^-/TK^-/gN^-在PK15细胞上早期增殖速度较慢,但效价无明显变化;rPRV-Ba-gN^-在PK15细胞上的增殖速度和效价显著降低。rPRVgE^-/TK^-/gN^-和rPRV-gE^-/TK^-的LD_50均大于1×10~6 TCID_50,rPRV-Ba-gN^-的毒力低于Bartha K61。与亲本株相比,gN缺失株免疫小鼠可提供较好的抗体水平和攻毒保护率。PRV gN基因的缺失可进一步降低病毒的毒力,提高免疫保护力。
- 胡艳芬管萌刘开春陈素娟彭大新刘秀梵
- 关键词：伪狂犬病病毒毒力免疫保护
- 新城疫病毒的准种与进化研究
- [目的]本研究旨在通过高通量测序技术对新城疫弱毒分离株及传代突变株进行准种进化分析。[方法]新城疫病毒F蛋白的裂解位点(112位-117位氨基酸)是决定其毒力的关键位点。本研究使用特异性反转录引物结合高保真反转录酶和DN...
- 孟春春仇旭升于圣青刘开春刘光清丁铲
- 六株鸽源新城疫病毒的分离、鉴定及生物信息学分析被引量：10
- 2014年
- 新城疫是严重危害世界养禽业的一种禽类传染病。近年来,鸽新城疫的流行越来越严重,引起了养殖户和兽医工作者的广泛关注。本研究在4批发病鸽组织病料中分离到了4株鸽源新城疫强毒株和2株鸽源弱毒株。病毒分离株经鸡胚有限稀释法纯化5次后,新鲜尿囊液用于提取病毒RNA。经RT-PCR扩增、测序得到分离株的F基因和HN基因序列。通过对F基因的遗传进化分析发现,4株鸽源强毒株属于ClassⅡ基因Ⅵb亚型,2株鸽源弱毒株与Class II基因II型疫苗株La Sota高度同源。进一步遗传进化分析结果显示,4株鸽源新城疫病毒强毒株与目前国内流行株属于同一遗传分支,这些毒株与欧洲流行株亲缘关系十分相近,而与中国20世纪90年代鸽源分离株遗传距离稍远,因此推测当前鸽源流行强毒株可能源自欧洲。生物信息学分析显示鸽源毒株HN蛋白345~353位的一个线性抗原表位发生了改变,而血清学实验显示La Sota疫苗株和鸽源毒株的交叉血凝抑制存在明显差异,暗示鸽源毒株已经发生了抗原性变异。因此,使用鸡疫苗株La Sota免疫鸽存在免疫失败的风险,需要研发鸽专用新城疫病毒疫苗用于鸽新城疫的防疫工作。
- 李仕超仇旭升刘开春周锦萍刘健鞠厚斌谭磊孙英杰宋翠萍刘佩红丁铲
- 关键词：新城疫病毒鸽源F基因HN基因
- 鸡源ADAR2基因克隆及其抗新城疫病毒作用研究被引量：3
- 2017年
- 目前对家禽中双链RNA特异性腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on double-stranded RNA,ADAR)的种类、组织分布及其功能尚不明了。本研究中以刀豆素、poly I:C以及新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)作为刺激物诱导鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)中ADARs基因上调,扩增获得鸡ADAR2基因的mRNA。为了鉴定ADAR2的抗病毒作用,本研究构建了能够偶联有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的ADAR2重组真核表达质粒,转染DF1细胞,结果显示在过量表达ADAR2的细胞中,NDV的增殖受到了显著抑制,表明ADAR2在NDV感染过程中发挥重要的抗病毒作用,这为进一步研究鸡RNA编辑酶对NDV RNA编辑奠定了基础。
- 张耀丹汪伟李继红刘开春孟春春孙英杰谭磊宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲
- 关键词：新城疫病毒RNA编辑抗病毒作用
- 鸡传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗的构建及其免疫研究被引量：4
- 2015年
- 应用筛选出的鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)结构蛋白S1基因的T细胞抗原表位盒、Australia T株和M41株S1基因的B细胞抗原表位,定向克隆入真核表达载体p VAX1,构建成5个真核表达质粒:p VAX-S1T+M、p VAXS1B-M41、p VAX-S1B-T、p VAX-S1T+S1B-M41、p VAX-S1T+S1B-T。将每组提取制备的质粒溶液通过腿部肌肉多点注射免疫7日龄SPF雏鸡,28日龄时加强免疫1次,同时设立PBS组作为对照免疫组。分别在首免前及免疫后7、14、21 d以及二免后10 d翅静脉采血并分离血清,用间接ELISA方法检测抗体效价。二免后10 d用IBV病毒液攻毒测定保护率。ELISA抗体效价结果显示:二免后10 d各免疫组抗体水平达到最高,p VAX-S1B-T、p VAX-S1T+S1B-M41和p VAX-S1T+S1B-T组与PBS组相比差异均具有显著统计学意义(P<0.05),p VAX-S1、p VAX-S1T+M和p VAX-S1B-T组与PBS组相比差异具有极显著统计学意义(P<0.01)。攻毒结果表明,p VAX-S1、p VAX-S1B-T组的保护效率均为75%,高于PBS组(12.5%),表明表位抗原成分能够有效发挥保护效力,与S1全基因疫苗组保护率相当。本研究结果为研制安全有效的新型IBV疫苗提供了新的途径。
- 刘芳谭磊陆凤范瑾刘开春王欣廖瑛仇旭升孙英杰宋翠萍王桂军丁铲
- 关键词：传染性支气管炎病毒抗原表位核酸疫苗免疫研究
- 两株不同宿主来源的基因VII型新城疫病毒的生物学特性比较及全基因组序列分析被引量：8
- 2015年
- 为研究不同宿主来源的新城疫病毒(NDV)的生物特性及分子特征,本研究比较了两株(Ch/CH/SD/2008/128和Du/CH/SD/2009/134)同属ClassⅡ基因VII型的NDV分离株的生物学特性,并采用RT-PCR方法扩增及测定两株病毒的全基因组序列。结果显示,两株病毒对雏鸡具有相同的高致病性,但鸡源分离株Ch/CH/SD/2008/128对雏鸭致死率高达70%,而鸭源分离株Du/CH/SD/2009/134对雏鸭致死率仅为20%。全基因组序列比较分析显示:两株病毒的基因组长度均为15 192 nt,裂解位点为112RRQKQF117,属于典型的强毒特征,并且两者之间同源性超过96%。Ch/CH/SD/2008/128的F和HN蛋白中某些氨基酸位点与其他VII型病毒存在差异,这可能是导致该病毒对鸭具有高致病性的原因。结果表明两株不同宿主来源的ClassⅡ基因VII型NDV在遗传信息方面差异不大,但对鸭的致病力具有明显差异。
- 刘开春孟春春陈素娟仇旭升李仕超孙英杰谭磊宋翠萍彭大新丁铲
- 关键词：新城疫病毒全基因组序列宿主
- H5N1亚型禽流感病毒缺失跨膜区M2基因的原核表达及其单克隆抗体的制备
- 2014年
- 为制备针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)M2蛋白的单克隆抗体,将H5N1亚型AIV缺失跨膜区的M2基因(sM2)克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,通过IPTG诱导表达,获得可溶性的36ku sM2融合蛋白。以100μg纯化的sM2融合蛋白免疫8周龄BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。以sM2融合蛋白作为包被抗原,通过ELISA方法检测,将M2融合蛋白抗原检测阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆筛选,获得4株单克隆抗体,分别被命名为1A9、2D4、3E6和4E7,亚类分别为IgG2b、IgG1、IgG2a、IgG2a。间接免疫荧光试验显示,单克隆抗体与不同clade的H5亚型AIV感染的MDCK细胞均产生特异性荧光反应,可用于H5亚型AIV的检测。
- 柴茂许晨旭管萌刘开春陈素娟彭大新刘秀梵
- 关键词：H5N1亚型禽流感病毒单克隆抗体
