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刘智宇

作品数：8 被引量：19H指数：3
供职机构：西南大学园艺园林学院南方山地园艺学教育部重点实验室更多>>
发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
相关领域：农业科学更多>>

合作作者

文献类型

  • 7篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 8篇农业科学

主题

  • 5篇甘蓝
  • 5篇SVP
  • 5篇FLC
  • 4篇酵母
  • 4篇酵母双杂交
  • 3篇芥菜
  • 3篇开花
  • 2篇蛋白
  • 2篇异源
  • 2篇结球
  • 2篇结球甘蓝
  • 2篇SPT
  • 2篇C蛋白
  • 2篇FL
  • 2篇雌蕊
  • 1篇蛋白质相互作...
  • 1篇异源蛋白
  • 1篇运输信号
  • 1篇体外
  • 1篇体外表达

机构

  • 8篇西南大学

作者

  • 8篇刘智宇
  • 7篇王志敏
  • 7篇汤青林
  • 7篇宋明
  • 5篇杨朴丽
  • 3篇许俊强
  • 2篇张丹华
  • 1篇李念祖
  • 1篇丁宁
  • 1篇孙梓健
  • 1篇江为
  • 1篇王小佳
  • 1篇谷慧英
  • 1篇陈竹睿

传媒

  • 3篇园艺学报
  • 2篇中国蔬菜
  • 1篇作物学报
  • 1篇植物生理学报

年份

  • 3篇2014
  • 3篇2013
  • 2篇2012
共 8 条 记 录，以下是 1-8
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排序方式：
开花负调因子芥菜BjSVP与甘蓝BoFLC的异源互作研究
2013年
为阐明开花负调因子BjSVP（源于种子春化型作物芥菜）与BoFLC（源于绿体春化作物甘蓝）异源聚合后在开花调控路径中的互作机制，从芥菜酵母重组质粒pGADT7．SjSVP分别亚克隆含MI、MIK、K、IKC、KC、IK、IKlLlK2L2、IKlLlK2、IKlLl、IKl、I结构域的11个SVP截短体（sjsve,al～BjSVPAll），构建猎物质粒pGADT7—13jSVPAl～pGADT7一BjSVPAll并转化酵母Y187菌；从甘蓝中克隆了BoFLC和BoFLCzq基因，构建诱饵质粒pGBKT7．BoFLC、pGBKT7．BoFLCzq并转化酵母Y2HGold菌。酵母双杂交表明：芥菜BjSVP能与甘蓝BoFLC相互作用，在QDO／X／A培养基上长出蓝色菌落，激活酵母报告基因AURl-C、HIS3、ADE2、MELl。截短体BjSVPA2～BjSVPA5也能与BoFLC相互作用，而BjSVPA7～BiSVPAll不能与BoFLC互作。由此表明BjSVP完整的K域（BjSVP3）可独立作用于BoFLC，但K域亚域（K1、K2、K3）或者连接区（L1、L2）缺失突变后不能介导该作用。作用强度分析表明：BjSVP的I域能增强该蛋白互作，但M域和C域可能会干扰该作用；芥菜BiFLC被甘蓝BoFLC或BoFLCzq替换后，可明显增加作用强度；甘蓝FLC的I域第20位、K域第65位和C域第32位氨基酸的变异很可能与作用强度相关。
汤青林刘智宇杨朴丽宋明王志敏
关键词：芥菜甘蓝FLCSVP酵母双杂交
甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP体外表达及相互作用被引量：7
2013年
甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP可能存在相互作用,从而调节开花时间。为进一步的验证该相互作用,以甘蓝‘ZQ’为材料,扩增了594 bp的FLC cDNA和726 bp的SVP cDNA序列,它们分别编码197和241个氨基酸,且均属MIKC型蛋白。NCBI比对发现FLC与BoFLC3同源性高达98%,SVP与BoSVP-a同源性高达99%。将甘蓝FLC和SVP分别与原核表达载体pET43.1a融合,构建重组质粒pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP,并转化宿主菌大肠杆菌BL21,均能够在体外表达目的蛋白。利用免疫共沉淀的原理及pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP融合蛋白序列中的6×His标签能与Ni+结合的特点,结合SDSPAGE,检测到体外表达蛋白FLC与SVP能相互作用并形成复合体,这为深入研究FLC与SVP互作机理及探讨其与抽薹开花因子的相互作用提供了理论依据和技术基础。
杨朴丽张丹华刘智宇许俊强王志敏汤青林宋明
关键词：甘蓝FLCSVP体外表达蛋白质相互作用
结球甘蓝雌蕊发育调控因子SPT与HEC1的基因克隆及相互作用
2014年
为研究SPT和HEC及其相互作用对甘蓝雌蕊发育的影响,以结球甘蓝自交不亲和系E1为材料,提取雌蕊总RNA,根据拟南芥中SPT和HEC1基因设计引物,采用同源克隆方法克隆SPT基因,其序列1085 bp,开放阅读框(ORF)1062 bp;HEC1基因ORF 696 bp。通过cDNA推导得到的氨基酸序列表明,SPT编码353个氨基酸残基,预测分子量为37.67 kD,pI为6.83;HEC1编码231个氨基酸残基,预测分子量为25.26 kD,pI为10.2。两基因在各器官中均表达,但SPT在果实和雌蕊中表达量最高,而HEC1在根和花蕾中的表达量最高。为检测两者的相互作用,构建原核表达质粒pCold I-SPT和pGEX-HEC1,pull-down试验表明两蛋白能够在体外相互作用。同时构建pGBKT7-SPT、pGADT7-HEC1及互换载体pGBKT7-HEC1和pGADT7-SPT酵母表达载体,分别转化酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后均未出现自激活和毒性现象,融合后的二倍体酵母均能在SD/–Trp–Leu–Ade–His/X-α-gal/AbA板上长出蓝色菌斑,表明SPT和HEC1能够相互作用激活下游的HIS3、AUR1-C、MEL1和ADE2报告基因,酵母双杂交试验结果与Pull-down检测一致,说明SPT和HEC1能够相互作用以调控雌蕊的发育。
许俊强孙梓健刘智宇杨朴丽汤青林王志敏宋明王小佳
关键词：结球甘蓝雌蕊SPT相互作用酵母双杂交
芥菜开花调控因子SVP与FLC蛋白互作的结构域筛选与鉴定被引量：7
2012年
为阐明芥菜开花路径核心调节子SVP与FLC相互作用的结构域，从酵母重组质粒pGADT7SVP、pGBKT7FLC分别亚克隆了5个SVP截短体（SVPl～5）和5个FLC截短体（FLCl～5）。SVPI一5与FLCl～5编码蛋白的结构域均分别为MI、MIK、K、IKC和KC。利用酵母双杂交体系，分别构建酵母猎物质粒pGADT7SVPl—5与诱饵质粒pGBKT7FLCl～5，并转化对应的酵母Y187、Y2HGold菌。酵母转化子Y187[pGADT7SVP2～5]能与Y2HGold[-pGBKT7FLC]融合，并可在选择性固体培养基QDO／X／A上长出蓝色菌落，表明FLC能与截短体蛋白SVP2～5异源结合，SVP的K域（SVP3）可独立作用于FLC蛋白。此外，Y187[pGADT7SVP]×Y2HGold[pGBKT7FLC2～5]也能同时激活报告基因AURl．C、HIS3、ADE2、施z，，表明FLC的K域（FLC3）也可独立作用于SVP。进一步研究发现：Y187pGADT7SVP3]xY2Ht30ld[pGBKT7FLC3]正向杂交以及Y187I-pGADT7FLC3]×Y2HGoldl-pGBKT7SVP3]载体互换后杂交均可相互作用，表明SVP的K域（SVP第96～173位氨基酸区域）与FLC的K域（FLC第114～167位氨基酸区域）能够异源结合，是介导SVP与FLC蛋白互作的关键结构域。
汤青林李念祖宋明丁宁陈竹睿刘智宇王志敏
关键词：芥菜SVPFLC酵母双杂交
长距离运输信号FT的开花调控机制被引量：1
2012年
FLOWERING LOCUST(FT)是长距离运输信号物质,调节营养生长与生殖发育的转变,对开花调控意义重大。FT主要在叶片中表达,受光周期等多个途径调控,并以FT蛋白而非mRNA转运到顶端分生组织处,激活一系列下游基因,从而诱导开花。本文就FT基因的表达机制、FT蛋白的长距离运输、及其在顶端分生组织中诱导成花的机理等进行了综述,并结合FT的研究现状展望了未来的研究方向。
刘智宇汤青林宋明王志敏
关键词：FT
K域的亚域介导芥菜开花负调因子SVP与FLC同源和异源蛋白互作
开花是植物从营养生长时期向生殖生长的转换，是植物生命周期中的一个重要发育阶段，它决定了植物能否完成有性繁殖。开花时间的早晚，决定了果实，种子等主要植物产品产量上市时间。因此植物开花的研究对于生产和育种具有重大的经济价值。...
刘智宇
关键词：芥菜
文献传递
甘蓝开花抑制因子FLC家族氨基酸序列差异及其对FLC/SVP聚合化的影响被引量：3
2014年
为深入研究甘蓝Flowering Locus C(FLC)家族与SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP)蛋白互作的分子机理及其对开花的调控作用,从甘蓝‘ZQ-67’材料中克隆了5个FLC家族基因(记为BoFLCy1～BoFLCy5)。它们均编码MIKC型蛋白,按进化关系其编码蛋白可分为两类:BoFLCy3和BoFLCy5为第Ⅰ类,仅在C域有1个位点变异;BoFLCy1、BoFLCy2和BoFLCy4为第Ⅱ类,仅在K、C域分别有1、2个位点变异。酵母双杂交显示:甘蓝BoFLC家族蛋白均可与BoSVP蛋白互作;但BoFLCy4蛋白最为敏感,其N端插入3个氨基酸TET会破坏该作用。β–半乳糖苷酶活性分析表明:BoFLCy1～BoFLCy5与BoSVP互作强度差异显著,强弱关系为:BoFLCy1>BoFLCy2>BoFLCy3>BoFLCy5>BoFLCy4,该家族蛋白KC域内的变异位点若为疏水氨基酸则有利于FLC/SVP聚合。进一步分析突变BoFLCy4蛋白IK域内的保守位点发现:蛋白作用强度可能不受I域的这些保守性亲(疏)水氨基酸(第63、77位)影响,而会受到K域保守氨基酸(第120、121、135、157位)的亲(疏)水性调节。
刘智宇杨朴丽江为谷慧英王志敏宋明汤青林
关键词：甘蓝FLCSVP酵母双杂交
结球甘蓝雌蕊调控转录因子SPT基因的克隆与序列分析被引量：1
2013年
以结球甘蓝E1为材料,提取花蕾总RNA,反转录cDNA。根据拟南芥SPT基因设计引物,采用同源克隆的方法从中克隆SPT基因序列1 085 bp,开放阅读框1 062 bp。通过cDNA推导得到的氨基酸序列分析表明,BoSPT编码353个氨基酸残基,预测分子量为37.67 kD,pI为6.83。经过EcoRⅠ和KpnⅠ限制酶双酶切后,构建原核表达质粒pET43.1a-BoSPT转化表达菌株E.coli Rosetta(DE3),通过SDS-PAGE检测该蛋白的表达。经Smart-embl预测其具有bHLH家族结构域,位于序列第173~221位氨基酸残基处。进化树表明结球甘蓝BoSPT与拟南芥AtSPT和筷子芥AlSPT的亲缘关系较近。BoSPT基因的原核表达得到纯化的融合蛋白。
杨朴丽许俊强刘智宇王志敏张丹华汤青林宋明
关键词：结球甘蓝雌蕊SPT基因克隆
全选 清除 导出
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