刘绵学
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
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- 相关领域：生物学农业科学化学工程更多>>
- 甘蓝型油菜BnFAD8基因编码序列的克隆和表达谱分析被引量：3
- 2011年
- 通过比对拟南芥等同源基因,克隆了甘蓝型油菜FAD8基因中的保守序列.以得到的FAD8(Fatty Acid Desaturase 8)保守序列片段为信息探针,在GenBank的EST数据库中检索高度同源的EST,并通过人工拼接及RT-PCR得到油菜该基因的全长为1299 bp的cDNA序列,命名为BnFAD8.序列分析结果中发现该基因符合质体定位的ω3脂肪酸脱饱和酶序列特征.通过比较22℃和8℃处理的甘蓝型油菜的BnFAD8基因表达谱,发现该基因在常温下仅存在痕量表达;而在低温条件下在叶中表达出现较大幅度的升高.推测BnFAD8基因和油菜的低温调控存在联系.
- 刘绵学王茂华向俊蓓杨毅李旭锋
- 关键词：甘蓝型油菜基因克隆
- 甘蓝型油菜ω-3脂肪酸脱饱和酶基因克隆和原核表达及转油菜研究
- 刘绵学
- 甘蓝型油菜FAD2基因调控序列的克隆及瞬时表达分析被引量：1
- 2009年
- 油酸去饱和酶FAD2(fatty acid desaturase2)是广泛存在于植物中的一种能催化油酸脱氢生成亚油酸的还原酶。根据GenBank上已知的甘蓝型油菜FAD2基因设计引物,以甘蓝型油菜(Brassica napusL.)叶片总DNA为模板,进行TAIL-PCR扩增,获得约1.4kb片段并测序。序列比对结果说明该片段为已知的FAD2基因编码区上游序列。将该片段进行不同长度的5′端缺失,并用缺失后的序列替换pBI221-LUC质粒上的CaMV35S启动子,构建了甘蓝型油菜瞬时表达载体,进行油菜原生质体瞬时表达的初步研究,结果表明该序列5′端-669bp至-1019bp对报告基因表达水平有较大的影响。结合启动子预测分析结果,此片段中可能存在的赤霉素应答元件、光调控元件等顺式作用元件对FAD2基因的表达调控具有重要作用。
- 王茂华刘绵学李德款杨毅李旭锋
- 关键词：甘蓝型油菜
- 甘蓝型油菜BnKCR2基因cDNA的克隆和真核表达载体的构建
- 2007年
- [目的]为了克隆甘蓝型油菜的BnKCR2基因,并构建其真核表达载体,以期得到高芥酸含量的油菜。[方法]根据GenBank中甘蓝型油菜3-酮酯酰-CoA还原酶(BnKCR2)的cDNA序列设计引物,提取蜀杂九号油菜叶片的总RNA,进行RT-PCR扩增,将产物与T-A克隆载体pMD18-T连接,通过中间载体pMD18-T和pBluescript将BnKCR2分别正向、反向导入pBI121质粒载体,构建BnKCR2基因的正向和反向表达质粒。[结果]通过甘蓝型油菜总RNA的RT-PCR扩增,成功克隆到一个960 bp的BnKCR2基因;重组质粒pMD18-BnKCR2测序结果与NCBI中甘蓝型油菜cDNA(AY196197)序列的相似性达99%;而蛋白质序列仅有1个氨基酸之差,且蛋白质天然构象未改变,BnKCR2是反向连接克隆。[结论]通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌,为通过根癌农杆菌介导法将BnKCR2基因导入油菜奠定了基础。
- 王慧王茂华刘绵学杨毅李旭锋
- 关键词：真核表达载体
- 甘蓝型油菜脂肪酸链延长酶基因FAE1的克隆与原核表达被引量：4
- 2007年
- 脂肪酸延长酶1(FAE1)是广泛存在于植物中并定位于内质网上的一种能催化脂肪酸碳链延长的酮脂酰CoA合成酶.根据Genbank上已知的植物FAE1基因设计引物,以从甘蓝型油菜叶片中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增,获得了1380bp的片段.回收该片段,并连接到pMD18-T载体测序.序列比对结果说明了该片段与植物中已知的FAE1序列有极高的相似性,并且不存在内含子序列.将该片段通过高保真酶扩增,EcoRⅠ酶切消化后定向克隆到pGEX-2T表达载体中,在IPTG诱导下于28℃表达出Mr76×103的蛋白质条带.用兔抗GST多克隆抗体做第一抗体进行Western-blot检测,并获得阳性检测结果.这为甘蓝型油菜脂肪酸链延长酶基因FAE1功能的进一步研究奠定了基础.
- 郭经宇王茂华刘绵学王慧徐柯杨毅李旭锋
- 关键词：甘蓝型油菜融合蛋白原核表达
- 一种新型耐热基因TR1在水稻中的应用研究
- 杨毅李旭锋吴先军王健美彭旭东张珣刘志斌蒋彦刘绵学高梅熊方建徐培州刘峰廖泳祥张红宇
- 该项目由四川大学、四川贝安迪生物基因工程有限公司与四川农业大学共同完成。通过对TR1转基因水稻的耐热性研究，分析TR1基因对水稻耐热性和农艺性状的影响，获得了耐热性能明显高于野生型水稻的转基因水稻株系，完善和充实了在植物...
- 关键词：
- 关键词：水稻
- 甘蓝型油菜FAE1基因启动子的克隆和瞬时表达载体的构建及功能分析被引量：1
- 2011年
- 油菜脂肪酸延长酶基因FAE1是广泛存在于植物中并定位于内质网上的一种能催化脂肪酸碳链延长的酮脂酰CoA合成酶,根据GenBank上已知的植物FAE1基因启动子序列设计引物,以从甘蓝型油菜(Braccica napus.L)叶片中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增,获得了1 328 bp的片段.回收该片段,并连接到pMD18-T载体测序.序列在NCBI进行blast比对,同源性为99.78%,说明该片段与植物中已知的FAE1基因的启动子序列有极高的相似性.将该片段替换掉改造后的pBI221上面的35S启动子从而构建了原生质体瞬时表达载体.然后通过PEG介导的方式将含有FAE1启动子驱动的荧光素酶报告基因(LUC)表达载体导入油菜原生质体中,研究报告基因表达量,证明出脱落酸(ABA)影响了报告基因的表达,随着ABA浓度的不断增加,LUC的表达量呈现逐步下降的趋势.
- 胡浩王茂华刘绵学杨毅
- 关键词：荧光素酶
