将杂优-2平菇菌丝进行液体培养,发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE(diethylaminoethyl)-Sepharose fast flow层析和Superdex-200 prep grade层析等方法纯化,获得了电泳纯的杂优-2平菇漆酶,并对纯化的漆酶进行了部分酶学性质研究。结果显示,杂优-2平菇漆酶比活力为115 U/mg,分子质量约为244.0 k D,亚基分子质量约为85.6 k D。最适反应p H值和最适反应温度分别为5.0和55℃,在p H 6.0~8.0及40~55℃范围内稳定性较好;最适条件下,以2,2’-联氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)为底物的Km值为2.1 mmol/L,最大反应速率(vmax)为0.117μmol/(min·L)。Fe^(2+)、抗坏血酸对该酶活性具有完全抑制作用,乙二胺四乙酸、Ag^+、Mg^(2+)、Li^+对该酶活性影响较小;草酸、甲醇、正丁醇、K^+、Ca^(2+)、Ba^(2+)、Zn^(2+)、Cd^(2+)、Pb^(2+)、Mn^(2+)、Co^(2+)对该酶活性有不同程度的抑制作用;Cu^(2+)激活作用不明显;尿素、乙醇、异丙醇对该酶活性具有激活作用。
为获得更多成本廉价且易得的酪氨酸酶来源,为云南莴笋尖酪氨酸酶抑制剂的研究提供参考,选取云南莴笋尖为实验材料,通过匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析等方法纯化,获得电泳纯的酪氨酸酶,并对纯化后的酪氨酸酶进行部分酶学性质研究。结果表明,云南莴笋尖中酪氨酸酶的比活力为20.62 U/mg,分子质量约为995.40 k D,亚基分子质量约为65.23 k D。最适反应温度和最适反应p H值分别为60℃和8.0,在p H 6.0~8.0及20~40℃范围内较稳定。最适条件下,以左旋多巴为底物的K_m值为1.567 mmol/L,vmax为0.037 6 μmol/(min·L)。乙醇、异丙醇、正丁醇对该酶活性有不同程度的抑制作用;甲醇、Co^(2+)、Mn^(2+)、Pb^(2+)、Ag^+、Cd^(2+)、Ba^(2+)、Ca^(2+)对该酶活性有不同程度的激活作用,Co^(2+)、Mn^(2+)对该酶具有显著的激活作用,低浓度的Zn^(2+)、Cu^(2+)、草酸、抗坏血酸对该酶有激活作用,高浓度时有抑制作用。尿素、EDTA、Li^+、K^+、Mg^(2+)对该酶活性影响较小。
库拉索芦荟叶皮经匀浆、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose fast flow层析和Superdex-200prep grade层析,获得电泳纯的β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase,BGL).纯化结果是β-葡萄糖苷酶比活力为98.48U/mg,纯化倍数为328.27倍,酶活性回收率为9.87%,全酶分子质量约为69.3kD,亚基分子质量约为69.7kD.酶学性质研究表明:β-葡萄糖苷酶的最适反应温度和最适反应pH值分别为40℃和5.0;在20~30℃及pH4.0~8.0范围内稳定性较好;最适条件下,以pNPG为底物的K_m值为2.21mmol/L,V_(max)为1.381μmol/(min·L).乙醇,抗坏血酸,Mn^(2+),K^+对该酶活性具有激活作用;SDS,Cu^(2+)对该酶活性具有强烈抑制作用;异丙醇,EDTA,尿素,Mg^(2+),Li+对该酶活性影响较小;甲醇对该酶有双重作用.
