夏菁
- 作品数：21 被引量：110H指数：6
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教委科研基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术机械工程更多>>
- 人PGI基因siRNA慢病毒质粒的构建及对白血病细胞增殖的影响被引量：2
- 2013年
- 目的构建共表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和人磷酸葡萄糖异构酶(phosphoglucose isomerase,PGI)基因的慢病毒载体,初步探讨干扰人PGI基因对白血病细胞增殖的影响。方法 RT-PCR、Westernblot检测人单核细胞、K562、KG1-α、HL-60细胞中PGI mRNA和蛋白表达水平,筛选高表达PGI的白血病细胞系;构建人PGI基因siRNA的慢病毒载体及阴性对照,经293T细胞包装后,获得可表达人PGI基因siRNA的慢病毒载体及阴性对照;分别使用重组病毒(干扰组)、原始病毒(阴性对照组)和等量PBS(空白对照组)转染白血病KG1-α细胞,筛选稳定转染细胞株。RT-PCR和Western blot检测干扰组、阴性对照组及空白对照组KG1-α细胞PGI基因表达水平;CCK-8检测各组细胞增殖情况并作生长曲线。结果 PGI基因在白血病KG1-a细胞中高表达;成功构建了稳定低表达PGI的白血病细胞株(KG1-α-siPGI);低表达PGI基因的KG1-α细胞增殖能力较空白对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了低表达PGI基因的白血病KG1-α细胞株,干扰PGI基因的表达能够抑制KG1-α细胞的生长。
- 赵亮李静魏强游智梅夏菁李丹阳陈地龙
- 关键词：白血病慢病毒载体RNA干扰细胞增殖
- 整合素β2促进人乳腺癌细胞MCF-7的迁移,侵袭与粘附被引量：11
- 2019年
- 本研究主要目标为探讨整合素β2 (ITGB2)的高表达对人乳腺癌细胞MCF-7迁移,侵袭与粘附能力的影响。本研究首先构建了ITGB2过表达质粒,实验设阴性对照组(pcDNA-3.1+)与ITGB2基因过表达组(pcDNA-3.1+/ITGB2)。ITGB2过表达质粒转染MCF-7细胞后,采用逆转录PCR与Western blotting方法分别检测ITGB2 mRNA转录水平与蛋白翻译水平;流式细胞术检测细胞周期的改变;划痕实验检测细胞横向迁移能力;Transwell小室实验检测细胞纵向迁移能力及侵袭能力;人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)粘附实验检测癌症细胞与血管内皮细胞之间的粘附能力,Western blotting实验检测侵袭相关指标MMP9,整合素经典通路中FAK蛋白磷酸化水平的改变。研究结果表明:转染ITGB2过表达质粒后,MCF-7细胞中ITGB2的m RNA水平(p<0.01)与蛋白水平(p<0.05)均显著增高;流式细胞术实验中,实验组S期的细胞所占比例与对照组无明显差异;划痕实验与Transwell小室实验中,实验组的迁移侵袭能力显著性增强;人脐静脉血管内皮细胞粘附实验中,实验组乳腺癌细胞与血管内皮细胞的粘附能力强于对照组(p<0.05);且Western blotting结果显示MMP9和p-FAK蛋白水平明显上升。由以上结果可得出结论,过表达ITGB2后会增强人乳腺癌细胞MCF-7的迁移、侵袭与粘附能力,而对其增殖能力无明显影响。
- 刘梦瑶苟理尧夏菁姜亚运万群唐敏孙恃雷张彦
- 关键词：乳腺癌迁移粘附
- 人参皂苷单体Rh2抑制人白血病KG1-α细胞增殖并促进其凋亡被引量：10
- 2014年
- 目的研究人参皂苷单体Rh2对人白血病细胞KG1-α增殖、凋亡的影响。方法取对数生长期的KG1-α细胞,分别用不同浓度的人参皂苷单体Rb1、Rg1、Rh2诱导,另设空白对照组,阳性对照用阿糖胞苷。运用CCK-8法检测各单体对细胞增殖的影响,筛选出最强作用单体。用筛选出的皂苷单体诱导KG1-α细胞,用annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测人参皂苷单体对细胞凋亡的影响,PI染色流式细胞术检测对细胞周期的影响,Western blot法检测人参皂苷单体处理的KG1-α细胞中P53、P21、cylin D1、cleaved caspase-3的表达。结果 CCK-8实验结果显示人参皂苷Rh2、Rb1、Rg1、阿糖胞苷的IC50分别为(75、207、268、1058)μmol/L;与对照组相比,经人参皂苷Rh2诱导24、48 h后,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术结果表明凋亡率由(5.37±0.02)%,分别增加至(8.37±0.015)%、(33.22±1.67)%(P<0.05);同样处理,细胞周期检测结果显示:G0/G1期由(26.78±3.14)%,分别上升至(29.26±2.31)%、(44.77±2.26)%;S期由(65.43±2.22)%,分别下调至(51.46±0.57)%、(48.29±1.80)%;Western blot结果显示,cleaved-caspase 3、P53和P21在75μmol/L Rh2处理后表达上调,而cyclin D1表达下调。结论人参皂苷Rh2可抑制KG1-α细胞的增殖,促进细胞凋亡。
- 游智梅陈地龙魏强赵亮夏菁李丹阳李静
- 关键词：RG1细胞细胞增殖细胞周期
- 线粒体解偶联蛋白1(UCP1)对三阴性乳腺癌进程调控及其机制研究
- 三阴性乳腺癌（Triple Negative Breast Cancer,TNBC）由于其发病率、复发率及恶性程度高的特点成为当今女性健康的巨大威胁,然而,目前仍缺乏有效的靶向治疗手段。此前,线粒体中蛋白在多项研究中被发...
- 夏菁
- 关键词：三阴性乳腺癌
- 人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其机制被引量：5
- 2014年
- 目的研究人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法取对数生长期的CNE2细胞,用不同浓度的Rh2(20、40、60、80、100μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),并设对照组(正常培养),采用MTT法检测各组细胞的增殖活力;用最适作用浓度的Rh2分别处理CNE2细胞24、48、72 h,采用Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡率、周期分布以及膜电位的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、CyclinD1、P53的表达水平。结果 Rh2对CNE2细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,60μmol/L Rh2作用72 h为最适作用浓度和时间。经60μmol/L的Rh2作用48、72 h后,凋亡细胞数目增多,凋亡细胞体积变小,细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂,边集程度增大等现象。与对照组比较,经60μmol/L的Rh2作用24、48、72 h,CNE2细胞的凋亡率逐渐增加(P<0.01);G0/G1期细胞比例逐渐升高(P<0.01),S期(P<0.01)和G2/M期细胞比例逐渐下降;细胞的膜电位逐渐降低(P<0.05);促凋亡蛋白Bax、激活型Caspase-3和P53蛋白表达上调(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和细胞周期相关蛋白CyclinD1表达下调(P<0.05)。结论人参皂苷单体Rh2具有抑制CNE2细胞增殖,使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能是通过Caspase/CyclinD1信号通路实现的。
- 袁轲刘泽洪游智梅夏菁魏强赵亮李静
- 关键词：人参皂苷鼻咽癌CNE2细胞细胞增殖CASPASE-3CYCLIND1
- 在体内外模拟的乳腺脂肪微环境中研究BMP9对乳腺癌细胞生长的影响被引量：1
- 2016年
- 骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins,BMP9)是骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)家族的一员,具有多种生物学功能。本实验主要是从体内、外两个层面模拟的脂肪微环境中,研究BMP9对乳腺癌细胞生长的影响。将前脂肪细胞3T3-L1诱导为成熟脂肪细胞后,利用Transwell小室共培养技术,将其分别与MDA-MB-231细胞、感染腺病毒AdGFP的对照MDA-MB-231/AdGFP细胞、感染腺病毒AdBMP9的MDA-MB-231/AdBMP9细胞进行共培养。针对共培养体系中的肿瘤细胞,采用EdU实验检测增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot检测cyclin D1、c-myc蛋白水平的变化。将乳腺癌细胞与脂肪细胞以1:5的比例混合后,注射到裸鼠皮下,监测瘤体的生长并绘制生长曲线;取离体肿瘤组织进行免疫组化染色,检测瘤体中ki67、cyclin D1和c-myc的表达情况。结果显示,显微镜下可以观察到诱导后的3T3-L1细胞出现明显脂滴,能被油红O染色,证明成熟脂肪细胞诱导成功;AT-PCR及Western blot证实BMP9过表达成功;BMP9可以抑制共培养体系中肿瘤细胞的增殖(p<0.05),使其周期阻滞在G_2/M期(p<0.05),并降低cyclin D1和c-myc的蛋白水平(p<0.05)。动物移植瘤实验发现,BMP9高表达实验组的瘤体明显小于空白组和载体感染对照组;瘤体免疫组化结果显示,实验组ki67、cyclin D1和c-myc的表达均明显下调。本研究证明在体内、外模拟的脂肪微环境中,BMP9可以抑制乳腺癌细胞的增殖,且这种作用可能是通过下调cyclin D1和c-myc来实现的。
- 王婷王晋蜀张志慧姜亚运夏菁苟理尧刘梦瑶张彦
- 关键词：乳腺肿瘤细胞生长
- 下调PGI/AMF基因协同人参皂苷Rh_2对白血病KG1α细胞作用的体外研究被引量：1
- 2014年
- 目的通过干扰RNA的方法下调人磷酸葡萄糖异构酶/自分泌因子(PGI/AMF)基因的表达,研究人PGI/AMF基因协同人参皂苷Rh2对白血病KG1α细胞的影响。方法将对数生长期KG1α细胞及转染细胞分成对照组和用药组,对照组常规培养,药物组细胞培养体系中分别加入30、45、60、75、90μmol/L的人参皂苷Rh2,各组分别培养24、48、72 h后,CCK-8检测人参皂苷Rh2对白血病KG1α及转染株细胞增殖的影响;台盼蓝检测人PGI基因对KG1α细胞增殖的影响;Antibody Array检测人参皂苷Rh2对Akt通路蛋白的影响;Western blotting检测下调PGI/AMF与人参皂苷Rh2在mTOR、Raptor、Rag蛋白表达变化方面的相关性。结果人参皂苷Rh2抑制KG1α的增殖;下调PGI/AMF使KG1α对人参皂苷Rh2更加敏感;下调PGI基因抑制细胞增殖;Antibody Array结果显示人参皂苷Rh2通过下调P38、mTOR、Akt、AMPKα、PARP、Bad的表达影响KG1α增殖;Western blotting结果显示下调PGI基因通过抑制mTOR、Rag、Raptor表达与人参皂苷Rh2产生协同作用调节人白血病细胞增殖。结论下调PGI基因协同人参皂苷Rh2抑制KG1α细胞的增殖。
- 游智梅陈地龙赵亮魏强夏菁李丹阳李静
- 关键词：人参皂苷RH2MTOR
- 人参总皂苷TSPG联合EPO对白血病细胞KG1-α增殖的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨人参总皂苷TSPG单独或联合人促红细胞生成素(EPO)对人白血病细胞KG1-α增殖的影响及机制探讨。方法体外培养KG1-α细胞,选取处于对数生长期的细胞用于实验。空白对照组予以常规培养;人参总皂苷TSPG组分别加入25、50、100、200、400 mg/L TSPG;人参总皂苷+EPO组加入上述等量TSPG,同时加入0.5 U/L EPO,并设置EPO对照组。培养3、7、14 d后用CCK-8法检测TSPG单独或联合EPO对KG1-α细胞增殖的影响;运用Real-time PCR技术检测EPOR、STAT5、Jak2、AKT等EPO/EPOR通路相关基因的表达。用Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、P53、P16等蛋白的表达,EPOR蛋白的表达及其活性。结果人参总皂苷TSPG在体外能明显抑制KG1-α细胞的增殖,100μmol/L为最适作用浓度,7 d为最适作用时间,如果在EPO存在的条件下,其最适浓度则降低到75 mg/L;与对照组相比,在EPO存在的条件下人参总皂苷TSPG诱导可明显使细胞阻滞于G0/G1期,若不使用EPO则TSPG对细胞周期无影响;Real-time PCR检测结果显示TSPG诱导组KG1-α细胞内EPOR、Jak2、STAT5等由EPOR介导的JAK-STAT通路相关基因的表达均随TSPG浓度增加而降低,其中高浓度具有明显差异(P<0.05);Western blot检测经单独使用TSPG处理了7 d的KG1-α细胞,与对照组相比,其EPOR及p-EPOR表达明显下调,Jak2、STAT5、p-STAT5、Bcl-2蛋白表达下调,而Bax、Cleaved Caspase-3表达增高,P53及P16无变化;然而添加了EPO处理的各组p-EPOR、Jak2、p-STAT5、P53及P16的表达明显增加,Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3的表达没有变化。结论 TSPG能下调细胞内由EPOR介导的Jak-STAT通路相关蛋白的表达,并降低EPOR的活性,进而下调Bcl-2、上调Bax和Cleaved Caspase-3来促进细胞凋亡;而添加了EPO后这种作用被拮抗,抑制细胞增殖的作用是通过上调P53及P16促进细胞衰老而产生的。
- 李丹阳夏菁冯子强石庆强游智梅刘泽洪陈地龙李静
- 关键词：人参总皂苷促红细胞生成素细胞衰老
- 过表达β联蛋白和T细胞因子抑制物(ICAT)促进人宫颈癌Caski细胞的增殖和迁移被引量：4
- 2016年
- 目的探讨β联蛋白和T细胞因子抑制物(ICAT)的高表达对人宫颈癌Caski细胞增殖和迁移的影响。方法含ICAT基因腺病毒(Ad ICAT)感染Caski细胞,采用实时定量PCR检测ICAT mRNA水平,Western blot法检测ICAT蛋白水平;MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,TranswellTM小室迁移实验检测细胞迁移能力。结果 Ad ICAT感染后,Caski细胞的ICAT mRNA和蛋白水平均显著增加;过表达ICAT后,促进Caski细胞的增殖,S期细胞比例明显增加,细胞迁移能力增强。结论 Caski细胞过表达ICAT后,促进其增殖和迁移。
- 姜亚运王婷王晋蜀夏菁苟理尧刘梦瑶张彦
- 关键词：CASKI细胞迁移
- MAPK信号转导通路在人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡中的作用被引量：18
- 2013年
- 目的探讨人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡的机制。方法将对数生长期K562细胞分成对照组和人参多糖组,对照组细胞常规培养,人参多糖组细胞培养体系中加入人参多糖0.4 g/L。各组细胞培养48 h后,流式细胞术和Hoechst 33258染色法检测K562细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞p38、JNK基因表达;采用免疫荧光实验检测细胞中p-p38、p-JNK蛋白表达,测定Caspase-3的活性;Western blotting检测细胞中p38、JNK、p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3蛋白的变化。结果与对照组比较,人参多糖组K562细胞凋亡率显著增加(P<0.05),出现明显的细胞核固缩现象,K562细胞p38 mRNA与JNK mRNA明显增多。免疫荧光检测显示,p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3表达明显增强且向胞核转移;Western blotting检测显示,人参多糖组K562细胞p38、JNK总蛋白无明显变化(P>0.05);p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3有增加的趋势(P<0.05)。结论人参多糖能促进K562细胞凋亡,其作用可能是通过影响MAPK信号传导通路实现的。
- 魏强李静刘艺赵亮夏菁游智梅李丹阳陈地龙
- 关键词：人参多糖细胞凋亡MAPK信号传导通路JNK
