孔恒
- 作品数：24 被引量：76H指数：5
- 供职机构：深圳市南山区人民医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒介导双自杀基因对乳腺癌细胞的体内杀伤作用被引量：1
- 2011年
- 目的:研究慢病毒介导的KDR启动子驱动的胞嘧啶脱氨酶(CD)/胸苷激酶(TK)融合基因系统(FGW-KDRP-CD/TK)对乳腺癌细胞的体内杀伤作用。方法:培养乳腺癌MCF-7细胞,建立裸鼠荷瘤模型。荷瘤后将裸鼠随机分为4组。Ⅰ组:空白对照,荷瘤但不施加任何处理;Ⅱ组:注射慢病毒与前药(5-FC+GCV);Ⅲ组:仅注射慢病毒;Ⅳ组:仅注射前药。观察肿瘤生长速度,测量瘤体大小及重量;用RT-PCR法鉴定双自杀基因在转基因瘤组织中的表达;取肿瘤组织进行HE及PCNA免疫组化染色;流式细胞技术进行细胞周期检测。结果:第Ⅱ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,第Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差异。经RT-PCR检测发现转基因瘤组织有目的基因的表达。与第Ⅰ组(空白对照组)相比,第Ⅱ组瘤组织的PCNA表达明显下调。流式细胞仪检测细胞周期分析显示治疗后G_1期细胞比率增多,G_2/M期细胞减少。结论:FGW-KDRP-CD/TK联合前药5-FC及GCV在体内可明显抑制移植瘤的生长,细胞周期阻滞,该作用可能与抑制PCNA表达有关。
- 孔恒黄宗海陈海金陶霖玉齐柯
- 关键词：自杀基因治疗慢病毒增殖细胞核抗原
- AdVEGF-CDglyTK融合基因系统靶向治疗大肠癌的研究
- 2010年
- 目的观察腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子（VEGF）启动子驱动的CDglyTK融合双自杀基因系统（以下简称为AdVEGF—CDglyTK）对大肠癌的治疗作用，并结合研究结果进行作用机制的分析。方法采用培养细胞移植法，将人大肠癌细胞系Lovo细胞接种于裸鼠背部皮下，建立裸鼠人大肠癌移植瘤模型。将20只裸鼠随机分为4组，每组5只。分组方法：I组，注射重组腺病毒AdVEGF—CDglyTK与前药5氟胞嘧啶（5-FC）／N氧鸟苷（GCV）；Ⅱ组，仅注射前药5-FC／GCV；Ⅲ组：仅注射重组腺病毒AdVEGF—CDglyTK；Ⅳ组，空白对照，不施加任何处理。结果RT—PCR结果显示：仅在Ⅰ组、Ⅲ组扩增出融合双自杀基因CDglyTK的片段。表型及各项病理指标的检测均显示第1组裸鼠移植瘤的生长较其他3组显著受到抑制，而第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组移植瘤的生长情况无明显差异；第1组肿瘤细胞凋亡指数为38．65％±4．20％，较其他3组显著增加（F=397．530，P=0．000）；第1组肿瘤组织微血管密度计数为3．08±0．79，较其他3组显著减少（F=34．081，P=0．000）。结论AdVEGF—CDglyTK联合前药5-FC及GCV在体内可明显抑制大肠癌肿瘤的生长。其机制有二：首先该治疗系统可诱导裸鼠体内人大肠癌Lovo细胞的凋亡；其次该治疗系统在体内可明显抑制裸鼠体内大肠癌血管形成。
- 韩新军黄宗海俞金龙厉周孔恒李强
- 关键词：结直肠肿瘤基因疗法基因血管生成抑制剂腺病毒
- 青蒿琥酯诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的实验研究被引量：9
- 2007年
- 目的探讨青蒿琥酯（artesunate，Art）诱导皮肤瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及机制。方法取自愿捐献的人耳垂增生性瘢痕，采用组织块贴壁法进行细胞培养。经免疫组织化学染色鉴定后，取第3～5代成纤维细胞，采用含60、120和240mg／LArt培养液各5ml培养作为实验组，仅加入等量的培养液作为对照组。于倒置显微镜及透射电镜观察，采用流式细胞仪观察细胞凋亡及细胞周期。另取第3～5代成纤维细胞，实验组采用30、60和120mg／LArt培养液，对照组仅加入等量的培养液，观察细胞内钙离子的变化。结果原代成纤维细胞呈典型的梭形贴壁生长，免疫组织化学鉴定细胞波形蛋白呈阳性表达；倒置显微镜下观察Art在60～240mg／L浓度范围内抑制成纤维细胞生长且呈剂量及时间依赖性，细胞出现凋亡征象；透射电镜观察，各实验组出现染色质浓缩，沿着核膜排列，甚至核碎裂现象。细胞周期分析显示各实验组与对照组比较，凋亡细胞比例、处于G0～G1、S、G2～M期细胞数差异均有统计学意义（P〈0．05），实验组均出现典型的凋亡峰，且随药物浓度增加，峰值越大。Art在30～120mg／L作用成纤维细胞24h可引起细胞内钙离子浓度持续增加，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Art通过作用于成纤维细胞周期诱导细胞凋亡，细胞内钙离子浓度升高可能是其诱导成纤维细胞凋亡的机制之一。
- 孔恒余清声朱柳袁牧王肃生冀航张志华梁刚黄宗海
- 关键词：增生性瘢痕青蒿琥酯成纤维细胞钙离子浓度
- VEGFP-CDglyTK系统诱导肝癌细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子(VEGF)启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CDglyTK)对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用。方法用重组腺病毒Ad-VEGFP-CDglyTK体外感染表达VEGF的HepG2细胞,荧光显微镜观察其感染效率,然后给予前药更昔洛韦(GCV)和5-氟胞嘧啶(5-FC),在光镜、透射电镜下观察,用流式细胞术等方法观察细胞凋亡、细胞周期及细胞内DNA含量的变化。结果腺病毒对HepG2细胞的感染率随病毒滴度的增高而递增。在感染复数为100时,前药GCV和5-FC在一定范围(GCV+5-FC分别为:1mg/L+20mg/L,10mg/L+40mg/L,100mg/L+60mg/L)内呈剂量依赖性地诱导HepG2细胞凋亡;中浓度下(GCV:10mg/L,5-FC:40mg/L)作用细胞72h,透射电镜下可见HepG2细胞发生典型凋亡改变:空泡形成,染色质浓缩、沿核膜排列,甚至出现核碎裂现象。流式细胞仪测定见用药组出现典型的凋亡峰;随着药物浓度的增加,凋亡细胞所占的比例逐渐增加,实验组凋亡细胞数与对照组比较有显著性差异(P<0.01);细胞周期分析显示前药能明显抑制HepG2/CD-TK细胞的增殖,主要作用在细胞G2-M期。结论VEGF启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达VEGF的HepG2细胞,其机制与诱导细胞凋亡有关。
- 孔恒黄宗海俞金龙厉周李强杜江
- 关键词：腺病毒科细胞凋亡
- 直接手助腹腔镜与开腹脾切除的临床研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨应用直接手助腹腔镜下脾切除的可行性及近期临床疗效。方法将该院2005年1月～2007年4月收治的脾功能亢进的患者分为直接手助腹腔镜和传统开腹组各15例进行相应手术,对其临床资料进行回顾性分析。结果腹腔镜组无1例中转开腹。腹腔镜组与开腹组手术时间分别为(185±46.6)min和(158±35.6)min,两组差异无显著性(P>0.05);术中平均出血量分别为(255±45.9)mL和(523±59.5)mL,两组差异有显著性(P<0.05);肠道功能恢复时间分别为(2±0.86)d和(3±0.52)d(P<0.05);手助切口长5～7cm,开腹切口长18～25cm,两组差异有显著性(P<0.05);术后并发症发生率分别为4.2%和11.4%(P<0.05);平均住院日由开腹的12d缩短到9d。结论直接手助腹腔镜治疗脾切除能取得与开腹手术同样的治疗效果,并具有出血少、手术时间缩短、术后患者恢复快等优点。
- 俞金龙孔恒黄宗海陈海金韩新军
- 关键词：脾切除脾功能亢进症
- 双自杀基因重组腺病毒对胰腺癌细胞SW1990的体外杀伤作用被引量：1
- 2008年
- 目的研究腺病毒介导的血管内皮生长因子（VEGF）启动子驱动胞嘧啶脱氨酶（CD）／胸苷激酶（TK）融合基因系统（Ad—VEGFP—CDTK）对胰腺癌细胞SW1990增殖的影响。方法重组腺病毒体外感染表达VEGF的SW1990细胞株，用空腺病毒做对照，观察其感染效率并以RT-PCR、Western blot方法检测转基因细胞CDTK的表达，MTY法观察该体系对SW1990细胞生长增殖的影响及其旁观者效应；电镜观察细胞的病变；流式细胞仪检测细胞周期的变化和DNA含量的变化；分光光度法检测细胞内caspase-3活性。结果两种腺病毒对细胞株的感染率相似。RT-PCR和Western blot检测发现转染Ad—VEGFP-CDTK的细胞有目的基因和蛋白的表达。MTY法检测显示前药呈剂量依赖性抑制SW1990生长，且观察到该体系明显的旁观者效应。电镜下可见SW1990有凋亡改变。用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰；细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1期比率增多，G2-M及S期细胞减少。随着前药浓度的升高转基因细胞内caspase-3活性逐渐升高。结论VEGF启动子可调控双自杀基因体系抑制胰腺癌细胞SW1990增殖，并且诱导胰腺癌细胞凋亡。
- 黄宗海孔恒闫振宇陈旭
- 关键词：胰腺肿瘤腺病毒
- 基于临床和超声特征的评分系统在甲状腺结节诊断中的预测价值被引量：16
- 2019年
- 目的探讨临床结合超声的综合评分系统在诊断甲状腺良恶性结节中的预测价值。方法选取6项临床参数及6项超声参数建立量化评分系统,对745例施行甲状腺手术的患者进行分析评估。结果恶性结节患者平均分值较良性结节患者显著升高[(7.84±2.85)分vs.(4.21±1.22)分,P=0.004]。通过计算得出每一分值的恶性率,ROC曲线分析得出判断结节良恶性的最佳界点为5分,当评分大于5分时,其灵敏度为81.97%,特异度为86.91%。根据评分将甲状腺结节进行风险分层,低危:0~3分,恶性率2.44%;中危:4~6分,恶性率15.12%;高危:7~9分,恶性率81.62%;极高危:≥10分,恶性率96.43%。结论临床结合超声的评分系统可以有效预测甲状腺恶性结节的风险。
- 林秋生齐柯陈天文王红鲜魏盘妹刘尧邹天辉孔恒邓晓妃
- 关键词：甲状腺结节
- VEGF启动子驱动的双自杀基因靶向治疗乳腺癌的实验研究
- 本项目拟应用VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因系统对乳腺癌细胞MCF-7的作用研究，观察该系统在乳腺癌中的应用效果，为进一步开展自杀基因靶向治疗乳腺癌的研究提供实验依据。
研究内容和结果：
第一...
- 孔恒
- 关键词：乳腺癌细胞凋亡
- 文献传递
- 双自杀基因系统对胰腺癌细胞Capan-2的特异性杀伤作用被引量：1
- 2007年
- 目的:研究腺病毒介导的VEGF启动子驱动CD/TK融合基因系统(Ad-VEGFP-CDTK)对胰腺癌细胞Capan-2的特异性杀伤作用。方法:重组腺病毒载体体外感染表达VEGF的Capan-2细胞株,观察其感染效率,并以RT-PCR方法检测转基因细胞内CDTK的表达;然后给予不同浓度的前药更昔洛韦(ganciclovir,GCV)和5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC),MTT法观察该体系对Capan-2细胞增殖的影响及其旁观者效应;电镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞周期和DNA含量的变化;建立小鼠Capan-2细胞动物模型,计算抑瘤率。结果:两种腺病毒对Capan-2的感染率相似,其感染率随腺病毒效价的增高而递增。RT-PCR方法检测发现转染Ad-VEGFP-CDTK的细胞有目的基因表达。MTT法检测显示前药呈剂量依赖性抑制Capan-2细胞生长,且观察到该体系明显的旁观者效应。电镜下可见Capan-2细胞有凋亡改变;流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰,细胞周期分析显示治疗后细胞G0/G1期比率增多,G2/M及S期细胞减少。体内裸鼠移植瘤模型的建立成功,实验组肿瘤体积缩小。结论:VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤胰腺癌细胞Capan-2,并诱导细胞凋亡,可显著抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长。
- 孔恒黄宗海于洪波韩新军闫振宇陈旭
- 关键词：胰腺肿瘤异种移植模型抗肿瘤试验
- 青蒿琥酯对成纤维细胞和内皮细胞的选择性研究被引量：8
- 2005年
- 目的:探讨青蒿琥酯(Art)是否对成纤维细胞增殖有特异的细胞选择作用。方法:选用人胚肺成纤维细胞株(HLF)、人皮肤瘢痕成纤维细胞(HSF)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用免疫组化法鉴别细胞;MTT法检测青蒿琥酯对上述3种细胞存活与增殖的影响;光镜观察青蒿琥酯作用下细胞形态学的改变;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA的变化。结果:青蒿琥酯在30～240mg·L-1浓度范围内作用细胞24h对两种来源的成纤维细胞的增殖都具有明显的抑制作用(P<0.05),对血管内皮细胞增殖抑制作用不明显(P>0.05)。药物作用24h后,HLF、HSF、HUVEC细胞的IC50分别为:64、60、600mg·L-1。光镜下见两种成纤维细胞用药组细胞变圆,突起变短变少,胞浆颗粒增多;而内皮细胞在形态上无明显的变化。琼脂糖凝胶电泳结果显示在240mg·L-1浓度作用24h,两种成纤维细胞的DNA出现梯带状的电泳图谱,而内皮细胞的DNA无梯状条带。结论:青蒿琥酯对来源于肺和皮肤的成纤维细胞的增殖具有抑制作用,而对血管内皮细胞生长增殖无明显的影响。该药还能诱导两种成纤维细胞凋亡,而对脐静脉内皮细胞无明显诱导凋亡的作用。
- 孔恒余清声
- 关键词：青蒿琥酯成纤维细胞血管内皮细胞
