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孙伟: 作品数：13 被引量：36H指数：5; 供职机构：浙江万里学院生物与环境学院更多>>; 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省公益性技术应用研究计划项目更多>>; 相关领域：生物学农业科学更多>>

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中华鳖Dmrt1基因是雄性性别分化的关键调控因子: 在脊椎动物中,Dmrt1基因在雄性性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。本研究进行了中华鳖Dmrt1基因的cDNA序列克隆、时空表达分析、细胞定位及在性逆转中表达变化研究,同时通过慢病毒介导的RNA干扰和过表达技术,探...; 孙伟王莉钱国英葛楚天; 关键词：DMRT1 性别分化性腺发育雄性中华鳖; 文献传递

中华鳖生殖细胞对性腺分化的影响: 2023年; 为了探究爬行动物生殖细胞如何影响体细胞及生殖细胞数量是否会影响性别决定和分化,研究通过向中华鳖早期胚胎注射白消安消除了内源生殖细胞。结果显示:在白消安处理后,ZW和ZZ性腺生殖细胞数量急剧下调,几乎消失,但性腺形态没有发生明显改变,ZW性腺仍旧呈现雌性状态并表达雌性标志蛋白FOXL2和CYP19A1,ZZ性腺仍旧呈现雄性状态并表达雄性标志蛋白DMRT1和SOX9。研究表明在爬行动物中消除生殖细胞不影响性别分化。; 王金霓吴俣王子嘉黄安楼灵媛庄天依孙伟孙伟钱国英葛楚天; 关键词：生殖细胞白消安性腺分化中华鳖

红耳龟Amh基因在温度依赖型性别决定中的功能被引量：1: 2023年; 为研究Amh基因在TSD(Temperature-dependent sex determination,温度依赖型性别决定)中的功能,文章以红耳龟Trachemys scripta为TSD动物模型,分析了Amh在胚胎性腺中的精细表达特征和细胞定位;通过基因功能缺失和获得研究手段,验证了Amh在TSD中的具体功能。表达分析结果显示,Amh基因在性腺分化启动前的第15期便已呈现产雄温度(Male-producing temperature,MPT)性腺高表达;AMH蛋白主要定位在MPT性腺sertoli前体细胞上,而在各个发育时期的FPT(Female-producing temperature,产雌温度)性腺中仅检测到极其微弱的Amh mRNA和蛋白表达信号。RNA干扰实验显示,敲低Amh后的MPT性腺出现了雄性向雌性完全性逆转,雄性分化因子Sox9明显下调,雌性分化因子Foxl2和Cyp19a1显著上调;相反地,异位表达Amh后的FPT性腺则转向睾丸方向分化,Foxl2和Cyp19a1表达被抑制,Sox9表达上升。上述研究表明,Amh是启动红耳龟早期睾丸分化必需且充分的关键因子,处于TSD雄性分化分子通路上游。; 陈佳文孙伟孙伟惠航博雷建东胡佳暄王宗吉葛楚天; 关键词：温度依赖型性别决定性腺分化性逆转红耳龟

Sox8基因过表达诱导中华鳖ZW性腺的雄性分化: 2024年; 为了研究Sox8基因在中华鳖性别分化中的功能,研究利用慢病毒介导的过表达载体,在性别分化前的雌性中华鳖中过表达Sox8。通过组织学分析和生殖细胞标记蛋白VASA的免疫荧光染色发现在Sox8过表达后,50%的ZW性腺髓质区发育出睾丸特有的、含有生殖细胞的性索结构;qRT-PCR和免疫荧光结果显示雌性特异性基因Foxl2和Cyp19a1表达量显著降低,而调控睾丸发育的Dmrt1、Sox9和Amh基因表达上调。实验结果表明Sox8的过表达诱导ZW胚胎性腺往雄性方向分化,揭示了Sox8在中华鳖睾丸分化过程中的作用。; 庄天依沈佳东楼灵媛王金霓孙伟孙伟葛楚天; 关键词：过表达中华鳖

基于全基因组的龟鳖目Hox基因序列特征及进化分析: 2023年; 为对Hox基因在龟鳖目物种中进行系统地序列比较分析和进化研究,文章对目前具有染色体水平的龟鳖目基因组进行了Hox基因的鉴定,序列特征、进化和转录组分析。研究结果表明龟鳖物种的Hox基因簇是高度保守的。非重复序列的缺失导致鳖科HoxB9—HoxB13基因间区相对龟科短了10 kb。大量Hox基因编码区发生了鳖科或龟科特异的序列替换、插入和缺失。胸部骨骼发育相关的Hox基因在鳖科祖先发生了快速进化和受到正选择。Hox基因的表达具有组织、时期特异性,主要在胚胎时期的顶端外胚层嵴、背甲嵴和性腺表达。研究为龟鳖目Hox基因不同胚胎时期的多组学及表达调控分析提供了靶标,也为进一步厘清龟鳖物种演化创新提供了参考。; 黄保友楼灵媛樊嘉伟孙伟孙伟钱国英葛楚天; 关键词：HOX基因龟鳖目

中华鳖SOX9基因在胚胎期性腺中的表达模式及在性逆转中的表达变化被引量：5: 2014年; SOX9基因在脊椎动物性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。从mRNA和蛋白水平分析中华鳖SOX9基因在不同组织中的差异性表达、在胚胎性腺和成年睾丸中的细胞定位以及在性逆转中的表达变化,研究SOX9基因在中华鳖性别分化中的调控作用。Real-time PCR结果显示,SOX9基因在中华鳖雄性性腺中特异性表达。免疫荧光染色分析显示,SOX9蛋白在雄性18期胚胎性腺中开始表达,随着性腺的发育,SOX9蛋白定位于性腺Sertoli前体细胞细胞核中;而在雌性胚胎性腺并未见其表达。此外,在雌激素诱导的雄性向雌性性逆转胚胎中,SOX9基因显著下调,而在芳香化酶抑制剂诱导的雌性向雄性性逆转胚胎中,SOX9基因表达则显著上升。研究表明,SOX9基因为中华鳖雄性特异性基因,参与雄性性腺的发育过程,可能在中华鳖早期性别分化过程中起调控作用。; 王莉孙伟储经乾刘颖史思瑞葛楚天钱国英; 关键词：中华鳖 SOX9基因性别分化性逆转

雌激素受体Esr1诱导红耳龟早期卵巢分化被引量：2: 2024年; 为探究3种雌激素受体(estrogen receptor) Esr1、Esr2和Gper1在红耳龟早期胚胎性腺分化中的作用,本研究在分析受体基因表达特征的基础上,通过向性腺分化启动前的产雄温度(male-producing temperature,MPT)龟胚分别注射Esr1、Esr2和Gper1激动剂PPT、WAY 200070和G-1,从性腺形态结构、生殖细胞分布模式、性别分化关键基因和蛋白表达分布方面对处理后的胚胎性腺进行了性逆转分析。表达分析结果显示,esr1在性别分化关键时期性腺中的表达量显著高于esr2和gper1 (表达极低),且呈现产雌温度(female-producing temperature,FPT)性腺高表达。功能验证实验显示,PPT处理后的MPT性腺形态结构明显雌性化,生殖细胞呈现雌性分布模式;雄性分化关键基因dmrt1、amh和sox9 m RNA表达明显下降,雌性分化关键基因foxl2和cyp19a1 m RNA表达则显著上升;Amh和Sox9蛋白表达的荧光信号几乎消失,Foxl2和Arom蛋白被激活出现大量表达,表明性腺由雄性逆转为雌性(性逆转率:70.27%)。而WAY 200070和G-1处理后的MPT性腺仍分化为睾丸,雌雄基因和蛋白的表达及分布与雄性性腺类似。结果表明在红耳龟中,单独激活Esr1能够充分启动早期性腺的雌性分化过程,提示雌激素可能通过其受体1 (Esr1)诱导早期卵巢分化。本研究为进一步解析雌激素在龟性别决定和分化中的调控机制提供了参考。; 郭金洪杨洪哲时翔胡颖王圣云汪思凡孙伟孙伟; 关键词：雌激素受体性腺分化雌激素性逆转红耳龟

Sox9在温度依赖型性别决定中的功能初探被引量：2: 2018年; 在一些爬行动物中,个体的性别完全取决于胚胎发育过程中的环境温度,称之为温度依赖型性别决定(temperaturedependent sex determination,TSD).TSD的分子机制长期是个谜,特别是调控早期性腺分化的分子基础仍不清楚.本文通过表达分析和基因敲低手段研究了Sox9基因在红耳龟雄性性腺分化中的生物学功能,为TSD动物的性别决定和性腺发育的分子机制的研究奠定了基础.qRT-PCR显示,从性腺分化前的17期起,Sox9呈现产雄温度(male-producing temperature,MPT)性腺特异性高表达,而在产雌温度(female-producing temperature,FPT)性腺中表达水平极低.免疫组化进一步证实了SOX9蛋白的MPT特异性表达趋势,其定位于Sertoli前体细胞核中.温度置换实验显示,与MPT性腺相比,MPT→FPT性腺中(16期置换)的Sox9表达量从17期起就显著降低,表明Sox9能快速响应温度变化.同时MPT性腺经过雌激素处理后,Sox9表达量亦快速下调.功能缺失研究显示,经过Sox9-RNAi处理后,90.9%(20/22)的MPT性腺结构明显雌性化,皮质区高度发育,髓质区退化,揭示Sox9的敲低能导致雄性向雌性性逆转.上述研究表明,Sox9是红耳龟早期睾丸分化的关键调控因子,参与TSD的雄性分化通路.; 张海艳孙伟周英杰包海声蔡晗钱国英葛楚天; 关键词：SOX9基因性逆转温度依赖型性别决定红耳龟 RNA干扰

中华鳖Dmrt1基因的克隆、表达及在性逆转中的变化分析被引量：10: 2014年; 在大部分脊椎动物中,Dmrt1基因在雄性性别决定和性腺分化中起重要的调控作用.本文从m RNA和蛋白水平分析Dmrt1基因的组织差异性表达、在不同发育阶段性腺中的细胞定位及在性逆转中的表达变化,研究Dmrt1基因在中华鳖性别分化中的调控作用.Rapid-amplification of c DNA ends(RACE)结果显示,Dmrt1基因c DNA序列全长2409 bp,其中5′非编码区为230 bp,3′非编码区为1072 bp,开放阅读框为1107 bp,编码368个氨基酸,具有一个高度保守的DM结构域.荧光定量PCR和免疫组化结果显示,Dmrt1在性腺分化之前的第16期雄性性腺中开始表达,先于Amh和Sox9基因表达.随着性腺的发育,Dmrt1蛋白主要定位于性腺Sertoli细胞的细胞核上,在雌性性腺发育过程中并未见其表达.此外,在雌二醇诱导的雄性转雌性性逆转胚胎性腺中,Dmrt1表达显著下调;在芳香化酶抑制剂诱导的雌性转雄性性腺中,Dmrt1表达则显著上升.上述研究表明,Dmrt1基因是中华鳖雄性特异性基因,参与雄性性腺的发育过程,可能在中华鳖早期性别决定中起重要的调控作用.; 葛楚天孙伟桑亚鹏王莉杨克周钱国英; 关键词：DMRT1 性别决定雄性中华鳖

中华鳖Amh基因的克隆、表达及在雄性分化中的功能初探被引量：8: 2016年; 为了阐明Amh基因在中华鳖雄性性别分化中的调控作用,本研究对Amh基因进行cDNA序列克隆和表达分析,同时通过慢病毒介导的RNA干扰技术对Amh基因进行了功能验证.RACE结果显示,中华鳖Amh基因的cDNA序列全长为3233 bp,5'非翻译区为997 bp,3'非翻译区为834 bp,可读框为1401 bp,编码466个氨基酸.实时荧光定量PCR结果显示,在成体组织中,Amh基因在睾丸中高度特异性表达;在胚胎发育过程中Amh基因在性别分化启动前的第16期便开始呈现雄性特异性表达,并贯穿此后整个发育时期,而在雌性性腺中则维持非常低的表达水平.在芳香化酶抑制剂诱导的雌性向雄性性逆转胚胎性腺中Amh表达显著上升;在雌二醇诱导的雄性向雌性性腺中,Amh表达则显著下降.RNA干扰实验表明,Amh基因敲低后,ZZ(基因型雄性)胚胎性腺外形和组织结构明显雌性化,皮质区发育,而髓质区高度退化,出现雄性转雌性的性逆转现象;同时雄性分化相关基因Sox9表达下调,而雌性分化相关基因Cypl9al表达则急剧上调.上述结果表明,中华鳖Amh是雄性特异性因子,在早期雄性性别分化过程中是必需的关键基因,本研究为中华鳖性别决定机制研究奠定了基础.; 蔡晗孙伟刘豪彬包海声张海艳钱国英葛楚天; 关键词：AMH 性别决定性腺分化雄性中华鳖

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