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在线固相萃取LC-MS/MS法测定比格犬血浆中的知母皂苷B-Ⅱ: 2012年; 目的:建立简单、快速、自动化的在线固相萃取液质联用法定量测定比格犬血浆中的知母皂苷B-Ⅱ。方法:血浆样品直接进样,通过自灌的不锈钢固相萃取柱实现萃取富集过程。采用柱切换技术将被分析物在线洗脱至分析柱上实现色谱分离,最后经过电喷雾电离(ESI)源进入Finnigan线性离子肼质谱仪(LTQ),以选择离子反应(SRM)模式进行负离子检测。结果:知母皂苷B-Ⅱ的线性范围为0.98～1000 ng.mL-1,最低定量下限为0.98 ng.mL-1。日内、日间精密度(RSD)分别小于7.9%和14.2%,准确度(RE)在-1.2%～11.2%范围内。结论:该方法成功用于比格犬口服5 mg.kg-1知母皂苷B-Ⅱ后的药代动力学研究。; 陈方王清清戴舒佳赵阳马百平孙效欧伦宋海峰汤仲明; 关键词：甾体皂苷液质联用法药代动力学比格犬血浆知母皂苷

新CpG寡聚脱氧核苷酸体内抗肿瘤与增强免疫活性研究: 2007年; 目的:探讨新设计CpG寡聚脱氧核苷酸(ODN)在小鼠体内的抗肿瘤作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:建立C57BL/6小鼠腹腔、皮下荷黑素瘤肿瘤模型,腹腔注射CpGODN,观察荷瘤鼠生存时间、肿瘤生长曲线,计算抑瘤率。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中白细胞介素(IL)12和免疫球蛋白E(IgE)含量;3H-TDR掺入法检测脾脏B细胞、T细胞增殖活性;51Cr释放法检测NK细胞杀伤活性;中性红法检测腹腔巨噬细胞吞噬功能。结果:CpG10,CpG11能明显延长腹腔接种肿瘤小鼠的生存时间,与阳性对照CPG1826相比P<0.01;二者平均抑瘤率(皮下荷瘤鼠)分别为(55.2±2.3)%与(40.7±1.7)%,显著高于CpG1826[抑瘤率(17.8±7.6)%](P<0.05,P<0.01)。CpG10/CpG11可促使荷瘤小鼠血清IL-12含量显著升高(P<0.01),IgE含量显著下降(P<0.01);明显刺激B细胞、T细胞增殖能力以及NK细胞的杀伤活性(P<0.01),对腹腔巨噬细胞的吞噬功能有显著提高(P<0.01)。CpGl0免疫增强活性较CPGl826更强(P<0.05)。结论:CpGODN能激活荷瘤鼠抗肿瘤免疫反应,从而抑制小鼠黑素瘤的生长,新结构寡核苷酸的CpG10呈现优于阳性对照的良好抗肿瘤免疫效应。; 杜海燕宋海峰夏绍友李娜欧伦邹佳孙效吉爱国汤仲明; 关键词：CPG寡聚脱氧核苷酸黑素瘤白细胞介素12 免疫球蛋白E

靶向人乙型肝炎病毒siRNA的构效关系研究被引量：1: 2008年; 目的:在体外模型HepG2.2.15细胞中研究靶向人乙型肝炎病毒(HBV)小分子干扰RNA(siRNA)的构效关系。方法:靶向HBV基因不同位置合成21条siRNA,分析多条siRNA在HBV 8个基因型(共120条序列)中的保守性情况以及siRNA的二级结构特点。利用乙肝表面抗原(HBsAg)ELISA定量方法与荧光定量PCR方法检测siRNA在不同浓度下(1,10,100 nmoL/L)对HepG2.2.15细胞中乙肝病毒HBsAg和mRNA表达的抑制情况。SPSS进行定量构效关系(QSAR)分析。结果:半数(13/21)的siRNA以浓度依赖模式抑制靶基因的表达(P<0.05)。其中537,672,1263,1658等序列活性显著高于阳性对照序列。QSAR分析显示siRNA基因型同源性(P<0.01)、S/P和X区(P<0.05)与siRNA活性有紧密关系;重叠基因[S/P/前基因组(pregenome)mRNA]区域局部靶mRNA二级结构保守性、发卡环、多茎环和茎的碱基数目与siRNA活性相关(R=0.994,P=0.009)。结论:siRNA的靶点序列、siRNA本身的一级序列与二级结构对其抑制靶基因的活性有显著影响,具有明显的构效关系。优选siRNA可能作为治疗多基因型乙肝感染的候选序列。; 付洁汤仲明高新赵帆钟辉李鹏温茂荣孙效宋海峰钱小红; 关键词：定量构效关系重叠基因

聚乙二醇化胸腺素α1的非临床药代动力学研究: 目的:研究经聚乙二醇化修饰的胸腺素α1(PEG-TA1)的药代动力学特征,组织分布、排泄特点以及初步的代谢情况。方法:酶免疫吸附分析(EIA)法测定猕猴单次皮下注射(sc)低、中、高剂量(43,128和384μg·kg)...; 陈方尚明美孙效欧伦朱宝珍刘秀文汤仲明宋海峰; 关键词：聚乙二醇化胸腺素Α1 药代动力学; 文献传递

rsTRAIL药代动力学及药效学研究: 2012年; 目的:研究rsTRAIL在动物体内的组织分布、药代动力学和抗肿瘤作用。方法:采用同位素标记示踪法结合三氯醋酸(TCA)沉淀法研究rsTRAIL在荷瘤小鼠体内的组织分布及粪尿排泄,采用ELISA法测定猕猴血清中rsTRAIL浓度。结果:荷瘤小鼠iv给药后尿液和肺中酸沉放射性最高,皮下肿瘤放射性分布较低,而脑和骨髓最低。猕猴iv注射高、中、低3个剂量(1,5和25 mg.kg-1)rsTRAIL后,AUC0～t分别为(3.7±0.1),(19.7±0.8)和(103.9±5.2)μg.h-1.mL-1,末端t1/2分别为(28.3±1.0),(31.0±0.7)和(33.2±0.9)min。裸鼠肿瘤模型显示该药具有良好的抗肿瘤作用,抑瘤率达到86%。结论:猕猴iv注射不同剂量rsTRAIL后,在给药剂量范围内基本呈线性药代动力学;荷瘤小鼠iv给药后主要经尿排泄,不易通过血脑屏障。rsTRAIL具有良好的体内外抗肿瘤活性。; 董立厚孙效欧伦陈方王清清宋海峰; 关键词：肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体药代动力学

重组人生长激素在健康猕猴体内的比较药代动力学被引量：1: 2012年; 目的:比较两种国产重组人生长激素在健康猕猴体内的药代动力学,评价两种药物的相似性。方法:采用交叉自身比较设计,8只健康成年猕猴分别单次皮下注射受试品和参比品0.35 IU·kg-1;采用酶联免疫吸附分析法检测血清中药物浓度,统计矩方法计算各主要药代动力学参数;采用3P97软件参考生物等效性标准对参数进行评价。结果:方法的特异性、灵敏度、精密度和准确度均符合药代动力学研究要求。受试品与参比品的血药浓度-时间曲线基本一致,主要药代动力学参数AUC0～12 h分别为(512±102)和(476±71)μg·h·L-1;AUC0～∞分别为(538±115)和(494±77)μg·h·L-1;Cmax分别为(108±18)和(96±23)μg·L-1;t1/2分别为(2.8±0.7)和(2.2±0.7)h;MRT分别为(4.2±0.8)和(4.0±0.8)h;CLs/Fsc分别为(0.047±0.014)和(0.060±0.013)L·h-1·kg-1;Vd/Fsc分别为(0.194±0.04)和(0.24±0.06)L·kg-1。以AUC0～∞计算,受试品与参比品比较,相对生物利用度F为(109±15)%。受试品相对于参比品的生物等效性用AUC0～12 h,AUC0～∞和Cmax的90%可信区间评价分别为89.2%～114.3%8,7.4%～112.7%和98.5%～124.4%,均符合生物等效性判断标准。结论:受试品与参比品药代动力学参数评价结果满足生物等效接受标准;两种重组人生长激素在猕猴体内呈现相同的药代动力学特征。; 欧伦王清清孙效陈方董立厚邹佳宋海峰; 关键词：重组人生长激素酶联免疫吸附分析药代动力学

两种注射用重组人生长激素的比较药代动力学研究: 目的:比较研究两种注射用重组人生长激素(rHuGH)制剂的药代动力学特点差异,并进行生物等效性分析。方法:采用交叉自身比较设计。8只猕猴分别先后皮下注射受试品和参比品,用酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定猕猴血浆中rH...; 李娜欧伦尚明美孙效刘秀文宋海峰; 关键词：重组人生长激素猕猴酶联免疫吸附分析药代动力学生物等效性; 文献传递

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的药代动力学与组织分布研究被引量：5: 2011年; 目的研究聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)在动物体内的药代动力学与组织分布。方法猕猴给予不同剂量(30、100和300μg/kg)的PEG-rhG-CSF,酶联免疫吸附法(ELISA)测定猕猴血浆中PEG-rhG-CSF浓度;[125I]标记示踪法结合分子排阻色潽法观察PEG-rhG-CSF在Wistar大鼠各组织中的分布情况。结果猕猴单次sc PEG-rhG-CSF后血药浓度及系统暴露随给药剂量呈非线性增加。低、中、高剂量组达峰时间(Tmax)为6.67～12.00h,全身清除率(CL)顺序减小,药-时曲线下面积(AUC)与给药剂量不成正比。sc给药的绝对生物利用度为47.5%。与临床使用剂量的rhG-CSF(10μg/kg)相比,猕猴sc中剂量PEG-rhG-CSF后Cmax、AUC分别为(1671±357)μg/L和(45 156±9407(μg.h)/L,均明显高于rhG-CSF组(P<0.05);PEG-rhG-CSF组的T1/2β为(13±3)h,较rhG-CSF组的T1/2β(1.52±0.08)h显著增加(P<0.05);而CL为(2.3±0.5)ml/(h.kg),较rhG-CSF组的CL(19.6±2.4)ml/(h.kg)显著降低(P<0.01)。大鼠sc[125I]PEG-rhG-CSF后血清、肾、肺等组织放射性较高,2 h血清原形药物浓度达峰,肺、肠道、膀胱等组织在给药后分布较慢,8 h放射性达峰值。尿液中主要为小分子[125I]降解代谢产物;未观察到药物与血浆蛋白的结合。结论将rhG-CSF进行PEG化修饰可以显著降低系统清除率,延长体内半衰期,增加药物暴露,可达到长效目的。药物主要分布于血管床,并代谢为小分子从泌尿系统排泄,不易透过血脑屏障。; 李娜欧伦陈方孙效邹佳董立厚王清清宋海峰; 关键词：粒细胞集落刺激因子聚乙二醇药代动力学酶联免疫吸附法

实时定量PCR技术研究DNA疫苗在小鼠体内的生物分布: 2009年; 目的：建立并确证实时定量PCR（RT-PCR）定量检测生物基质中质粒DNA的方法,并应用于治疗性核酸疫苗HIV-PV的体内生物分布研究。方法：建立SYBR Green荧光定量PCR绝对定量方法（Q-PCR）,考察方法的特异性、灵敏度、精密度、准确度以及生物基质对PCR的抑制效应。小鼠尾静脉注射裸质粒DNA、小鼠尾静脉注射和灌胃2种途径免疫HIV-PV DNA疫苗,考察建立的Q-PCR方法对于不同形式的质粒DNA疫苗以及不同免疫方式的适用性。结果：Q-PCR方法可特异检测目标DNA,定量检测范围为10-10^7拷贝/100 ng基因组DNA（gDNA）,定量下限（LLOQ）为10拷贝/100 ng gDNA。批内和批间精密度分别〈11%和8%;由高至低4种浓度（10^7,10^4,100,10拷贝/100 ng gDNA）QC样品准确度分别为（1.57±0.02）%,（1.60±0.01）%,（2.20±0.02）%和（2.28±0.02）%。用Q-PCR方法成功得到不同形式DNA疫苗和不同免疫途径（尾静脉注射和灌胃HIV-PV疫苗）下该质粒DNA的生物分布模式。结论：利用RT-PCR技术,建立了符合DNA疫苗生物分布研究要求的定量检测生物基质中质粒DNA的方法学,并成功应用于不同质粒DNA疫苗形式和不同免疫途径下的DNA疫苗的生物分布研究。; 付洁李丁夏绍友宋海峰董增祥陈方孙效欧伦汤仲明; 关键词：DNA疫苗实时定量PCR 生物分布

食蟹猴单次皮下注射HM10420或Neulasta后的比较PK／PD研究: 目的:比较研究食蟹猴sc同剂量长效hG-CSF (HM10420)或PEG-G-CSF(NeulastaTM)后药代动力学 /药效动力学特征。方法:采用hG-CSF ELISA试剂盒测定血浆hG-CSF当量浓度。给药后每...; 欧伦张维孙效宋海峰尚明美汤仲明; 关键词：G-CSF 酶联免疫吸附分析食蟹猴; 文献传递

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孙效

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