孙金鹏
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 供职机构：厦门大学化学化工学院更多>>
- 发文基金：广东省教育部产学研结合项目福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母的表达及酶学性质研究被引量：7
- 2011年
- 为提高南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarcticalipase B,CALB）的表达量,根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子偏好性设计合成CALB基因,插入表达载体pPIC9K构建重组质粒pPIC9K-CALB.重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过G418抗性筛选得到多拷贝转化子.摇瓶发酵120 h后上清液酶活力达到46 U/mL,通过金属螯合层析纯化发酵液将CALB纯化了5.23倍,比活力达到856.7 U/mg,去糖基化实验显示重组CALB比野生型CALB大5 ku.实验考察了不同反应温度、pH值和金属离子对重组CALB活性和稳定性的影响,发现重组CALB最适反应温度和pH分别为30℃和6.5,在pH 5.0~8.0之间以及40℃以下有较好稳定性,金属离子（10 mmol/L）Ca2＋,Zn2＋,Mn2＋有助于CALB酶活力的提高,而Cu2＋,Ag＋,Fe3＋强烈抑制酶催化反应.
- 孙金鹏钱圣一敬科举卢英华
- 关键词：毕赤酵母分泌表达酶学性质
- 高密度培养大肠杆菌表达人角质细胞生长因子被引量：3
- 2011年
- 角质细胞生长因子(KGF)是成纤维生长因子家族(FGF)成员,与上皮细胞增殖、组织胚胎发育、创伤修复等过程密切相关.在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆KGF基因,并进行诱导表达条件的优化.使用合成培养基,应用底物反馈流加策略将糖浓度控制在较低水平,在发酵罐中高密度培养,细胞干质量浓度可以达到46 g/L.发酵罐培养的大肠杆菌在对数生长期经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在可溶性和不溶性产物中都得到了具有免疫学活性的GST-KGF融合蛋白,经过ELISA检测,发酵液中可溶性表达的KGF产率达到108μg/L.该研究为利用原核表达系统生产活性KGF建立了优化工艺,有利于将大规模生产用于创伤修复的KGF.
- 卓山龄孙金鹏陈溥傅成龙凌雪萍卢英华
- 关键词：角质细胞生长因子大肠杆菌BL21(DE3)
