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季新成: 作品数：65 被引量：195H指数：7; 供职机构：国家质量监督检验检疫总局更多>>; 发文基金：国家质检总局科技计划项目新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>

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幼虫芽孢杆菌和蜂房蜜蜂球菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立: 2018年; 为快速鉴别诊断蜜蜂美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)和欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood,EFB),本研究根据Gen Bank中登录的幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae)和蜂房蜜蜂球菌(Melissiciccus pluton)16S r RNA基因序列分别设计特异性引物和探针,建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法与其他病原无交叉反应;对P.larvae和M.pluton的检测灵敏度均达10 copies/μL的阳性质粒;重复性试验结果显示批内、批间变异系数均小于2%。应用该方法对200份实验室模拟样品和200份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可用于AFB与EFB的快速鉴别诊断和早期监测,以及蜂产品中P.larvae和M.pluton的定量分析。; 何晓杰王科珂叶尔保勒阿斯喀张婕妤哈森季新成王振宝; 关键词：美洲幼虫腐臭病欧洲幼虫腐臭病

新疆地区牛新孢子虫病血清抗体检测及结果分析被引量：4: 2011年; 为了解新疆地区牛新孢子虫病的流行情况,用ELISA方法对采自新疆6个地区327份的牛血清进行了新孢子虫病的抗体检测,并以第一次检测结果为依据,对20头牛进行了5次连续采样检测,每次间隔30～40天。检测结果表明,该病在新疆不同地区都有不同程度的发生和流行,平均阳性率为24.5%,且在年龄大和流产牛群中阳性率偏高,血清抗体阳性持续时间至少半年以上。; 刘小兰张军张玲季新成; 关键词：血清抗体 ELISA检测

牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测被引量：8: 2011年; 采用Svanova公司牛病毒性腹泻病毒血清抗体ELISA抗体检测试剂盒对采自新疆10个不同地区的875份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测,共检出抗体阳性血清759份,最高阳性率为100%,最低为55.0%,平均为86.7%。检测结果表明该病已在新疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律。根据ELISA检测结果,从中选择15份血清用病毒中和试验进行检测,结果显示,所采用的ELISA检测方法具有较好的敏感性。; 王文张娟员丽娟季新成; 关键词：牛病毒性腹泻病毒血清抗体 ELISA 病毒中和试验

多重PCR检测奶牛布鲁菌、鹦鹉热衣原体和贝纳氏柯克斯氏体被引量：7: 2014年; 为了建立同步检测奶牛布鲁菌、鹦鹉热衣原体和贝纳氏柯克斯氏体感染的多重PCR方法,根据GenBank上具有属间特异性的布鲁菌.Bp26基因、鹦鹉热衣原体23S rRNA基因和贝纳氏柯克斯氏体IS1111a基因,利用Primer premier 5.0软件各设计1对特异性引物。通过优化PCR反应体系和扩增条件,建立了能够同时检测奶牛布鲁菌、鹦鹉热衣原体和贝纳氏柯克斯氏体的多重PCR方法。该方法具有较好的特异性和可重复性,对3种基因单重PCR检测敏感性均达到3.1×10~2拷贝·反应^-1,对3种病原基因同步检测的敏感性能达到3.1×10~3拷贝·反应^-1。利用该方法对采自不同流产牛的抗凝全血、血清、流产胎儿及奶液等172份临床样品进行检测,检测到布鲁菌感染阳性样品53份,鹦鹉热衣原体感染阳性样品2份,贝纳氏柯克斯氏体感染阳性样品10份,且检测到布鲁菌和鹦鹉衣原体混合感染阳性样品2份,布鲁菌和贝纳氏柯克斯氏体混合感染阳性样品2份,尚未检测到3种病原混合感染的阳性样品。结果表明,建立的多重PCR方法可以用来对奶牛布鲁菌、鹦鹉热衣原体和贝纳氏柯克斯氏体进行同步、快速、灵敏的检测。; 彭武丽季新成于学辉史茜王科珂李娜; 关键词：布鲁菌鹦鹉热衣原体多重PCR

牛传染性鼻气管炎病毒内标共扩增模板的构建与应用: 根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列,设计高度保守的引物和荧光探针,并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段,通过凝胶纯化回收,将该片段连接至pMD18-T载体,经鉴定后获得目标模板。通过引物设计,用搭桥法PCR扩...; 季新成段晓东黄玲牛国辉刘菲刘小兰于学辉; 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒荧光定量PCR 内标; 文献传递

新孢子虫NcSAG1与NcSRS2基因的原核表达与纯化被引量：1: 2013年; PCR扩增新孢子虫NcSAG1与NcSRS2基因,将其构建至原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL-21菌株。对重组表达质粒pET28a/SRS2与pET28a/SAG1IPTG的诱导浓度和诱导温度等条件进行了摸索,确定蛋白最佳诱导时间分别为5、3h,IPTG浓度均为0.8 mmol/L。经组氨酸标记Ni 2+柱纯化后获得的蛋白纯度均大于93.5%,蛋白质量浓度分别为1.23、1.1g/L。经Western blotting检测证明表达的蛋白具有较好的特异性。用纯化后pET28a/SRS2、pET28a/SAG1和二者等量混合物包被酶标板,经ELISA检测表明,表达的蛋白具有较强免疫活性,2种蛋白等量混合物包被酶标板与各蛋白单独包被酶标板检测比较,并未见D值升高。; 史茜员丽娟季新成于学辉; 关键词：新孢子虫 WESTERN BLOTTING ELISA

牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒荧光探针定量RT-PCR检测方法的建立被引量：3: 2011年; 为建立牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)的快速检测方法,本研究采用Sephycral S-400凝胶对牛精液过滤处理后提取病毒核酸,根据BVDV-1 5'UTR保守区基因序列,设计特异性引物和荧光探针,通过反应条件的优化,建立了牛精液中BVDV-1荧光定量RT-PCR检测方法。该方法可以检测到牛精液中含量为0.0125 TCID50的病毒,灵敏度比病毒分离方法高200倍～2 000倍,比常规RT-PCR方法高10倍。对从同一个牛场6个月内采集的120份新鲜牛精液和40份冷冻牛精液用该荧光RT-PCR方法检测,没有检测到BVDV-1阳性样品。对其中的10头牛定期检测精液中病毒的同时,并同步检测了全血中的病毒和血清抗体,结果血清抗体阳性牛精液中没有检测到病毒,本研究结果表明,不能以血清抗体阴阳性做为精液是否带毒的依据。; 季新成黄玲段晓东员丽娟牛国辉于学辉曾新强张彦明; 关键词：牛精液荧光定量RT-PCR检测血清抗体检测

四种口蹄疫病毒非结构蛋白抗体ELISA试剂盒检测猪血清样本的质量评估被引量：4: 2017年; [目的]对4种口蹄疫病毒非结构蛋白抗体ELISA试剂盒进行质量评估。[方法]用4种商品化的口蹄疫非结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒,对非免疫无疫、免疫健康、免疫感染和非免疫人工感染4种类型猪血清样本进行检测,分析试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、分析敏感性、分析特异性及重复性。[结果]4种试剂盒的诊断敏感性在76.8%~94.4%之间,诊断特异性在97.7%~100%之间,分析敏感性和分析特异性较好。4种检测试剂盒与4种猪常感染疾病的阳性血清不发生反应。试剂盒的批间重复性为(10.545±6.845)%^(37.577±28.626)%;批内重复性为(9.037±6.075)%^(37.601±27.027)%。[结论 ]在实际应用中,需根据检测目的不同,选取相应的试剂盒。; 史茜陈瑞花王科珂徐新峰卢曾军季新成; 关键词：口蹄疫 ELISA试剂盒

牛病毒性腹泻病毒不同检测方法的比较研究被引量：11: 2009年; 采用Idexx公司抗原捕获ELISA试剂盒对新疆部分地区160份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒抗原检测,结果有6份样品为阳性,对该6份血清用BVDV阴性血清进行了系列稀释后,分别用抗原捕获ELISA、RT-PCR和荧光RT-PCR进行检测,发现RT-PCR方法比ELISA检测灵敏度高10-100倍,荧光RT-PCR比RT-PCR灵敏度高约10-100倍。; 季新成曾新强员丽娟牛国辉于学辉段晓东王大孝; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR 荧光RT-PCR

牛病毒性腹泻病毒TC株的分离鉴定及E0基因的序列分析被引量：16: 2016年; 从新疆塔城地区某牛场采集患病犊牛全血,将RT-PCR方法鉴定为牛病毒性腹泻病毒（BVDV）阳性的样品接种到MDBK细胞,传代至第4代,出现典型病变（CPE）。通过间接免疫荧光试验,证明该分离病毒为BVDV,命名为BVDV-TC。设计引物对E0基因进行扩增和序列分析。所得片段与GenBank上已发表的BVDV毒株核苷酸序列的同源性为69.3%~93.8%,氨基酸同源性为73.6%~97.8%,TC株的遗传距离与VEDEVAC株最接近。BVDV-TC是第一个在新疆地区报道的1b亚型BVDV毒株,为新疆地区BVDV感染的防控提供依据。; 梁霄勇季新成冉多良; 关键词：E0基因

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