安然
- 作品数：44 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学杰出青年基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 高灵敏靶标自环化滚环扩增检测的动态接头构建
- 2021年
- 针对靶标自环化滚环扩增(TC-RCA)难以高灵敏度检测的难题,本文探究了扩增过程中靶标环化效率低的原因,并构建了新型动态接头以提高靶标DNA的环化灵敏度。通过采用含有发卡结构的动态接头(18 nt),使接头的两端产生连接活性差异,探讨发卡接头打开与闭合的动态平衡在提高环化灵敏度中的作用。具体研究了发卡动态接头的稳定性和磷酸化对连接及环化效率的影响。研究表明,增加接头两端的连接活性差异可提高环化灵敏度(106 copies/μL),从而揭示了TC-RCA灵敏度低的根本原因。由于许多过量的接头同时连接到靶标DNA两端后,靶标无法环化,造成仅有少部分靶标环化为RCA模板,导致极低浓度的靶标无法发生RCA。在此基础上,采用另一种10 nt的短链动态接头,使检测灵敏度提高了两个数量级(达104 copies/μL)。本研究为TC-RCA中接头的设计提供了新思路,对双链DNA环化机理的深入研究具有重要意义。
- 王晨儒安然梁兴国
- 关键词：滚环扩增核酸检测接头
- 一种用于检测恩诺沙星和环丙沙星的适配体、试剂盒及其应用
- 本发明提供一种用于快速同时检测恩诺沙星和环丙沙星的适配体、试剂盒及其应用。本发明基于目前已有的长度分别为60‑mer和98‑mer的恩诺沙星和环丙沙星适配体，通过对其二级结构、三级结构进行计算机模拟及与靶标模拟对接，在此...
- 林洪沙隽伊隋建新安然王赛曹立民
- Thermus aquaticus DNA连接酶的连接特性研究被引量：2
- 2016年
- 为进一步研究Thermus aquaticus（Taq）DNA连接酶的作用机理、开发以DNA连接作为关键步骤的新生物技术,本文以含有超稳定发卡结构的DNA（带有11nt长的单链部分）和另一条单链DNA为连接底物,研究了片段长度、反应温度、连接位点的结构特性、聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG）的添加等对连接的影响,探讨了Taq DNA连接酶的连接特性。连接结果显示：单链DNA的3’端同发卡结构I底物相连的连接率,比单链DNA的5’端同发卡结构II底物相连的连接率更高;可以连接的最短单链DNA片段的长度为6nt;在20～65℃范围内,一般连接率随温度升高而升高。在连接时,由2条底物通过互补配对形成的复合体的热稳定性对连接率影响不大,一般在连接温度远远高于该复合体的熔点（Melting Temperature,Tm）时仍有很高的连接率。在70或75℃时,虽然连接率有所降低,但仍然可以连接9nt的单链DNA片段。研究还发现,在片段连接上,PEG 6000对较难连接的片段（6～7nt）有促进作用,对容易连接的片段（8～10nt）促进作用不显著,甚至有一定抑制作用。
- 于欣王静安然梁兴国
- 关键词：TAQDNA连接酶
- 一种单链核酸检测试剂盒、方法及其应用
- 本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种单链核酸检测试剂盒、方法及其应用，所示的试剂盒包括环状脱氧核酶以及分子信标，所述环状脱氧核酶具有脱氧核酶序列。该试剂盒能够在RNase H的辅助下，通过一步法的简便操作，对分子信标...
- 安然梁兴国
- 文献传递
- 制备环状DNA或RNA的方法
- 本发明属于核酸技术领域，具体涉及一种高浓度环状DNA或RNA的制备方法。包括以下步骤：将成环反应所需的辅助模板DNA(下统称splint)、连接酶、连接酶的缓冲液混合配制成初始体系；将单链DNA或者RNA(下统称成环链)...
- 梁兴国安然李琦樊一乔
- 文献传递
- 单链环状核酸及其制备方法和应用
- 本发明提供了一种单链环状核酸及其制备方法和应用，涉及分子生物学技术领域，本发明提供的环状核酸的制备方法，包括具有末端发夹结构的线性核酸在与成环辅助链杂交后，经连接酶连接使两端闭合，得到单链环状核酸。该方法显著降低了副产物...
- 梁兴国安然崔一笑
- 文献传递
- 基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法
- 本发明属于核酸扩增技术领域，具体涉及一种基于哑铃环模板的恒温滚环扩增方法，包括如下步骤：(1)制备哑铃环状DNA作为模板，所述哑铃环状DNA整体对称，两端为大小相等的环部区域，中间为完全互补的茎部区域；(2)将步骤(1)...
- 安然梁兴国刘梦琴周广庆张伯颖
- 文献传递
- 食品加工对几种海洋食品原料中DNA的影响被引量：5
- 2013年
- 以鲑鱼(Oncorhynchus keta)、大眼金枪鱼(Thunnus obesus)、蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius)和鹰爪虾(Trachypenaeus curvirostris)4种海洋食品原料为实验材料。采取蒸煮加工、微波加工、腌制加工3种处理方式,通过SDS-苯酚-氯仿法抽提DNA,利用微型分光光度计测定其在260与280nm处的吸光度比值(A260/A280),来评估核酸的纯度,并利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA分子链的破坏程度,分析这3种加工方式对4种海洋食品原料中DNA的影响。结果表明,3种加工方式均对DNA产生一定程度的影响。其中煮沸对4种海洋食品原料中DNA的降解最严重,使基因组DNA长链被严重切短,无完整基因组DNA残留。微波加工和腌制加工对DNA的影响相对较轻,使部分DNA长链被切断,但仍有较完整的基因组DNA存在。研究表明,对加工过的食品进行DNA检测时,应充分考虑加工过程对DNA的破坏作用。
- 韩冬贾秀双安然贾蕾敏董平梁兴国
- 关键词：食品加工DNA提取DNA检测
- 一种制备环状RNA的方法
- 本发明属于核酸技术领域，具体涉及一种制备环状RNA的方法，主要解决线性RNA成环过程中存在的大分子聚合副产物随着底物浓度的增加而急剧增加，目的环状RNA产率低；并需要借助夹板链或辅助链，后期处理步骤繁琐的问题。针对要连接...
- 梁兴国陈辉安然程凯
- 文献传递
- 一种低嘌呤牡蛎罐头及其制备方法
- 本发明提供了一种低嘌呤含量的牡蛎罐头及其制备方法，该罐头由低嘌呤牡蛎和汤汁组成。其制备方法是先将牡蛎用含酸性食品处理剂水溶液浸泡处理，其中酸性食品处理剂选自食醋、盐酸、柠檬酸、酒石酸、富马酸、苹果酸中的一种或几种，再加热...
- 董平高晓梦梁兴国安然李敬
- 文献传递
