容敏清
- 作品数：4 被引量：10H指数：3
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表达HSV－2 gD基因的重组痘苗病毒保护小鼠对抗致死量HSV病霉攻击被引量：4
- 1995年
- 利用ＰＣＲ方法对单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白Ｄ（ＨＳＶ－２ｇＤ）基因进行了修饰，在其５＇端删去约５００ｂｐ的非编码区，仅保留ＡＴＧ上游７个ｂｐ。将修饰后的ＨＳＶ－２ｇＤ基因插入到带有痘苗病毒天坛株ＴＫ基因区段的痘苗表达质粒ｐＪＳＡ１１７５，置于痘苗病毒Ｐ７．５ｋ早／晚期启动子控制下。将此重组质粒用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法转染已受野型ＴＫ￣＋痘苗病毒天坛株感染的ＴＫ￣－１４３细胞，通过同源重组机制和标志基因ＬａｃＺ产物的蓝斑显色作用，以及ＢｕｄＲ试剂对ＴＫ表型的选择压力，筛选出整合有ＨＳＶ－２ｇＤ基因的重组痘苗病毒。Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交表明，ＨＳＶ－２ｇＤ基因已正确地插入痘苗病毒ＴＫ基因区内；间接免疫荧光检测显示，ＨＳＶ－２ｇＤ蛋白已得到有效表达，且主要分布于细胞膜。重组病毒免疫家兔可产生明显的抗ＨＳＶ－２ｇＤ中和抗体。用重组病毒免疫小鼠，３周后可使９４％（１７／１８）的小鼠对抗ＨＳＶ－２的致死量攻击，表明重组病毒具有明显的免疫保护作用。
- 容敏清阎辉阮力侯云德何南祥朱既明
- 关键词：痘苗病毒载体
- 核酶Ripc催化性质的研究被引量：3
- 1993年
- 本文根据Jim Haseloff和Wayne,L.Gerlach等人发表的锤头状核酶(Hammer-head structure ribozyme)基本模式,设计并人工合成了针对HBV基因转录物的核酶-Ri-pc,已在体外成功地切割了靶RNA分子。本文利用酶学研究的一般方法研究了核酶Ripe催化方面的特性。结果表明:(1)反应温度从25℃上升到37℃时,核酶作用效果略有增加;当温度上升到42℃时,作用更为明显。(2)随时间的增加,切割产物也逐渐增加,但不是线性的。可见核酶的活性随时间的增加是有所下降的。从图中估计此核酶的半衰期T_(1/2)在1小时内。(3)从核酶的动力学曲线看,在底物浓度达到8.00μmol/L时,产物浓度仍呈线性增加。如果核酶的反应动力学曲线符合米氏方程,说明在此底物浓度下,核酶未被饱和。(4)Mg^(2+)浓度从10mmol/L增加到50mmol/L时,核酶的切割效果变化不显著。
- 徐炜王平孙晓梅容敏清童葵塘侯云德
- 关键词：核酶乙型肝炎病毒
- 痘苗病毒天坛株4b启动子的转录效率
- 1998年
- 痘苗病毒天坛株４ｂ启动子的转录效率崔虹容敏清王芝山侯云德（中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室，北京１０００５２）关键词痘苗病毒，４ｂ启动子痘苗病毒载体在多价基因工程疫苗的研制中十分重要，外源基因在重组痘苗中的高效表达主要依靠启...
- 崔虹容敏清王芝山王芝山
- 关键词：痘苗病毒
- 表达单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D的重组痘苗病毒活疫苗株的建立被引量：4
- 1997年
- 我们以前曾报道，表达单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白Ｄ（ＨＳＶ－２ｇＤ）的重组痘苗病毒（实验疫苗株）能保护被免疫小鼠抵抗致死量ＨＳＶ－２病毒的攻击。在此工作基础上，严格按人用疫苗研究要求的实验条件，成功地建立了表达ＨＳＶ－２ｇＤ的重组痘苗病毒活疫苗株。首先将经聚合酶链反应（ＰＣＲ）修饰的ＨＳＶ－２ｇＤ基因插入痘苗表达质粒ｐＪＳＢ１１７５，置于痘苗病毒Ｐ７５Ｋ早／晚期启动子控制下。将此重组质粒用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法转染已受野型ＴＫ＋痘苗病毒天坛７６１株感染的人胚肺二倍体细胞。经同位素探针（３２Ｐ－ＨＳＶ－２ｇＤ）原位杂交法和３轮蚀斑纯化，筛选出基因组内整合有ＨＳＶ－２ｇＤ基因的重组痘苗病毒。斑点和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实，ＨＳＶ－２ｇＤ基因已插入痘苗病毒基因组内预期的ＴＫ区段，间接免疫荧光检测显示，重组病毒感染细胞后能有效地表达ＨＳＶ－２ｇＤ蛋白。
- 阎辉容敏清阮力侯云德侯云德朱既明
- 关键词：疱疹病毒2型痘苗病毒疫苗抗原
