张亚玺
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 羟基脲增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导的K562细胞凋亡及其分子机制
- 2012年
- 目的研究化疗药物羟基脲(HU)增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的K562细胞凋亡及其分子机制。方法用重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)处理慢性髓细胞性白血病来源的K562和SVT-35细胞,采用四唑氮盐/吩嗪硫酸甲酯比色法测定细胞生长抑制率,检测细胞对rsTRAIL的敏感性;化疗药物HU与rsTRAIL联合作用于对rsTRAIL不敏感的K562细胞,用四唑氮盐/吩嗪硫酸甲酯染色法检测细胞敏感性的变化;Western blot分析凋亡相关蛋白激酶的活化水平,以及凋亡抑制蛋白细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)和细胞凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)的表达。结果用1μg/ml的rsTRAIL处理SVT-35细胞,其存活率达32%,而同样条件下K562细胞的存活率达93%;化疗药物HU和rsTRAIL联合处理K562细胞,与两者单独作用相比,细胞存活抑制率差异具有统计学意义;化疗药物和rsTRAIL联合处理K562细胞,Ras、丝裂原活化蛋白激酶(MEK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)的活化受到抑制,应激活化蛋白激酶(JNK)磷酸化水平上升;HU和rsTRAIL联合处理抑制凋亡抑制蛋白c-FLIP和c-IAP1的表达。结论 HU促进rsTRAIL诱导的K562细胞凋亡可能通过抑制Ras-MEK-ERK信号通路,激活JNK激酶,抑制c-FLIP和c-IAP1的表达。
- 武瑶珉张亚玺史娟刘士廉刘彦信郑德先
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体羟基脲细胞凋亡慢性髓细胞性白血病
- 间充质干细胞介导的TRAIL可控性表达及其杀伤人肝癌细胞的活性研究被引量：6
- 2011年
- 目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）在间充质干细胞中可控性表达及其对肿瘤细胞的杀伤活性，探索问充质干细胞用于肿瘤治疗的前景。方法构建TRAIL可控性表达的腺病毒载体Ad—Tet—TRE-TRAIL，包装获得重组腺病毒后，感染小鼠间充质干细胞，免疫印迹法和酶联免疫吸附法测定间充质干细胞TRAIL可控性表达和分泌。四甲基偶氮唑盐（MrTT）法测定TRAIL抑制肝癌细胞生长的能力。膜联蛋白（Annexin）-V／碘化丙啶（PI）染色和流式细胞术测定TRAIL对肝癌细胞的杀伤活性。结果重组腺病毒Ad—Tet-TRE—TRAIL感染的小鼠间充质干细胞能够在强力霉素的控制下表达和分泌TRAIL，并显著抑制SMMC-7402人肝癌细胞生长，其机制是诱导肝癌细胞凋亡，结果显示SMMC-7402细胞在杀伤24、48h后的存活率分别为66．5％±4．8％和42．9％±6．5％，而对照组（未加强力霉素）的细胞存活率分别为97．3％±2．2％和99．4％±4．7％。结论间充质干细胞介导TRAIL可控性表达进而有效诱导肝癌细胞凋亡并抑制肝癌细胞生长，为肿瘤的细胞治疗提供了新的策略。
- 刘铮马宏史娟张亚玺刘彦信郑德先
- 关键词：干细胞基因表达调控肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
- miR-146a对小鼠巨噬细胞IL-18表达的影响被引量：8
- 2011年
- 目的:探讨miR-146a对小鼠单核-巨噬细胞株RAW264.7以及小鼠原代腹腔巨噬细胞Thl/Th2类细胞因子表达的影响。方法:体外培养的小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞和腹腔新鲜分离的巨噬细胞分别瞬时转染miR-146a mimics、阴性对照mimics(NC mimics)、抑制性miR-146a(miR-146a inhibitor)和抑制性miR-146a阴性对照(NC in-hibitor)。转染后,利用real time PCR定量检测IL-18、IL-5和IL-10的表达情况。结果:RAW264.7细胞和原代腹腔巨噬细胞在转染miR-146a mimics后IL-18的表达水平明显降低(P<0.05),转染miR-146a inhibitor后IL-18的表达水平明显升高(P<0.05),但对IL-5和IL-10的表达,两种转染形式均没有影响。结论:巨噬细胞RAW264.7及原代巨噬细胞表达的miR-146a能够负向调控Thl类细胞因子IL-18的表达,但是不能调控Th2类细胞因子IL-5及IL-10的表达。
- 项洋姜明红王东生高静张亚玺刘彦信郑德先
- 关键词：巨噬细胞MIR-146ATH1/TH2细胞因子表达
- 抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2嵌合抗体表达载体的构建、表达及其抗肿瘤活性分析被引量：1
- 2011年
- 目的:构建抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体2(死亡受体5,DR5)的人-鼠嵌合抗体表达载体,获得稳定表达该嵌合抗体的细胞株,并分析嵌合抗体的抗肿瘤活性。方法:采用DNA重组技术,扩增抗人DR5的鼠源单克隆抗体(mAb)AD5-10的重链(HC)、轻链(LC)可变区基因片段,并将其分别插入含有人IgG重链、轻链恒定区基因的真核表达载体RpCI-neo,以重、轻链表达质粒共转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),筛选稳定表达抗人DR5嵌合抗体(hmAD5-10)的重组细胞。采用Western blot和间接ELISA检测嵌合抗体的表达量及其与抗原DR5的结合活性。采用MTS比色法检测嵌合抗体的生物学活性。并对重组细胞株进行无血清培养驯化。结果:获得了2株稳定表达嵌合抗体的重组细胞株CHO-A5和CHO-B11,抗体的表达水平分别为(0.36±0.11)mg/L和(0.16±0.01)mg/L,嵌合抗体与DR5有较好的结合活性,对体外培养的人T淋巴细胞白血病细胞SVT35有显著的杀伤作用。结论:在真核细胞中表达了具有生物学活性的抗DR5的人-鼠嵌合抗体,为其应用于肿瘤治疗研究奠定了基础。
- 吕付佳史娟张亚玺刘士廉刘彦信郑德先
- 关键词：嵌合抗体中国仓鼠卵巢细胞
