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张娟娟: 作品数：31 被引量：68H指数：6; 供职机构：潍坊医学院口腔医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省高等学校科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的构建及初步研究被引量：1: 2015年; 目的:研究细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)基因启动子在小鼠前成骨细胞中表达的调控机制。方法:利用软件分析小鼠的MEPE基因启动子,得到5条启动子候选序列后,设计引物进行不同长度MEPE基因启动子的构建,并分别将其转染小鼠前成骨细胞;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析不同长度MEPE基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,并同时观察BPM2对小鼠前骨细胞中不同长度MEPE基因启动子转录活性的影响及其时间效应。结果:成功构建了P-78^+66、P-140^+66、P-300^+66、P-500^+66、P-1 081^+66的MEPE基因启动子;分别转染小鼠前成骨细胞后,不同长度MEPE基因启动子的活性两两相比均有显著性差异(P<0.05),其中以P-500^+66的活性最强,推测-140^-500区域可能为MEPE转录表达的调控元件主要结合部位;BMP2作用于不同长度MEPE基因启动子后检测发现,BMP2在启动子-140^-500区域内可明显上调MEPE基因的转录活性(P<0.05)。结论:成功构建了MEPE基因启动子,并发现BMP2调控MEPE基因启动子的主要区域在-140^-500区域。; 宫春梅张娟娟夏天永孙岩; 关键词：基因克隆

敲低MSX2抑制小鼠成釉细胞釉基质蛋白表达及牙釉质形成: 2018年; 目的研究肌节同源结构域同源框基因2(MSX2)对小鼠成釉细胞釉基质蛋白的表达及牙釉质形成的影响。方法免疫化学染色检测出生后小鼠牙胚MSX2的表达情况及其在成釉细胞中的定位;设计并合成靶向小鼠MSX2基因的短发夹RNA(shRNA)寡聚单链DNA,将退火成双链的DNA构建到RNAi慢病毒载体pG MLV-SC5中,包装慢病毒;慢病毒感染成釉细胞,实时荧光定量PCR筛选最佳干扰片段,并检测釉原蛋白(Amelx)、成釉蛋白(Ambn)、釉蛋白(Enam)、釉成熟蛋白(Amtn)及激肽释放酶4(Klk4)在mRNA水平表达的改变。通过分离小鼠E18.5牙胚并感染靶向MSX2的RNAi重组慢病毒,种植于小鼠肾囊膜下,10周后,取出组织,分离并观察牙齿结构。结果 MSX2在小鼠成釉细胞分泌期及成熟期均有表达,但分泌期表达信号较弱,成熟期较强。成功包装靶向MSX2基因的RNAi慢病毒MSX2-shRNA,敲低MSX2基因表达可不同程度地降低成釉细胞Amelx及Klk4的mRNA水平。靶向MSX2基因的RNAi慢病毒感染牙胚后其牙釉质矿化程度降低。结论 MSX2基因在小鼠成釉细胞中表达,敲低成釉细胞MSX2并促进釉基质蛋白基因的表达和牙釉质的矿化。; 刘皓姜建萍宫崎田换兵王晟张娟娟潘智芳刘晓影; 关键词：慢病毒成釉细胞釉基质蛋白

病理性瘢痕成纤维细胞中连接蛋白43的免疫电镜观察: 2009年; 目的:观察连接蛋白43(Connexin43,Cx43)在病理性瘢痕成纤维细胞中的表达,探讨Cx43及其构成的缝隙连接在病理性瘢痕中的调控作用。方法:取正常皮肤2例、正常修复组织2例、增生性瘢痕5例、瘢痕疙瘩5例,用特异性抗体(Cx43)作为标记物,用胶体金标记的IgG作示踪物进行免疫电镜观察Cx43的分布与表达,并对其进行定位,同时观察不同标本成纤维细胞的超微结构变化。结果:Cx43在正常修复组织及正常皮肤成纤维细胞的胞浆及近胞膜上表达,且明显集中于粗面内质网;Cx43在增生性瘢痕成纤维细胞的表达明显减少,粗面内质网中见到少许Cx43金颗粒的聚集;瘢痕疙瘩成纤维细胞仅在胞浆中见到少许Cx43散在金颗粒。结论:成纤维细胞Cx43的表达下调可能是造成病理性瘢痕组织中成纤维细胞间缝隙连接细胞间通讯异常,从而导致病理性瘢痕发生的因素之一。; 张娟娟吕世军; 关键词：连接蛋白43 病理性瘢痕免疫电镜

c-Jun调控成釉细胞Amelotin基因表达的研究被引量：1: 2011年; 目的:通过过表达及knockdown c-Jun基因,观察小鼠成釉细胞中釉成熟蛋白(amelotin)的表达变化,以初步确定c-Jun对amelotin的调控作用。方法:①应用免疫组化和细胞免疫荧光方法观察体内外成釉细胞中的c-Jun及amelotin的表达情况;②RT-PCR获得c-Jun基因,克隆至pcDNA3.1/myc-hisA,瞬时转染成釉细胞,real time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响;③化学合成c-Jun siRNA,瞬时转染成釉细胞,re-al time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响。结果:①体内外成釉细胞中c-Jun和amelotin均有表达,c-Jun主要在成釉细胞胞核中表达,amelotin在成釉细胞和釉质全层均有表达;②成功构建c-Jun真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-c-Jun,转染成釉细胞后amelotin mRNA表达水平显著上升;③成功沉默c-Jun,amelotin在转染c-Jun siRNA组表达水平显著下降。结论:在成釉细胞中,c-Jun在转录水平调控amelotin基因的表达。; 孙岩张娟娟刘晓影何永云梁广智李武修高玉光; 关键词：原癌基因小RNA干扰

釉成熟蛋白Amelotin抗体的制备和初步鉴定被引量：7: 2009年; 目的:表达并纯化小鼠釉成熟蛋白(Amelotin),制备多克隆抗体,并进行初步鉴定。方法:RT-PCR获得Amelo-tin成熟肽片段,构建pET32a-Amelotin,IPTG诱导表达Amelo-tin,纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA检测抗体滴度。Western blot和免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果:成功构建了Amelotin重组表达载体pET32a-Amelotin,表达的重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,得到的多克隆抗体ELISA显示抗体效价可以达到1∶12800。Western blot分析表明该抗体能特异结合Amelotin,免疫组化分析表明自制的抗体能特异的与Amelotin相互作用。结论:以纯化的Amelo-tin为免疫原,成功地制备了效价及特异性较高的兔抗Amelo-tin抗体,为进一步建立简便的Amelotin检测方法及研究Amelotin生物学功能奠定了良好的基础。; 孙岩张娟娟韩婷婷李东亮曹雪梅李武修高玉光; 关键词：原核表达多克隆抗体

转录因子SP1调控小鼠前成骨细胞中MEPE基因表达的研究被引量：3: 2017年; 克隆转录因子SP1并构建其真核表达载体;在双荧光素酶基因检测报告系统下观察3种MAPK信号通路抑制剂调控SP1对不同长度的MEPE基因表达的调控作用,以分析转录因子SP1作用于MEPE基因的显著区段,并利用实时定量RT-PCR法分析SP1调控MEPE基因的表达。根据双荧光素酶基因检测报告系统的研究表明在小鼠前成骨细胞中,SP1可以抑制MEPE基因的转录活性,在(-1 081~66)1 147 bp片段区域内抑制作用较为显著,SP1可通过抑制JNK途径抑制MEPE基因的转录活性;实时定量RT-PCR法分析再次验证SP1抑制MEPE基因的表达水平。这表明转录因子SP1对MEPE基因表达具有显著的调节作用,从而表明转录因子SP1在骨形成发育过程中起到重要的生物学意义。; 柳云霞张娟娟刘晓影孙岩; 关键词：SP1

连接蛋白43在病理性瘢痕成纤维细胞中的表达: 2010年; 目的：探讨连接蛋白43（Cx43）及其构成的缝隙连接细胞间通讯（GJIC）在病理性瘢痕中的调控作用。方法：选择临床上不同病理分类的瘢痕组织（包括瘢痕疙瘩、增生性瘢痕）和正常修复组织，以正常皮肤为对照，应用免疫组织化学检测Cx43在成纤维细胞中的表达。结果：Cx43在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达明显少于正常修复组织及正常皮肤。结论：成纤维细胞Cx43的表达下调可能是造成病理性瘢痕组织中成纤维细胞间GJIC异常，从而导致病理性瘢痕发生的因素之一。; 张娟娟吕世军孙岩; 关键词：连接蛋白43 成纤维细胞瘢痕

口腔健康教育实验教学改革探索被引量：8: 2014年; 目的提高学生口腔健康宣教能力,巩固学生口腔健康教育理论,增加学生学习的兴趣和主动性。方法选择潍坊医学院2006—2008级口腔医学专业大学四年级学生为研究对象进行口腔健康教育实验教学改革探索,将学生分为试验组和对照组,试验组采用"讲出去"的教学方式,对照组采用传统的教学方法,对试验组的课堂、课后评价以及两组的期终考试和实习考核评价结果进行分析和比较。结果试验组的课堂、课后评价结果表明,"讲出去"教学方式被学生普遍认可,能提高学生口腔健康宣教的能力;期终考试和实习考核成绩均显示试验组得分高于对照组(P<0.01)。结论 "讲出去"教学方式提高了学生口腔健康宣教的能力,符合教学改革发展趋势。; 蒋英英胡温庭张娟娟张娟娟孙岩; 关键词：口腔健康教育实验教学教学改革

转录因子JunB和JunD调控成釉细胞MMP-20基因转录活性的研究: 2013年; 目的通过研究转录因子JunB,JunD对成釉细胞中MMP-20基因表达的调控作用,从而进一步明确Jun家族在牙釉质形成中的影响。方法首先构建JunB和JunD真核表达载体重组质粒并瞬时转染重组质粒进入成釉细胞中;利用双荧光素酶基因检测报告系统分析不同浓度JunB,JunD对MMP-20启动子特征性序列区域的转录活性的影响;确定有明显作用的启动子区段,利用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统分析JunB对MMP-20基因启动子转录活性的影响;最后再观察JunB与JunD共转染时对MMP-20基因活性表达的改变。结果成功构建JunB,JunD真核重组表达载体,顺利将重组质粒转染入成釉细胞;双荧光素酶基因检测报告系统分析显示JunB对MMP20启动子活性表达上调,而JunD对MMP20启动子活性表达无作用;突变MMP20启动子AP1的两个结合位点后,MMP20启动子的转录活性下降,同时JunB也失去了上调MMP20启动子转录活性的作用。最后将JunB和JunD共转染时,在JunB存在的前提下,随着JunD转染量的增加,小鼠成釉细胞MMP20启动子转录活性明显减弱。结论该研究表明转录因子JunB与成釉细胞内MMP-20启动子的特征性序列相互作用,从而调控MMP20的表达水平;而JunD对MMP20启动子特征性序列无明显作用。所以为进一步研究Jun家族成员在釉质发育过程中的作用建立了重要的生物学基础。; 郝佳张新新袁杰张娟娟刘晓影孙岩高玉光; 关键词：JUND 基因定点突变

Runx2介导TGF-β1调控成釉细胞MMP20基因表达的研究被引量：3: 2012年; 目的:研究Runx2在TGF-β1调控小鼠成釉细胞金属基质蛋白酶-20(matrix metalloprotei-nase 20,MMP20)基因表达中的作用。方法:首先利用双荧光素酶基因报告系统分析TGF-β1对MMP20基因启动子转录活性的影响;然后利用染色体免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)方法观察Runx2与MMP20特异性结合位点之间的相互作用,并利用基因定点突变和双荧光素酶基因报告系统分析Runx2对MMP20基因启动子转录活性的影响;最后运用小RNA干扰技术使Runx2基因沉默,实时定量RT-PCR技术观察TGF-β1诱导MMP20基因表达的改变。结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,MMP20启动子在-87～+23区域转录活性无明显变化外,其他各区域转录活性均增强。利用ChIP研究发现Runx2与MMP20基因核心启动子的特征性序列"TGTGGG"相互作用;将该特征性序列由"TGTGGG"突变为"TGTAAG"后,利用双荧光素酶基因报告系统发现Runx2对MMP20基因启动子转录活性的影响减弱;利用小RNA干扰技术使Runx2基因沉默后,TGF-β1上调MMP20基因表达的作用减弱。结论:TGF-β1通过转录因子Runx2调控成釉细胞MMP20的表达。; 孙学玲孙岩张娟娟赵娜梁广智刘晓影成敏高玉光; 关键词：RUNX2 TGF-Β1

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