张文露
- 作品数：38 被引量：80H指数：6
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院感染性疾病分子生物学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 磷酸依托泊甙(VP16)促进PLC5细胞中eEF1A乙酰化
- 目的:翻译延伸因子(eEF1A)是蛋白质合成延伸阶段中的一种重要因子。研究显示,eEF1A功能受到翻译后修饰调节,如磷酸化-去磷酸化。迄今,除了磷酸化-去磷酸化以外,关于eEF1A是否受到其他翻译后修饰尚少有研究。本文研...
- 胡接力许舸张文露胡源黄爱龙蔡雪飞
- 文献传递
- 荧光定量分型PCR检测重庆地区乙型肝炎病毒感染者HBV基因型分布特征被引量：6
- 2012年
- 目的了解重庆地区不同类型乙型肝炎病毒(HBV)感染者中HBV基因型的分布特点及其临床意义。方法应用荧光定量分型PCR(GQ-PCR)法检测207例HBV感染者的HBV基因型,并用直接测序法验证其基因分型结果的准确性。结果GQ-PCR成功分型204份临床样本,3例(1.45%)未能检出,其中,B型127例,占61.35%;C型29例,占14.01%;B/C混合型48例,占23.19%。C基因型的病毒载量明显高于B基因型及B/C混合基因型(P<0.05),B基因型与B/C混合基因型的病毒载量差异无统计学意义(P>0.05)。随机选取的90份血清样本经GQ-PCR和直接测序法检测其基因型,两种方法的检测结果一致性较好(Kappa=0.834,P<0.05)。结论重庆地区HBV感染者以B型为主要基因型,其次为B/C混合型,混合感染率高于以往研究结果。C基因型患者HBV-DNA水平高于B基因型及B/C混合基因型,可能与C基因型HBV感染导致肝脏损害较重有关。
- 张秀瑜赵耀张文露胡源黄爱龙
- 关键词：肝炎病毒乙型基因型
- 同时检测乙型肝炎病毒三种核苷酸类似物耐药位点的方法及其试剂盒
- 本发明提供了一种同时检测乙型肝炎病毒三种核苷酸类似物耐药位点的方法及其试剂盒。该发明以乙型肝炎病毒基因型序列为基础，在HBV聚合酶区域设计了四条巢式扩增引物和针对十个耐药位点的二十七条野生、耐药检测的寡核苷酸探针，使用地...
- 黄爱龙张文露胡源赖国旗刘彦辰赵丽
- 一种乙肝病毒聚合酶特定位点广泛突变表型分析的方法
- 刘亚罗英英蔡雪飞龙全鑫甘春杨杨柳青黄爱龙张文露胡接力
- 一种新的DNA分子克隆方法被引量：10
- 2011年
- DNA分子克隆是基本的分子生物学实验技术,传统的分子克隆方法大多需经过酶切链接过程,但在某些情况下,没有合适的酶切位点往往会成为阻碍克隆进行的障碍.本文描述了一种新的分子克隆方法,称为不依赖酶切和链接的分子克隆(RLIC).利用RLIC,将3种不同大小的DNA片段克隆到3种不同载体,证明了这种方法的有效性和可靠性.由于该方法不受限制性酶切序列限制,省去了酶切连接步骤,因此具有很大的灵活性和简便性,在分子生物学研究方面有广泛应用前景.
- 黄媛陶颖张文露黄爱龙胡接力
- 关键词：DNA分子克隆
- 一种构建HBV聚合酶特定位点多种突变的方法被引量：1
- 2017年
- 核苷(酸)类似物[neocleot(s)ide analogues,NUCs]在治疗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的过程中常见的一个问题就是耐药的产生。耐药的产生与HBV逆转录酶(reverse transcriptase,RT)区特定位点突变具有直接关系。现有的体外表型分析方法存在固有的限制。本文提出一种构建HBV聚合酶特定位点多种突变的新方法,即位点特异性随机突变,通过一轮聚合酶链式反应扩增,在RT区特定位点引入多种突变形式,再结合golden-gate克隆法以及片段替换反应(fragment substitution reaction,FSR)将包含不同突变的DNA片段克隆到相应载体中以进行下一步分析。通过这种方法,构建了阿德福韦(adefovir,ADV)耐药位点rt181和rt236位点的多种突变形式。
- 刘亚杨柳青张文露黄爱龙胡接力
- 关键词：克隆核苷类似物耐药
- 单碱基延伸技术对乙型肝炎病毒基因分型检测的试剂盒及方法
- 本发明公开了一种单碱基延伸技术对乙型肝炎病毒基因分型检测的试剂盒，包括乙肝病毒DNA巢式扩增引物，还包括针对乙型肝炎病毒A、B、C、D基因型的单碱基延伸引物；本发明还公开了利用前述试剂盒的单碱基延伸技术对乙型肝炎病毒基因...
- 张文露赖国旗许舸胡接力黄爱龙
- 文献传递
- 反向线性探针杂交在检测实验动物沙门菌中的研究被引量：2
- 2013年
- 目的建立简便、快速、准确、灵敏、特异的沙门菌检测方法。方法根据沙门菌argT基因序列设计通用引物和3'、5'均加有polyC的特异性探针。上游引物5'标记生物素,将探针线性固定在硝酸纤维素膜上,使沙门菌PCR扩增产物与探针进行杂交,通过优化杂交条件,建立反向线性探针杂交检测方法。利用该方法对重庆地区74只实验动物进行检测,同时与传统分离培养方法比较。结果反向线性探针杂交方法灵敏度高,对沙门菌PCR扩增产物在3ng/μL以上可有效检测。从细菌分离培养及DNA提取到PCR扩增及反向杂交结束仅需27h。该检测方法特异性高,对6种非沙门菌的检测中,其特异性为100%。应用传统分离培养方法和反向线性探针杂交方法分别检测42只KM小鼠和32只SD大鼠,两种方法检测结果一致性为100%。结论反向线性探针杂交检测方法,具有快速、可靠、敏感和特异的特点,可用于沙门菌感染时的检测,适合应用于实验动物沙门菌的监测。
- 魏立雯韦莉张文露潘永全谭毅赖国旗徐永柱
- 关键词：沙门菌实验动物聚合酶链反应
- 反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究被引量：6
- 2012年
- 目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的反向线性探针(reverse lineprobe,RLP)检测方法.方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3’、5’对称加有poly-C的特异性探针和5’标记生物素的扩增引物.将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交.通过优化杂交条件,建立RLP检测方法.利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,同时与直接测序结果比较.结果:半巢式PCR可对103拷贝/ml的血清样本进行有效特异扩增,新建的RLP检测方法可对PCR扩增产物在1ng/ml以上,或血清样本中突变型DNA占野生型DNA比例为5%以上的均可有效检测,86例临床的检测灵敏度为100%,野生型和耐药型的检测准确性分别为98.09%(103/105)、100%(43/43),与直接测序法比,RLP检测野生与耐药混合型准确性更好.结论:反向线性探针杂交检测方法检测HBV拉米夫定耐药位点方便、灵敏、准确,是HBV拉米夫定治疗有效的监控工具,该方法适合临床应用.
- 赖国旗张文露胡源唐红张磊谢素兰潘玥魏立雯黄爱龙
- 关键词：乙型肝炎病毒拉米夫定
- NR6A1在HepG2细胞中抑制HBV转录与复制的初步研究
- 2019年
- 目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,NR6A1)对HBV转录与复制的调控作用。方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc共转染,转染后检测荧光素酶活性,筛选对增强子或核心启动子转录活性有影响的核受体基因。然后在Hep G2细胞中共转染HBV1.3倍体质粒与NR6A1表达质粒;通过Southern blot检测细胞内复制的HBV DNA;Northern blot检测HBV RNA的转录情况。结果:筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基因NR6A1,其作用与对照组(空载和pcore-Rluc共转染)相比,Rluc活性下降约80%,对照组为1.000±0.319,NR6A1组为0.198±0.009(P=0.000)。NR6A1过表达时,BCP(核心启动子,PCH9-1744-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.504±0.023)较对照组(空载和PCH9-1744-Rluc共转染,1.000±0.099)下降约50%(t=6.534,P=0.0226),BCP(核心启动子)+EnhⅡ(PCH9-1636-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.089±0.002)比对照组(空载和PCH9-1636-Rluc共转染,1.000±0.042)下降约92%(t=31.59,P=0.001)。NR6A1N(NR6A1DBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.000±0.170)(P>0.05)。NR6A1C(NR6A1LBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.160±0.078)(P>0.05)。结论:过表达NR6A1通过抑制核心启动子和增强子II的活性能够显著抑制乙肝病毒的复制。
- 魏强魏霞飞甘春杨张文露黄爱龙胡接力
- 关键词：乙肝病毒核受体增强子
