张旻
- 作品数：60 被引量：83H指数：5
- 供职机构：中国检验检疫科学研究院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家质检总局科技计划项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 流行性造血器官坏死病毒焦磷酸测序方法研究
- 2019年
- 为建立流行性造血器官坏死病毒的焦磷酸测序检测方法,本研究针对流行性造血器官坏死病毒ORF65基因的保守区域进行分析,设计扩增引物及测序引物,经PCR扩增后对PCR产物进行焦磷酸测序,通过对反应条件和反应体系的优化,成功建立了该检测方法。试验结果显示,该方法扩增基因片段长度为137 bp,焦磷酸测序长度为38 bp,能够特异性检测出流行性造血器官坏死病毒,最低核酸检测限为0.5 pg/μL,与常规PCR检测方法的符合率达100%。本研究建立的流行性造血器官坏死病毒焦磷酸测序检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为流行性造血器官坏死病毒的快速检测提供了一种可行方法。
- 王娜张旻张舟景宏丽任彤张利峰吴绍强
- 关键词：焦磷酸测序PCR
- 金鱼造血器官坏死病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2017年
- 金鱼造血器官坏死病毒(Goldfish haematopoietic necrosis virus,GFHNV)是一种可感染金鱼等鲤科鱼类,并可导致其死亡的疱疹病毒。为了快速检测病原,本研究根据GFHNV的主要衣壳蛋白(Major captor protein,MCP)序列中的一段保守基因序列,设计引物和Taq Man探针,建立了GFHNV特异性的实时荧光定量PCR检测方法 ;并利用PCR反应扩增出的MCP基因,制备了p UC-GFHNV重组质粒作为阳性对照。经试验,该方法检测限最低可达10个拷贝数的目的基因,而且与锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)、甲鱼虹彩病毒(Softshell turtle iridovirus,STIV)、流行性造血器官坏死病毒(Epizootic haematopoietic necrosis,EHNV)、斑点叉尾鮰病毒(Channel catfish virus,CCV)以及白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)等5种水生动物病毒无交叉反应。该方法具有简便、快速、敏感、特异等优点,为该病的诊断与病原检测提供了一个重要手段。
- 张旻王姝王娜景宏丽徐立蒲吴绍
- 关键词：鱼类病毒病实时荧光定量PCRTAQMAN探针
- Caspase-8和caspase-3在镉致NRK细胞凋亡中的表达变化被引量：5
- 2008年
- 为研究镉致NRK细胞凋亡中caspase-8和caspase-3 mRNA表达的变化,分别将终浓度为0、10、20、40、60μmol/L的CdCl2添加到培养液中,共同培养6 h。应用TUNEL法检测NRK细胞凋亡形态改变;分光光度法检测caspase-8和caspase-3蛋白活性;半定量RT-PCR检测caspase-8、caspase-3 mRNA。结果表明,随着Cd暴露剂量的加大,NRK细胞凋亡指数升高,caspase-8和caspase-3蛋白活性增强,caspase-8、caspase-3 mRNA转录增加,并呈现剂量效应关系。说明,caspase-8和caspase-3在镉引起的NRK细胞凋亡中起重要作用。
- 贾广乐王众吴绍强林祥梅韩雪清刘建梅琳张旻
- 关键词：镉CASPASE-8CASPASE-3
- 蛙虹彩病毒巢式PCR检测方法的建立被引量：10
- 2011年
- 蛙虹彩病毒属(Ranavirus)病毒宿主广泛,可以感染爬行类、鱼类和两栖类,大部分病毒对宿主都有较强的致病性和致死性。为建立一种快速高效的蛙虹彩病毒的检测方法,本研究利用中华鳖虹彩病毒(Soft-shelled Turtle Iridovirus,STIV)核衣壳蛋白(Major Capsid Protein,MCP)基因保守区设计内引物和外引物,建立了特异性检测流行性造血器官坏死病毒(Epizootic Haematopoietic Necrosis Virus,EHNV)、中华鳖虹彩病毒和虎纹蛙虹彩病毒(Tiger Frog Virus,TFV)的巢式PCR(巢式PCR)检测方法,并制备了重组质粒pGem-T-S作为阳性对照标准品。检测限试验结果显示,该方法可以检测102拷贝的病毒粒子。而且与传染性造血器官坏死病毒、鲤春病毒、病毒性出血性败血症病毒、斑点叉尾病毒、传染性胰脏坏死病毒、真鲷虹彩病毒、牙鲆弹状病毒以及锦鲤疱疹病毒等其他非蛙虹彩病毒无交叉反应。该体系具有简便、快速、敏感、特异性高、低成本等特点,为诊断与预防蛙虹彩病毒提供了一项重要的技术手段。
- 张旻林祥梅江育林
- 关键词：巢式PCR
- 一种利用焦磷酸测序技术检测斑点叉尾鮰病毒的引物、试剂盒和检测方法
- 本发明公开了一种利用焦磷酸测序技术检测斑点叉尾鮰病毒的引物、试剂盒和检测方法。具体地，本发明涉及一组利用焦磷酸测序技术检测斑点叉尾鮰病毒的引物，包括如序列表中SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的扩增引物对...
- 王娜吴绍强李霆张旻景宏丽王彩霞张利峰江育林
- 文献传递
- 患病中国大鲵中分离到一株虹彩病毒及其特性的研究被引量：38
- 2011年
- 从陕西某大鲵养殖场患病的大鲵体内分离到一株病毒。患病大鲵以体表溃疡,特别是肢体远端溃烂为主要临床特征。该病毒于10℃~30℃能在BF-2（Caudal trunk cells of blue-gillfry）、CO（Gorad cells of grass carp）、CHSE（Embryo cells of Chinook salmon）、FHM（cells of fathed minnow）等细胞中较好地增殖,最适生长温度为25℃~30℃。病毒对氯仿、热、pH3、pH10敏感,DNA抑制剂5-氟-2′-脱氧尿苷（5-fluro-2-′deoxyuridine,FUDR）能抑制病毒在细胞中的增殖,提示该病毒是有囊膜的DNA病毒。经电镜观察,在感染了病毒的细胞切片中可见到大量直径约130~150 nm有囊膜的六角形病毒颗粒成晶格排列在细胞质里,病毒呈典型的虹彩病毒形态。抽提病毒核酸后进行PCR扩增,用已知蛙病毒主要衣壳蛋白（MCP）基因的保守序列设计的引物能扩增出431bp的片段。扩增的片段测序后,和已知的几种蛙病毒属成员的主要衣壳蛋白基因中的相应片段进行比对,相似性在96%以上。血清学试验结果显示该病毒和IPNV（Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV）、GCRV（Grass carp reovirus,GCRV）、SVCV（Spring viraemia of carp virus,SVCV）I、HNV（Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV）在血清学上没有相关性。以上结果提示该病毒可能是虹彩病毒科蛙病毒属的成员,暂时命名为大鲵虹彩病毒（Andrias davidianus iridovirus,ADIV）。该病毒与大鲵发病的关系有待进一步研究。
- 江育林张旻景宏丽高隆英
- 关键词：病毒病病毒分离
- 鲤春血症病毒单克隆抗体建立及免疫学特性鉴定被引量：3
- 2014年
- 制备高特异性的抗鲤春血症病毒单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。采用差速离心法提纯的鲤春血症病毒作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,4次免疫后,利用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,经过多次亚克隆筛选出高敏感的特异性抗鲤春血症病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株,体内诱生腹水制备抗鲤春血症病毒单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。融合后筛出两株杂交瘤细胞株9C11和1C12,亚型均为IgG2b型,κ链;间接ELISA测定腹水效价为104,与其他病毒株和细胞株不发生反应;western-blot结果显示单克隆抗体对应的抗原位点在相对分子质量(Mr)230 000的条带处;免疫氧化酶染色结果显示单克隆抗体能够特异地识别感染细胞内的鲤春血症病毒。本实验制备的抗鲤春血症病毒单克隆抗体特异性好,为鲤春血症病毒免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。
- 景宏丽张旻王娜李维贾小波方莹高隆英林祥梅吴绍强
- 关键词：单克隆抗体间接ELISA
- 2018-2022年鲫造血器官坏死病病原检测能力验证结果分析
- 2023年
- 通过开展鲫造血器官坏死病(CHN)病原检测能力验证,不断提高中国鲫造血器官坏死病病原检测的整体水平,加强相关实验室鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)检测能力,2018—2022年期间开展了5次该能力验证项目。能力验证样品经均匀性和稳定性检验后,随机组合成每组4份样品发放。依据GB/T 36194—2018《金鱼造血器官坏死病毒检测方法》中推荐的聚合酶链式反应(PCR)方法进行检测,并对各参加单位提交的检测结果进行评价。2018—2022年全国共有411家/次实验室参加,测试结果满意率依次为86.57%、83.10%、86.50%、87.74%和85.86%。能力验证统计结果表明,大部分实验室具备了鲫造血器官坏死病病原检测能力和质量管理水平,可以承担该病原的检测和监测工作,为鲫造血器官坏死病监测预警提供了有力支撑。
- 王娜余卫忠张旻景宏丽王彩霞冯春燕李清吴绍强
- 金鱼吻端细胞系及其应用
- 本发明公开了一种金鱼吻端细胞系及其应用。该金鱼吻端细胞系已于2013年12月4日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），并证明存活，其保藏登记编号为CGMCC No.8558。本发明所述的金鱼吻端...
- 景宏丽高隆英张旻张利峰王娜林祥梅吴绍强江育林
- 文献传递
- 用于蛙虹彩病毒检测的标准阳性参考物质
- 本发明首先设计了一对可特异性扩增甲鱼虹彩病毒核衣壳蛋白全基因的引物，其具有如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。用其扩增出的甲鱼虹彩病毒核衣壳蛋白全基因，具有如SEQID NO.3所示的核苷酸...
- 张旻江育林
