张秀娟
- 作品数：10 被引量：7H指数：2
- 供职机构：广东医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市科技计划项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 无POU域八聚体结合蛋白基因的克隆及其在Hepa1-6细胞内的表达
- 2010年
- 目的构建小鼠无POU域八聚体结合蛋白(non-POU-domain-containing,octamer binding protein,NonO)真核表达载体并在小鼠Hepa 1-6肝癌细胞内表达,观察NonO胞内表达、定位及脂多糖(LPS)对其定位的影响。方法提取小鼠肝组织总RNA,RT-PCR扩增小鼠NonO基因的蛋白编码序列。采用基因重组技术将其亚克隆至pcDNA3-HA真核表达载体中,将该载体瞬时转染Hepa1-6细胞,通过细胞免疫荧光方法观察NonO的胞内表达及LPS对其定位的影响。结果酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;细胞免疫荧光可见NonO在Hepa 1-6细胞内表达、分布于细胞核,LPS刺激后NonO分布无明显变化。结论成功构建NonO真核表达载体,为研究NonO在基因表达调控中作用及其生物功能提供了重要载体。进一步证实NonO为定位于细胞核的核蛋白。
- 张秀娟王娟邓鹏姜勇
- 关键词：蛋白表达蛋白定位
- 脂多糖对S100A8和S100A9在Hepa 1-6细胞内定位的影响
- 2010年
- 目的观察S100钙结合蛋白A8(S100A8)和S100钙结合蛋白A9(S100A9)在细胞内定位及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激对其细胞内定位的影响。方法将带有血凝素(HA)标签的S100A8或S100A9真核表达载体瞬时转染至小鼠Hepa1-6肝癌细胞,通过细胞免疫荧光方法观察S100A8、S100A9的胞内表达、定位及LPS对其定位的影响。结果静息状态下,S100A8、S100A9在细胞浆和细胞核都有分布;LPS刺激细胞2h后,S100A8移位入核,而S100A9在细胞内分布无明显变化。结论LPS刺激后S100A8、S100A9在细胞内的差异分布,提示两者在炎症反应中的作用不同,S100A8可能参与LPS诱导的基因表达调控。
- 张秀娟王娟伍丽琼邓鹏姜勇
- 关键词：脂多糖蛋白定位
- TAT-p38(AF)融合肽的构建及其对紫外线诱导的p38 MAPK通路激活的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的构建TAT蛋白转导域介导的p38(AF)MAPK蛋白转导系统,研究该蛋白转导系统对紫外线刺激引起的p38通路激活作用的影响。方法将p38无活性突变体p38(AF)亚克隆至含有TAT蛋白转导域的pET-14b-TAT质粒,原核表达、纯化His-TAT-p38(AF)融合蛋白。激酶实验检测His-TAT-p38(AF)自身磷酸化作用。将该蛋白与NHI/3T3细胞孵育,Western blot法检测该蛋白的蛋白转导功能;紫外线照射后,检测内源性p38及其底物ATF2的磷酸化水平。结果酶切、测序表明质粒构建正确;目的蛋白被正确表达;His-TAT-p38(AF)融合蛋白无自身磷酸化作用;His-TAT-p38(AF)蛋白以浓度依赖性方式高效转导入细胞;His-TAT-p38(AF)的导入抑制紫外线诱导的内源性p38及其底物ATF2的磷酸化。结论TAT蛋白转运系统能高效转导外源蛋白进入真核细胞;p38无活性突变体TAT-p38(AF)抑制紫外线诱导的p38 MAPK通路的激活。
- 张秀娟刘亚伟王娟邓鹏姜勇
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶紫外线蛋白转导域
- SOD2启动子的克隆及转录活性的检测
- 2009年
- 目的:克隆小鼠锰超氧化物歧化酶基因(MnSOD,SOD2)5非编码区启动子序列,通过报告基因技术检测在静息或脂多糖(LPS)、亚砷酸钠(NaAsO2)等刺激下该段启动子的转录活性。方法:提取小鼠肝组织基因组DNA,PCR扩增小鼠SOD2启动子序列(-1554～+48);采用基因重组技术构建由SOD2启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,将该载体瞬时转染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),荧光显微镜下观察静息或NaAsO2、LPS、佛波酯(PMA)刺激下红色荧光蛋白表达。结果:正确扩增出小鼠SOD2启动子(-1554～+48)片段;成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体,证实该质粒转染MEF细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光,经NaAsO2、LPS、PMA刺激后,红色荧光强度和亮度明显增加。结论:小鼠SOD2启动子(-1554～+48)在静息状态下即具有转录活性,炎性、氧化应激刺激后SOD2表达增强;该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建,为研究SOD2的基因表达调控机制提供了重要基础和工具。
- 张秀娟王娟刘铮王达安刘芸姜勇
- 关键词：锰超氧化物歧化酶启动子基因
- 内毒素血症小鼠Sod2启动子结合差异蛋白的筛选及其功能初步研究
- 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是一种广泛存在于生物体中的金属酶,SOD在抗炎、抗衰老、抗氧化应激、抑制肿瘤、自身免疫疾病方面具有重要的作用。根据分布的不同,真核生物SOD可分为3种:主...
- 张秀娟
- 关键词：内毒素血症锰超氧化物歧化酶启动子转录调控
- 文献传递
- PSF真核表达载体的构建及细胞内表达和定位
- 2010年
- 目的构建小鼠多嘧啶束结合蛋白相关剪切因子(PSF)真核表达载体并在小鼠Hepa1-6肝癌细胞内表达,观察PSF胞内定位及脂多糖(LPS)对其定位的影响。方法提取小鼠肝组织总RNA,RT-PCR扩增小鼠PSF基因的蛋白编码序列;采用基因重组技术将其亚克隆至pcDNA3-HA真核表达载体中,将该载体瞬时转染Hepa1-6细胞,通过细胞免疫荧光方法观察PSF的胞内表达及LPS对其定位的影响。结果酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;细胞免疫荧光可见PSF在Hepa1-6细胞内表达后只分布于细胞核,LPS刺激后PSF分布无明显变化。结论成功构建PSF真核表达载体,为研究PSF在基因表达调控中作用及其生物功能提供了重要载体;进一步证实PSF为定位于细胞核的核蛋白。
- 张秀娟王娟邓鹏姜勇
- 关键词：蛋白定位
- 肿瘤组织中GPC3、Hepatocyte、CD_(34)检测对AFP阴性肝细胞癌的辅助诊断作用被引量：2
- 2014年
- 目的评价肿瘤组织中磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、Hepatocyte、CD34蛋白检测对甲胎蛋白(AFP)阴性肝细胞癌(HCC)的辅助诊断作用。方法回顾性分析48例癌细胞AFP阴性的HCC组织及其癌旁组织中GPC3、Hepatocyte、CD34蛋白表达特点。结果 48例HCC及其癌旁组织中GPC3蛋白阳性率分别为91.7%(44/48)、2.1%(1/48),两者比较P<0.01;Hepatocyte蛋白阳性率分别为95.8%(46/48)、100.0%(48/48),两者比较P>0.05;CD34蛋白阳性率分别为100.0%(48/48)、4.2%(2/48),两者比较P<0.01。HCC组织中GPC3与Hepatocyte表达呈正相关(r=0.314,P<0.05)。结论检测肿瘤组织中GPC3、Hepatocyte和CD34蛋白有助于AFP阴性原发性HCC的诊断。
- 王付强景志亮王志静赵颖海张秀娟陈小毅
- 关键词：肝细胞癌磷脂酰肌醇蛋白聚糖3
- 人铜锌超氧化物歧化酶基因启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体的构建及表达被引量：2
- 2009年
- 目的构建人铜锌超氧化物歧化酶基因(Cu/Zn-SOD,SOD1)启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,并对其功能进行鉴定,为研究细胞内SOD1基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具。方法提取人基因组DNA,PCR扩增SOD1 5′非编码区启动子序列(-1 499-+17);采用基因重组技术构建由SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,将该载体瞬时转染Hella细胞,观察静息或佛波酯(PMA)刺激下红色荧光蛋白表达,以检测SOD1启动子的转录活性及其基因表达。结果酶切和DNA测序证明所构建红色荧光蛋白报告基因载体正确;该表达载体静息状态下在Hella细胞表达少量红色荧光蛋白,经PMA刺激后,能够表达较多高亮度的红色荧光蛋白。结论成功构建了SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,其对相关刺激有很好的反应,可用于SOD1基因表达信号调控机制的研究。
- 张秀娟黄劭刘亚伟陈茜邓鹏姜勇
- 关键词：超氧化物歧化酶转录启动子
- 高迁移率族蛋白HMGB2的细胞内定位及移位研究
- 2009年
- 目的观察鼠高迁移率族蛋白B2(HMGB2)在真核细胞中的定位和移位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到HMGB2编码序列。然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒命名为pcDNA3-HA-HMGB2,随后将其转染NIH3T3细胞。荧光显微镜观察仅转染质粒的细胞和质粒转染与亚砷酸钠刺激30min和1h后细胞内HA-HMGB2融合蛋白的定位及移位情况。结果重组质粒经酶切、聚合酶链反应(PCR)和测序鉴定证明构建正确,并在NIH3T3细胞中得到大量表达。荧光显微镜观察发现,HA-HMGB2蛋白主要分布于细胞核中,经亚砷酸钠刺激后30min,部分细胞中的蛋白从胞核移位到胞质,刺激1h后蛋白则主要分布于胞质中。结论成功构建带HA标签的HMGB2真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位、移位,为下一步深入研究HMGB2作用细胞的信号通路提供了一个重要工具。
- 王娟刘铮徐佳张秀娟伍丽琼邓鹏姜勇
- 关键词：高迁移率族蛋白质类血凝素类
- 不含POU结构域的八聚核苷酸结合蛋白(NONO)真核表达载体的构建及其细胞内定位被引量：1
- 2011年
- 目的构建小鼠的不包含POU结构域的八聚核苷酸结合蛋白(NONO)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达和定位。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到NONO编码序列,将该序列克隆至带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒pcDNA3-NONO-HA。通过PCR、双酶切鉴定构建正确后以脂质体为媒介转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察该融合蛋白在细胞内的表达及定位情况。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明构建正确,且能在NIH3T3细胞中得到大量表达。荧光显微镜观察发现NONO-HA融合蛋白在静息状态下主要分布于胞质中。结论成功构建带HA标签的NONO真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达NONO-HA融合蛋白。
- 吴翠玲张秀娟王娟刘爱华姜勇
- 关键词：血凝素类基因表达重组融合蛋白质类
