李司
- 作品数：17 被引量：12H指数：2
- 供职机构：浙江理工大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省教育厅科研计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- Aβ42基因在大肠杆菌中的表达及诱导BALB/c小鼠的抗体产生被引量：2
- 2014年
- 目的研究纯化大肠杆菌中Aβ42蛋白的表达情况,并探索该蛋白接种小鼠后抗体的产生情况。方法构建表达载体pGEX-4T-1-Aβ42,设置不同的诱导温度来进行Aβ42在大肠杆菌中表达。用SDS-PAGE、GST柱及Western blot来鉴定纯化目的蛋白。动物实验中,用福氏佐剂采用背部多点注射的方式免疫BALB/c小鼠3次。间接ELISA法检测免疫小鼠血清和脑组织匀浆上清液中特异性抗体的滴度。结果在25℃下,经1.0 mmol/L的IPTG诱导后该蛋白表达量最多,实现可溶性表达。小鼠实验中,第2次免疫后,Aβ42蛋白组小鼠的免疫血清有抗Aβ42抗体产生,且第三次免疫后,抗体数量增高。同时,在脑组织匀浆上清液中也可检测出低滴度的抗Aβ42抗体。结论在大肠杆菌中可获得了高纯度的可溶性Aβ42蛋白。该蛋白结合福氏佐剂免疫BALB/c小鼠后,可诱导小鼠产生特异性的抗Aβ42抗体。
- 牟玲燕沈蒋君孙爱群舒建洪李司
- 关键词：大肠杆菌AΒ42可溶性蛋白
- 2种家蚕蛋白酶抑制剂的重组表达及产物对胰岛素口服吸收的影响
- 2017年
- 口服胰岛素(INS)治疗糖尿病存在因胃肠道的蛋白酶而发生药物降解的问题。从家蚕蛹中分离了Bm Kazal、Bm CP82种蛋白酶抑制剂,设计其编码基因引物序列克隆2个目的基因,构建重组表达载体p ET28a-Bm Kazal和p ET32a-Bm CP8在大肠埃希菌(Escherichia coli)中表达并纯化了重组Bm Kazal和Bm CP8蛋白。将这2种蛋白酶抑制剂与INS混匀制成INS口服悬液给小鼠灌胃,研究其对INS口服吸收的影响。试验结果表明:按1.5 IU/kg剂量皮下注射INS的对照组小鼠,血药达峰浓度C_(max)为(7.56±1.40)m IU/L,达峰时间T_(max)为1 h;口服0.5μg/μL Bm CP8+15 IU/kg INS组、0.5μg/μL Bm Kazal+15 IU/kg INS组、0.5μg/μL Bm CP8+0.5μg/μL Bm Kazal+15 IU/kg INS组小鼠的血药达峰浓度C_(max)分别为(6.07±0.51)、(7.12±0.89)、(9.20±2.00)m IU/L,达峰时间T_(max)均为3 h;而按15 IU/kg剂量单纯口服INS对照组小鼠的血药浓度一直维持在4.32 m IU/L左右。以上结果说明Bm CP8、Bm Kazal能够协同INS经小鼠胃肠道口服吸收入血液,而且二者联合使用效果更好,使小鼠体内对INS的口服生物利用度由1.51%提高至4.17%,有促进小鼠对胰岛素口服吸收的作用。
- 赵梦茹王丹夏良存李司李司
- 关键词：胰岛素口服吸收小鼠
- HIV病毒结构蛋白Gag在家蚕中的表达
- 人类免疫缺陷病毒HIV-1(human immunodeficiency virus,HIV)是艾滋病(AIDS)的主要病原之一。Gag基因编码HIV病毒的核心蛋白,Gag蛋白有自我装配功能,并能激发体液免疫和细胞免疫~...
- 李司陈贝妮何丹枫章杰黄梦园邹日泽麦丽丽
- 关键词：GAG蛋白
- 文献传递
- 利用家蚕生物反应器表达轮状病毒VP6蛋白的方法
- 本发明公开了一种重组病毒BmNPV-RVVP6的获得方法，包括以下步骤：1）选用A组轮状病毒VP6基因；2）构建重组转移载体质粒pBacPAK<Sub>8</Sub>-RVVP6；3）将构建所得的重组转移载体质粒pBac...
- 李司张耀洲
- 文献传递
- 导师制+学团制:生物科学人才培养模式探讨被引量：3
- 2014年
- 结合浙江理工大学生命科学学院生物技术、生物制药专业及省级实验教学示范中心建设的情况,以教学改革为试点和动力,构建"导师制+学团制"的人才培养系统工程,发挥学生工作管理者、导师、学生的作用,有效实施并科学评价"导师制+学团制",以达到建立一套全新的生物科学人才培养模式之目的,培养理论知识扎实、实验动手能力强、综合素质高的优质人才。
- 张文平陆秋萍李司金甲王丹吕正兵盛清
- 关键词：导师制生物科学教育改革
- CTB-Aβ42融合蛋白的原核表达条件优化及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的探索融合基因CTB-Aβ42在大肠杆菌中表达的最适条件,并纯化得融合蛋白。方法设置不同的诱导温度、诱导时间、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度,在大肠杆菌中表达融合基因CTB-Aβ42,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定表达产物,GST亲和色谱柱纯化目的蛋白,Western blot鉴定目的蛋白免疫原性。结果 SDS-PAGE结果显示,GST-CTB-Aβ42融合蛋白分子质量约为45 kD,与预期结果一致;Western blot结果表明,纯化得到的目的蛋白具有免疫原性。在诱导条件为30℃,0.1 mmol/L IPTG诱导2 h表达的可溶性蛋白所占比例最高;在37℃,0.1mmol/L IPTG诱导4 h表达的融合蛋白总量最高,小部分可溶性表达,大部分以包涵体的形式存在。结论本实验对CTB-Aβ42融合蛋白的原核表达条件进行了优化,经GST亲和色谱柱纯化获得具有免疫原性的融合蛋白。
- 程晶晶潘斯科钟云平张涵铭王驰余帅于威李司
- 关键词：Β-淀粉样蛋白可溶性表达胞内表达
- 人类免疫缺陷病毒HIV结构蛋白Gag在家蚕杆状病毒表达系统中的表达被引量：1
- 2015年
- 人类免疫缺陷病毒(HIV)是导致艾滋病的主要病原之一,HIV病毒的核心结构蛋白Gag有自我装配功能,并能激发体液免疫和细胞免疫,是理想的HIV疫苗靶抗原。将Gag基因克隆至质粒p Bac PAK8中构建重组质粒,并与线性化的家蚕杆状病毒基因组DNA共转染Bm N细胞,得到重组家蚕杆状病毒Bm NPV-Gag。将该重组病毒感染Bm N细胞和家蚕5龄幼虫,SDS-PAGE、Western blotting检测显示在重组病毒感染的Bm N细胞和家蚕5龄幼虫血淋巴中均有与Gag蛋白大小(55 k D)相符的特异性条带出现,证明重组Gag蛋白成功表达。用ELISA法测定重组病毒感染后不同时间目的蛋白质的表达变化:Bm N细胞中的Gag蛋白含量在感染后的第4天达到最大值6.995 pg/个,在感染第5天后出现下降趋势;5龄幼虫血淋巴中的Gag蛋白含量在感染后的第7天最高,为790.1 ng/m L。重组Gag蛋白在家蚕杆状病毒表达系统中的成功表达,为艾滋病疫苗的研究探索了新的途径。
- 陈贝妮何丹枫章杰黄梦园邹日泽麦丽丽李司
- 关键词：GAG蛋白杆状病毒表达系统BM家蚕幼虫
- 聚合高分子电解质分离纯化蛋白质
- 2011年
- 聚合高分子电解质含有大量阳离子或阴离子,通过静电作用结合带相反电荷的蛋白质,生成聚合高分子电解质-蛋白质复合物,电解质-蛋白质复合物通过桥连作用或疏水作用形成沉淀颗粒;聚合高分子电解质的选择性沉淀作用受电解质的分子量、添加剂量、溶液离子强度和pH的影响。用高分子电解质从大规模的低浓度溶液中选择性地沉淀目的蛋白质,为生物工程的下游处理开辟了一条新途径。
- 张海花李司童富淡
- 关键词：碱性蛋白生物工程
- HIV病毒结构蛋白Gag在家蚕中的表达
- 人类免疫缺陷病毒HIV-1(human immunodeficiency virus,HIV)是艾滋病(AIDS)的主要病原之一。Gag基因编码HIV病毒的核心蛋白,Gag蛋白有自我装配功能,并能激发体液免疫和细胞免疫。...
- 李司陈贝妮何丹枫章杰黄梦园邹日泽麦丽丽
- 关键词：GAG蛋白
- 家蚕生物反应器表达A组轮状病毒结构蛋白VP7
- 2019年
- A组轮状病毒(rotavirus,RV)是引起某些幼龄动物患急性胃肠炎的主要病原之一,给家畜养殖业造成严重的经济损失。VP7蛋白是RV最外层的糖蛋白,具有强抗原性和免疫原性。本研究构建了重组家蚕杆状病毒BmNPV-VP7,并分别感染家蚕细胞、家蚕5龄幼虫以及蚕蛹。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,在重组病毒感染的家蚕细胞、5龄幼虫以及蚕蛹中均检测到35 ku的特异性条带,说明成功表达了VP7蛋白。ELISA检测结果显示,VP7蛋白在家蚕细胞和蚕蛹中的表达分别在感染后第5天和第7天达到最高水平;而在家蚕5龄幼虫中,VP7蛋白表达量不高。家蚕具有食用和药用价值,我们构建的重组家蚕杆状病毒BmNPV-VP7在家蚕生物反应器中成功表达了VP7蛋白,为A组轮状病毒疫苗的研制提供了一条新途径。
- 王蓓蕾孙爱群李司
- 关键词：VP7蛋白A组轮状病毒
