李国东
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 组蛋白赖氨酸残基去甲基化酶4B过表达对乳腺癌细胞MCF-7侵袭迁移能力的影响
- 2014年
- 目的 构建组蛋白赖氨酸残基去甲基化酶4B（KDM4B）过表达乳腺癌细胞株MCF-7,观察KDM4B对MCF-7侵袭迁移能力的影响,并探索其机制.方法 利用KDM4B慢病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7,筛选KDM4B过表达稳定细胞株,Western blot法检测MCF-7细胞中KDM4B基因蛋白表达;迁移实验、侵袭实验观察过表达KDM4B对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测细胞上皮-间充质转化相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达.结果 Western blot法验证过表达KDM4B的乳腺癌细胞株MCF-7构建成功;迁移实验中过表达KDM4B细胞穿膜数目[（94±8）个]较对照组[（36±6）个]明显增多,侵袭实验中过表达KDM4B细胞穿膜数目[（18±2）个]较对照组[（5±1）个]明显增多,差异均有统计学意义（P＜0.01）;过表达KDM4B细胞中E-cadherin表达量较对照组明显降低,Vimentin表达量较对照组明显增高.结论 过表达KDM4B基因可促进乳腺癌细胞株MCF-7上皮-间充质转化过程,并提高细胞迁移、侵袭能力.
- 李海杰杨熹葛宗庆兰静芩李国东付寅佳穆磊江旭林胡俊波罗学来
- 关键词：乳腺癌上皮-间充质转化迁移
- 利用可控表达Cyclin B1的单克隆细胞株寻找与Cyclin B1结合的蛋白
- 2012年
- 目的利用已经构建好的四环素诱导细胞周期素B1(Cyclin B1)表达的单克隆细胞株,探索可能与Cyclin B1相互作用的蛋白。方法加入四环素的单克隆细胞株能表达带有Myc和His标签的Cyclin B1。将未诱导和用四环素诱导48h的细胞裂解后,分别加入10μg Myc的单克隆抗体,用免疫沉淀法(immune precipitation,IP)沉淀可能和Cyclin B1相作用的蛋白,将蛋白混合物行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用考马斯亮蓝染色法和银染法明确差异蛋白,再用质谱(massspectrometry,MASS)行蛋白鉴定。结果用质谱鉴定出的蛋白有细胞周期素依赖蛋白激酶1(Cyclin-dependent kinase1,CDK1),细胞周期素依赖蛋白激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK2),有丝分裂阻滞缺失样蛋白1(Mitotic arrest deficient-like protein 1,MAD1-like 1,MAD1L1)和热休克蛋白8(heat shock 70kD protein 8isoform 1)。结论除CyclinB1和CDK1直接相互作用外,Cyclin B1与CDK2、MAD1L1和热休克蛋白8都可能有直接或间接的相互作用。
- 何乐亚魏欣徐丰闵江刘鹭李国东傅寅佳陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：细胞周期素B1四环素免疫沉淀质谱
- 增殖细胞核抗原与p55PIK结合调控乳腺癌细胞MCF7增殖的研究被引量：3
- 2015年
- 目的观察p55PIK对乳腺癌细胞MCF7细胞周期及增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法通过转染质粒或特异性si RNA,在乳腺癌MCF7细胞中过表达或低表达p55PIK,继而通过免疫印迹法检测p55PIK的表达,通过Brd U/PI双掺入法测定细胞DNA合成及细胞周期,并用CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒检测细胞增殖,最后通过免疫共沉淀技术检测明确p55PIK是否可以与增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)相结合。结果 p55PIK过表达质粒及si RNA可分别使MCF7细胞中p55PIK成功过表达或低表达,而且过表达p55PIK可加快MCF7细胞的DNA合成,p55PIK组[DNA合成比率为(56.33±1.63)%]与Vector组[DNA合成比率为(26.27±1.85)%]比较差异有统计学意义(P<0.01),过表达p55PIK促进MCF7细胞从G0/G1期进入S期,从而调节其增殖,p55PIK组[OD450nm:(1.46±0.04)]与Vector组[OD450nm:(1.16±0.16)]比较差异有统计学意义(P<0.05),而低表达p55PIK可抑制上述过程。免疫共沉淀证实p55PIK与PCNA之间可以相结合。结论 p55PIK可促进乳腺癌细胞MCF7细胞周期进程及增殖,而且p55PIK可与PCNA相结合。
- 杨熹李海杰李国东傅寅佳罗学来龚建平胡俊波
- 关键词：细胞周期增殖乳腺癌增殖细胞核抗原
- TAT-N24穿膜融合多肽对白血病细胞系HL60分化的影响
- 2013年
- 目的:观察TAT-N24穿膜融合多肽对急性髓系白血病细胞株HL60分化的影响。方法:TAT-N24作用于HL60细胞后,采用流式细胞术检测白血病分化指标CD11b及CD14,并观察HL60细胞经TAT-N24处理后的形态学变化,及BrdU/PI双掺入法测定DNA的合成。结果:HL60细胞在TAT-N24处理后,CD11b和CD14表达增高,且增高的趋势呈现TAT-N24浓度依赖性,同时形态学观察呈分化趋势,而且TAT-N24可以协同全反式维甲酸,增强其促进分化的作用。与此同时,BrdU/PI双掺入法显示TAT-N24使HL60细胞的增殖发生抑制。结论:TAT-N24穿膜融合多肽可促进急性髓系白血病细胞株HL60的分化,抑制其增殖,联合应用TAT-N24和全反式维甲酸具有明显的协同作用;TAT-N24有望被开发为有效的白血病分化治疗药物。
- 杨熹王桂华曹小年李国东傅寅佳胡俊波邓豫
- 关键词：白血病HL60细胞株分化
