李硕
- 作品数：38 被引量：61H指数：4
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学自动化与计算机技术更多>>
- 灰飞虱高带毒(RSV)群体酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：9
- 2011年
- 为了研究灰飞虱Laodelphax striatellus Fallén与水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)互作机制,本研究构建了灰飞虱高带毒群体酵母双杂交cDNA文库。以实验室筛选的灰飞虱高带毒群体为材料,分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,并连接三框型接头,层析柱分级纯化。采用同源重组反应制备三框型cDNA入门文库,再通过同源重组将入门文库转移到Gateway兼容载体pGADT7-DEST上,构建获得酵母双杂交cDNA文库。检测结果表明:文库库容量为3.68×107cfu,扩增文库滴度为2.62×1010cfu/mL;文库重组率大于95%,cDNA插入片段平均长度>1kb,达到了标准cDNA文库的要求。灰飞虱高带毒群体酵母双杂交cDNA文库的构建为开展昆虫介体与水稻条纹病毒互作机制的研究奠定了基础。
- 李硕孙丽娟李醒熊如意徐秋芳周益军
- 关键词：灰飞虱水稻条纹病毒同源重组CDNA文库
- 玉米黄花叶病毒外壳蛋白的特征分析及亚细胞定位被引量：1
- 2023年
- 玉米是中国种植面积最大的作物,可作为粮食、饲料和工业原料,玉米病毒病害是玉米最为严重的病害之一,对玉米生产威胁巨大。玉米黄花叶病毒(Maize yellow mosaic virus, MaYMV)于2016年由Chen等^([1])在中国首次发现并报道,随后在亚洲其他国家、南美洲和非洲等地被相继报道^([2-9])。在中国,该病毒已扩散至云南、四川、福建、安徽和河南等地^([10])。
- 王海涛董岩任春梅宛柏杰李硕程兆榜季英华
- 关键词：外壳蛋白亚细胞定位
- 利用小RNA深度测序技术检测灰飞虱病毒种类被引量：1
- 2022年
- 灰飞虱是一种重要农业害虫,作为病毒介体,可以传播多种植物病毒引起水稻、小麦和玉米等粮食作物病毒病害。目前对于灰飞虱体内昆虫病毒种类尚缺乏系统认识,难以开展利用昆虫病毒防治灰飞虱相关研究工作。为挖掘灰飞虱体内昆虫病毒资源,本文通过小RNA深度测序技术对灰飞虱所携带的病毒种类进行分析鉴定。结果显示,测序数据比对得到13种病毒,涉及8个病毒科和2种未分类病毒。除占据优势的水稻条纹病毒外,其余均为专性寄生的昆虫病毒,包括5种正链RNA病毒、2种单链DNA病毒和5种双链DNA病毒。在这些病毒中,发现了一种与果蝇A病毒较相似的新病毒,克隆出其依赖RNA的RNA聚合酶(RdRP)基因1-1 932位核酸序列,经Blast比对和系统进化分析,在氨基酸序列中发现RdRP掌型亚结构域保守区呈现复制酶置换四体病毒科(Permutotetraviridae)病毒所具有的"C-A-B"排列样式,确定该病毒是一种新的类复制酶置换四体病毒,暂命名为Laodelphax striatellus permutotetra-like virus(LsPLV)。这是首次在半翅目昆虫中发现类复制酶置换四体病毒。本研究表明灰飞虱体内昆虫病毒种类较为丰富,为今后利用昆虫病毒生物防治灰飞虱奠定了基础。
- 朴君张璐婕朴敬爱周益军周益军
- 关键词：灰飞虱昆虫病毒
- 水稻条纹病毒介体灰飞虱体内病毒互作因子的筛选
- 近年来,水稻条纹叶枯病在我国广大稻区暴发流行,对水稻生产构成极大威胁。该病是由灰飞虱(Laodelphax Striatellus Fallen)传播水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)引起的,病毒...
- 李硕王锡锋周益军
- 文献传递
- 灰飞虱actin基因的克隆及原核表达
- 2014年
- 通过生物信息学分析获得了灰飞虱actin基因的序列信息,采用RT-PCR方法从灰飞虱中克隆了actin基因的开放阅读框,并将其在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。序列分析结果表明,该基因开放阅读框长1 131 bp,编码377个氨基酸,蛋白质理论分子量为4.17×104,理论等电点为5.28。将此序列登录GenBank数据库,登录号为KC683802。序列比对发现,该基因序列在多个物种间保守,与褐飞虱actin基因的同源性高达95%。构建的原核表达载体pET32a-actin,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行获得表达,SDS-PAGE分析结果表明,表达的蛋白质主要存在于包涵体中。
- 陈晴晴李艳舞倪海平徐秋芳张金凤李硕周益军
- 关键词：灰飞虱肌动蛋白基因克隆原核表达
- 玉米黄花叶病毒运动蛋白的特征分析及其在昆虫细胞内的亚细胞定位
- 2025年
- 玉米黄花叶病毒(Maize yellow mosaic virus,MaYMV)是一种具有潜在流行风险的植物病毒,然而目前关于其蛋白质的特征及亚细胞定位情况研究较少。本研究选用2022年采自江苏省的MaYMV作为研究对象,对其运动蛋白(Movement protein,MP)进行分析,结果发现MP为相对分子量21 230的亲水性蛋白质,该蛋白质不含核定位信号、信号肽和跨膜区,二级结构主要呈无规则卷曲形式,且具有Luteo_Vpg功能域。利用Bacmids-MaYMV-MP-His重组穿梭质粒表达系统发现,MP定位于细胞质,进一步通过蛋白质印迹(Western-blot)法验证了MP的表达。该研究探明了MaYMV MP的特征及其亚细胞定位,有望为后续进一步分析MaYMV MP功能及其与介体蚜虫之间的相互作用奠定基础。
- 郭思思任春梅李硕季英华王海涛程兆榜
- 关键词：运动蛋白亚细胞定位
- 一种可阻断灰飞虱传播水稻条纹病毒水稻材料的创制方法
- 本发明提供了一种可阻断灰飞虱传播水稻条纹病毒水稻材料的创制方法，属农业科学技术领域。根据水稻条纹病毒(RSV)糖蛋白NSvc2‑N介导病毒侵染介体灰飞虱中肠这一特点，选取其中的NSvc2‑N<Sub>S</Sub>片段(...
- 李硕卢成晔季英华周益军
- 江苏蚕豆三叶草黄脉病毒的分子鉴定及全基因组结构特征分析
- 2022年
- 三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus,ClYVV)是马铃薯Y病毒属的重要成员,侵染多种豆科作物并造成严重危害。为明确从江苏省盐城市采集的蚕豆样品中检测出的ClYVV全基因组序列以及基因组结构特征,通过分段扩增的策略对ClYVV全基因组序列进行克隆,序列测定后拼接获得江苏蚕豆三叶草黄脉病毒(ClYVV-JS)全基因组序列。基因组序列分析结果显示该分离物基因组序列全长9585 bp,编码11个蛋白质。NCBI序列比对结果表明该分离物与已报道的日本ClYVV No.30分离物(AB011819)核苷酸序列同源性最高,达96.37%,其中编码的氨基酸序列同源性高达99.06%,而与中国合肥ClYVV分离物(KU922565)核苷酸序列同源性相对较低(94.74%)。聚类分析结果也显示ClYVV-JS归入三叶草黄脉病毒分支,与马铃薯Y病毒属其他成员分别归入不同分支。
- 高晓晓涂丽琴孙枫李硕崔晓艳陈新章松柏季英华
- 关键词：蚕豆全基因组
- 一种快速检测灰飞虱体内水稻条纹病毒和水稻黑条矮缩病毒的方法
- 本发明提供了一种快速同步检测昆虫介体灰飞虱体内水稻条纹病毒(RSV)和水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)的方法，属植物保护领域。根据水稻条纹病毒RNA4和水稻黑条矮缩病毒S2核苷酸序列设计三条引物：[A]RS-F，[B]RB...
- 李硕季英华王喜周益军
- 文献传递
- 酵母双杂交筛选灰飞虱体内水稻黑条矮缩病毒p10的互作蛋白被引量：5
- 2013年
- 为获取灰飞虱体内传播RBSDV相关介体因子,以RBSDV编码的外层外壳蛋白p10为诱饵,采用酵母双杂交方法从灰飞虱cDNA文库中筛选与RBSDV p10互作的蛋白。将RBSDVp10基因构建至pGBKT7载体获得诱饵表达载体pGBKT7-p10。自激活实验结果表明,p10蛋白对酵母细胞无毒性,也不具有自激活活性。通过pGADT7-cDNA文库质粒转化含有pGBKT7-p10的酵母AH109筛选获得灰飞虱cDNA文库中与p10互作的蛋白。文库筛选共获得326个阳性克隆。测序结果表明这些阳性克隆编码14种不同的互作蛋白,包括Actin 1,GAPDH,RACK等。这些互作蛋白参与胞吞胞吐作用和膜融合等过程,可能与病毒在介体内的循回和增殖相关。
- 徐秋芳陈晴晴张金凤李硕倪海平周益军
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白酵母双杂交
