杨伟
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 甲型肝炎减毒活疫苗生产中病毒释放的最佳方法探索被引量：2
- 2001年
- 目的 探索甲型肝炎减毒活疫苗 (简称甲肝活疫苗 )生产中感染细胞释放病毒的最佳方法。方法 采用超声波细胞粉碎仪、- 70℃及液氮冻融 3种方法粉碎细胞 ,对细胞破碎情况、病毒抗原滴度和感染性滴度进行了比较。结果 超声波连续粉碎 3次 (90秒 /次 )、- 70℃反复冻融粉碎 4次和液氮冻融粉碎 6次 ,细胞破碎率分别为 94%、82 %和 81% ;病毒抗原滴度和感染性滴度均达高峰 ;抗原滴度均为 1∶2 5 6 ,感染性滴度 (logCCID50 /ml)分别为 8 6 7、6 5和 6 0。继续超声和 -70℃冻融粉碎细胞 ,病毒抗原滴度和感染性滴度基本不变 ,而液氮冻融至第 10次时 ,抗原滴度无明显变化 ,感染性滴度下降2 0logCCID50 /ml。结论 超声波破碎率最高 ,细胞碎片最小 ,病毒充分释放 ,且不损伤病毒 ;- 70℃和液氮冻融破碎率较低 ,细胞碎片较大 ,病毒释放效率低 ,病毒损伤以液氮冻融为重。
- 杨净思胡云章蒋国润杨晓蕾柯华昕杨伟杨蓉
- 关键词：甲型肝炎减毒活疫苗超声波冻融
- 无针皮内免疫接种Sabin IPV疫苗的安全性及免疫原性研究被引量：3
- 2020年
- 全球消灭脊髓灰质炎野病毒后,必须全面使用脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)才能维持无脊灰状态,然而IPV成本较高,难以满足全球需要。皮内免疫途径能够降低Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)(Inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strains,sIPV)的抗原量,本研究将评估无针皮内免疫sIPV的安全性及免疫原性。本研究采用中国医学科学院医学生物学研究所生产的sIPV进行1/5(0.1 ml)剂量无针皮内免疫接种Wistar大鼠,并设计全剂量肌肉免疫对照组以及无针皮内免疫阴性对照组,按0月、1月、2月基础免疫程序,于免疫前及每剂免疫后第30 d采血,检测血清中和抗体水平,评价免疫原性,并通过观察大鼠的皮肤刺激反应及豚鼠的全身过敏反应,评价安全性。Wistar大鼠3剂免疫后,1/5剂量皮内免疫组与全剂量肌肉免疫组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率均达到100%,各型别中和抗体几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)均远高于1∶8保护水平。大白鼠接种疫苗后体重增加,皮肤刺激试验及全身过敏反应试验结果表明无针皮内免疫sIPV具有良好的安全性。本研究结果表明sIPV疫苗无针皮内注射免疫安全、有效,并可降低sIPV的抗原量,可为全球消灭脊髓灰质炎提供可负担得起的疫苗。
- 朱文勇蔡玮王东宝杨伟孙溢胡文著宋绍辉李卫东廖国阳陈洪波马磊
- 关键词：安全性免疫原性
- pH值对甲肝减毒活疫苗后处理得率的影响被引量：1
- 2001年
- 在甲肝减毒疫苗生产工艺中不同pH对疫苗得率有一定的影响 ,为提高疫苗的产量 ,在传统的氯仿抽提条件下 ,使用不同pH值 (pH1.0～ 12 .0 )的磷酸盐缓冲体系进行氯仿抽提 ,检测抽提后甲肝病毒(HepatitisAVirus ,HAV)抗原滴度和感染性滴度 ,结果表明 :经氯仿抽提后 ,HAV抗原滴度和感染性滴度均在pH8.0～ 9.0时最高 ,相应得率也比常规处理的得率有显著的提高 .说明改进pH抽提条件对甲型肝炎减毒活疫苗后处理工艺效率的提高 ,成品疫苗产量的增加具有实际应用价值 .
- 胡凝珠王晓辉柯华昕杨丽仙杨伟路虹吴忠香金琼仙杨净思
- 关键词：甲型肝炎减毒活疫苗PH值生产工艺后处理得率
- H_2株甲肝减毒活疫苗安全性及免疫效果观察被引量：1
- 2005年
- 目的观察单层及悬浮吸附工艺不同收毒时间生产的H2株甲型肝炎减毒活疫苗(以下简称甲肝活疫苗)接种恒河猴的安全性及免疫效果。方法筛选甲肝抗体阴性,丙氨酸转胺酶(ALT)正常的恒河猴15只,随机分为3组,每组5只,下肢静脉注射疫苗1 ml/只。接种3 d内,每天观察有无局部和全身反应,0,2,3,4,6,8周采血测ALT及甲肝抗体,0,4,8周肝穿做组织病理检查,观察到期尸检。结果接种疫苗3 d内,所有恒河猴均无局部和全身反应。观察全程ALT正常,肝脏无特殊组织病理改变。免后4周甲肝抗体全部阳转,单层工艺26 d疫苗、悬浮工艺23和26 d疫苗几何平均滴度(GMT)4周分别为9.2,14.9和27.9;8周分别为32,64和64;悬浮工艺23 d和26 d疫苗猴体免疫效果相似,且两者均明显优于单层工艺疫苗。结论悬浮吸附工艺23 d收毒疫苗接种恒河猴具有较好的安全性和可靠的免疫效果,采用悬浮吸附工艺生产H2株甲肝活疫苗23 d收获病毒较经济和稳妥。
- 杨净思陈洪波杨晓蕾杨伟丁雪凤张云昆潘玥张鸣
- 关键词：恒河猴免疫效果
- 甲型肝炎疫苗生产工艺优化关键技术及应用研究
- 杨净思谢忠平张丽旌邵聪文杨晓蕾陈洪波龙润乡杨伟易力李国良申峰
- 甲型肝炎(简称甲肝)是一类高发病率的肠道传染病，由于其流行的普遍性和严重性，已成为一个世界性公共卫生问题。中国是世界上甲肝流行最严重的国家之一，在病毒性肝炎中发病率及感染率很高。即使在低发区和非流行时，一般都占急性病毒性...
- 关键词：
- 关键词：甲型肝炎疫苗生产工艺
- 一种F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化制备方法
- 本发明公开了一种F基因型腮腺炎减毒活疫苗的规模化制备方法。包括KMB‑17细胞的传代与计数、病毒收获液制备、疫苗原液制备、疫苗半成品、成品制备。本发明首创在细胞工厂中，以人二倍体细胞为基质规模化制备F基因型腮腺炎病毒减毒...
- 李琦涵王晶晶刘龙丁车艳春李卫东梁燕王微张莹杨伟邱恒杨振清
- 文献传递
- 应用同源重组技术快速构建乙型流感M蛋白通用疫苗的表达载体被引量：2
- 2017年
- 目的应用同源重组技术快速构建pUC57和乙型流感M基因的表达载体。方法分析2006~2016年世界卫生组织在北半球推荐使用乙型流感病毒疫苗株的变化趋势和云南省内的优势流行病毒株,筛选4株典型毒株做实验毒株。提取病毒RNA基因组,进行RT-PCR后,胶回收后与线性化的载体pUC57后,在37℃同源重组30min,即完成一步法重组。通过转化大肠杆菌筛选阳性克隆,并对阳性质粒进行PCR、酶切和测序鉴定。将表达产物进行初步纯化后免疫小鼠,经过三次加强免疫后,通过中和实验评价表达产物的免疫效果。结果平板菌落数计数法获得的同源重组阳性率83.3%,PCR阳性质粒能获得大小正确的目的片段,使用EcoRⅠ单酶切后,其大小正确,测序后发现质粒碱基没有发生突变或缺失,序列正确,同源重组技术共计耗时34h。中和实验结果显示,相同谱系内的抗原保护效价在1024,并在不同谱系间的交叉保护在256~512。结论同源重组技术能在流感通用疫苗的上游开发环节中快速、高效的构建重组质粒,表达产物能够诱导小鼠产生良好的免疫保护效果。
- 高承刚杨伟李卫东伍胤杰郑俊杰李开伟钏鸿云赵卫中郑勇史小军廖国阳
- 关键词：同源重组乙型流感病毒快速克隆
- 流感病毒超滤工艺的优化被引量：2
- 2018年
- 目的分析截留相对分子质量不同的超滤膜浓缩对流感病毒纯化效果的影响,以获得杂质含量低的高浓度病毒液。方法将H1N1、H3N2、Bv和By 4个型别流感病毒分别接种9~11日龄鸡胚,经(34±1)℃培养72 h后,收获尿囊液,经连续流离心获得澄清的病毒液后,再进行截留相对分子质量1 000 000、300 000的超滤膜及其两种超滤膜组合的超滤浓缩,测定超滤前后的总蛋白含量、卵清蛋白含量和血凝滴度。结果截留相对分子质量1 000 000的超滤膜超滤后,杂质去除率高,均在80%以上,截留相对分子质量300 000的超滤膜超滤后杂质去除率相对低,但后者病毒回收率较高,二者组合既能降低杂蛋白含量,又可提高病毒回收率。结论流感病毒鸡胚尿囊液采用截留相对分子质量1 000 000+300 000超滤膜组合超滤浓缩,病毒纯化效果较好。
- 高菁霞宋绍辉王东宝杨伟欧阳圣洁代小虎马磊廖国阳李卫东
- 关键词：流感病毒鸡胚尿囊液超滤纯度
