林立鹏
- 作品数：12 被引量：86H指数：4
- 供职机构：西南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市科技攻关计划高等学校学科创新引智计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 家蚕抗菌肽被引量：4
- 2007年
- 抗菌肽具有理化性质稳定、杀菌谱广、抗肿瘤等特点,在生防、医药及农作物抗病育种等领域具有重要的利用价值。家蚕中已鉴定了35个抗菌肽基因,分别属于6个不同的基因家族,即Cecropins、Moricins、Gloverins、Attacins、Enbocins、Lebocins。本文综述了家蚕中各个抗菌肽家族的抗菌活性、结构与理化性质,以及基因结构等特点。
- 林立鹏蓝希钳
- 关键词：家蚕抗菌肽基因抗菌活性理化性质
- 一株烟草青枯菌拮抗细菌的筛选及鉴定被引量：17
- 2007年
- 利用不同地点采集发病烟苗根围土样的方法,从重庆黔江烟草地共采集了土样31份,经分离纯化获得一株对供试致病烟草青枯菌有较强抑制作用的拮抗菌株swu31-2,通过其形态特征,生理生化试验和16S rDNA序列的测定,初步判定属于铜绿假单胞菌.
- 张伏军林立鹏唐婧马淑华谢洁周泽扬
- 关键词：烟草青枯病拮抗菌
- 家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）功能基因组研究
- 微孢子虫(microsporidia)是一类特殊的专性细胞内寄生的单细胞真核生物,能感染几乎所有的动物,包括一些重要的经济昆虫(如蜜蜂和家蚕)和鱼类。甚至,某些微孢子虫可以感染免疫缺陷的病人而导致其腹泻、脑炎和肝炎。在早...
- 林立鹏
- 关键词：家蚕微孢子虫蛋白转运
- 文献传递
- 家蚕微孢子虫NbTom40的原核表达及定位
- 2013年
- 线粒体外膜易位酶是由Tom40基因编码的位于线粒体外膜上的转位酶复合体,能够将外界蛋白质转位运输到线粒体基质中.最近有研究称在一类仅具有简缩进化的线粒体——纺锤剩体的感染家蚕微孢子虫的基因组鉴定到一个NbTom40基因.本文首先通过克隆了长度为839bp的NbTom40基因,通过构建重组载体pET30a(+)-NbTom40,转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,经过HIS抗体的免疫印迹对表达的目的蛋白——31～43kDa间存在一条单一条带进行验证,结果显示该条带即为分子量大小正确的带有HIS标签的目的蛋白,然后将其进行Ni-NTA亲和层析以及聚丙烯酰胺凝胶纯化并制备多克隆抗体.NbTom40抗体与家蚕微孢子虫总蛋白的Western Blotting结果显示,在32kD处有明显杂交信号,与理论分子大小一致.最后,通过间接免疫荧光(IFA)对该基因编码的蛋白进行细胞定位,观察到NbTom40以散点状荧光信号分布在孢子内部.本研究为深入了解纺锤剩体的蛋白组成及其膜转运的分子机制奠定了分子生物学基础.
- 罗洁林立鹏潘国庆刘婷刘显林周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫原核表达间接免疫荧光
- 家蚕微孢子虫半胱氨酸脱硫酶基因的克隆及表达和亚细胞定位被引量：2
- 2012年
- 半胱氨酸脱硫酶是一类活性依赖于磷酸吡哆醛的酶类,可催化L-半胱氨酸转化为L-丙氨酸和硫烷硫原子,为铁硫簇组装提供硫原子。基于家蚕微孢子虫基因组数据,克隆了家蚕微孢子虫半胱氨酸脱硫酶(NbNfs)基因。序列结构分析显示NbNfs含有其活性所需的保守氨基酸位点,但不具有线粒体型N端导肽;系统发育分析表明微孢子虫半胱氨酸脱硫酶与真菌线粒体型半胱氨酸脱硫酶聚为一类,属于类群Ⅰ,起源于α-变形细菌;共线性分析表明半胱氨酸脱硫酶基因在不同微孢子虫之间其基因座位保守,具有共线性。构建重组质粒pET30a(+)-NbNfs,并转化到E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达NbNfs融合蛋白,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化后,将融合蛋白免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,Western blotting检测NbNfs在成熟家蚕微孢子虫具有表达。胶体金免疫定位显示NbNfs主要定位于成熟家蚕微孢子虫的细胞质中。研究结果为家蚕微孢子虫铁硫簇组装途径的研究奠定了基础。
- 林立鹏潘国庆李田马成边茂飞党晓群罗洁邓远洪周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫基因克隆亚细胞定位
- 烟草根际细菌铜绿假单胞菌swu31-2的定殖能力及其对烟草青枯病的防治作用被引量：36
- 2009年
- 从重庆黔江烟草田间分离获得一株烟草青枯菌拮抗菌株Pseudomonas aeruginosaswu31-2(简称swu31-2)。采用逐步提高药物浓度的方法,筛选获得了抗链霉素300μg/mL对烟草青枯病菌拮抗活性稳定的swu31-2突变菌株。采用灌根接种法,研究其在烟草根、茎和叶表面及内部的定殖能力及其对烟草青枯病的防治作用。结果表明,swu31-2能在烟草各组织的表面及内部定殖。该菌株在烟草各组织内部的数量均表现为"由增到减"的趋势。在接种后第8天定殖数量达到最高峰,随后有所下降;到第20天各组织内的数量仍然维持较高水平(105cfu/g以上)。同时,在接种20 d后,烟草的根、茎和叶的表面仍然可以检测到swu31-2的存在。盆栽试验结果表明,swu31-2的菌液和活性物质对烟草青枯病均有一定的防治效果。其中先施swu31-2菌液和活性物质粗提物的防效好于农用链霉素(51.25%),分别为60.87%和60.32%,而后施菌液和活性物质粗提物的防效也分别达39.50%和20.90%。
- 胡军华张伏军蓝希钳林立鹏唐婧马淑华谢洁肖杰潘国庆周泽扬
- 关键词：烟草烟草青枯病青枯菌定殖
- 家蚕微孢子虫蛋白水解酶的活性检测及质谱鉴定和序列分析被引量：2
- 2012年
- 微孢子虫的蛋白水解酶类不仅参与代谢活动,而且可能作为一种潜在的侵染宿主的毒力因子。为了研究家蚕微孢子虫蛋白水解酶的种类及蛋白质结构特点,将家蚕微孢子虫总蛋白经非变性凝胶电泳后与底物酪蛋白孵育,检测到可水解酪蛋白的蛋白酶类的活性。采用质谱法分析该类蛋白酶主要是锌离子依赖型的细胞质型亮氨酰氨肽酶和丝氨酸蛋白酶。细胞质型亮氨酰氨肽酶序列是由1 515个碱基编码的505个氨基酸组成,无信号肽,有2个潜在的锌离子结合部位,属于金属蛋白酶M17家族;丝氨酸蛋白酶具有肽酶S8结构域和跨膜域。通过序列比对发现在兔脑炎微孢子虫、蝗虫微孢子虫、蜜蜂微孢子虫、肠道微孢子虫和比氏肠道微孢子虫中均有这2种酶,且相似度较高,其进化较为保守。
- 党晓群马强林立鹏龙梦娴李春峰李田潘国庆周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫蛋白水解酶酶活性
- 家蚕微孢子虫ADP/ATP转运蛋白的原核表达及间接免疫荧光定位分析被引量：2
- 2014年
- 【目的】家蚕微孢子虫Nosema bombycis ADP/ATP转运蛋白可能参与搬运宿主细胞的能量。本研究克隆家蚕微孢子虫ADP/ATP转运蛋白基因,并进行原核表达、抗体制备及间接免疫荧光定位,为控制和防治家蚕微粒子病提供理论基础。【方法】通过同源序列比对鉴定家蚕微孢子虫N.bombycis ADP/ATP转运蛋白序列,采用生物合成的方法将编码3段面向膜内侧肽段的核酸序列拼接合成,在其两端引入BglⅡ和SalⅠ酶切位点,克隆至pUC57载体并测序,再亚克隆至含有二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase,DHFR)标签的表达载体pQE40中,然后利用BamHⅠ和SalⅠ酶切获得含有DHFR标签的重组序列,并连接至pET30a(+)载体中进行诱导表达。通过SDSPAGE、镍柱亲和层析和免疫印迹法鉴定表达蛋白,利用间接免疫荧光对ADP/ATP转运蛋白的分布进行检测。【结果】家蚕微孢子虫的ADP/ATP转运蛋白编码序列(GenBank登录号为EOB13854.1)全长1 524 bp,编码蛋白含有507个氨基酸残基,预测分子质量为59 kDa,等电点为9.35。具有12个跨膜结构域和TLC结构域,其中TLC结构域含有4个功能保守位点。与蜜蜂微孢子虫的ADP/ATP转运蛋白比较,氨基酸序列一致性达30%。系统进化分析表明微孢子虫ADP/ATP转运蛋白聚为一类,具有共同的起源。成功构建了NbADP/ATP-△TM-DHFR-pET30a原核表达重组质粒,目的基因获得表达,其融合蛋白分子量约为37 kDa,纯化重组蛋白并制备了多克隆抗体。免疫印迹分析表明,成熟微孢子虫中表达ADP/ATP转运蛋白;间接免疫荧光定位结果显示,家蚕微孢子虫孢子ADP/ATP转运蛋白定位于孢子质膜上。【结论】本研究将为阻断微孢子虫能量来源,达到控制和防治家蚕微粒子病提供新的思路。
- 党晓群林立鹏李春峰潘国庆李田龙梦娴周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫ADP原核表达免疫印迹
- 家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)功能基因组研究——家蚕微孢子虫纺锤剩体相关基因的鉴定及其蛋白定位研究
- 微孢子虫(microsporidia)是一类特殊的专性细胞内寄生的单细胞真核生物，能感染几乎所有的动物，包括一些重要的经济昆虫(如蜜蜂和家蚕)和鱼类。甚至，某些微孢子虫可以感染免疫缺陷的病人而导致其腹泻、脑炎和肝炎。在早...
- 林立鹏
- 关键词：家蚕微孢子虫蛋白定位功能基因组
- 家蚕微孢子虫细胞分裂周期蛋白N端编码序列在酿酒酵母中的启动子活性分析被引量：1
- 2011年
- 微孢子虫(microsporidia)长期专性细胞内寄生,其基因组表现出显著的减缩性。利用家蚕微孢子虫(Nosema bomby-cis)基因组数据库探究在其显著减缩的基因组中是否有编码序列发挥调控序列的作用,结果发现在DNA转录调控中发挥重要作用的细胞分裂周期蛋白(cell division cycle protein)的N端编码序列具有典型的真核生物启动子序列特征。设计引物扩增该基因N端590 bp包含启动子基序的序列(C启动子序列),将该启动子序列克隆到载体启动子(MET25-P)被终止序列(CYC1-T)替代的pUG35载体上,构建由该启动子序列启动下游绿色荧光蛋白(GFP)表达的克隆载体ΔpUG35-CYC1-T-C-yEGFP-CYC1-T,并将其电击转化酿酒酵母CEN.PK2菌株,经筛选及诱导培养后,在荧光显微镜下观察到酵母中有GFP表达,证实了家蚕微孢子虫细胞分裂周期蛋白的N端编码序列包含具有启动子活性的序列,表明家蚕微孢子虫基因组减缩后,部分编码序列可能扮演了调控序列的角色。研究结果也为微孢子虫启动子的活性验证提供了一个简便的途径。
- 邓远洪李能章林立鹏潘国庆李田周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫启动子绿色荧光蛋白
