董晓
- 作品数：11 被引量：49H指数：4
- 供职机构：郧阳医学院附属人民医院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 炙甘草汤对扩张型心肌病SD大鼠心功能影响的实验研究被引量：10
- 2007年
- 目的观察炙甘草汤对扩张型心肌病(DCM)SD大鼠模型心功能的影响并初步探讨其作用机制。方法出生4周的雌性SD大鼠给予多柔比星建立扩张型心肌病(DCM)SD大鼠模型,给予炙甘草汤两周后观察实验前后大鼠超声心动图左室收缩末期容积(LVES)、舒张末期容积(LVED)、左室收缩末期内径(SD)、左室舒张末期内径(DD)、左室内径缩短率(FS)、左室射血分数(LVEF)和体重(BW)、心率(HR)、血浆神经体液因子的变化和大鼠心肌组织病理学的改变。结果经炙甘草汤治疗后的扩张型心肌病(DCM)SD大鼠超声心动图提示与实验前相比,LVEF、HR均明显增加(P<0.01),LVES明显降低(P<0.01),LVED,DD,SD较实验前有显著性差异(P<0.05);血浆AngⅡ,ET,ANP较实验前有显著性差异(P<0.05),组织病理学检查实验组大鼠心肌病变减轻。结论实验证明给予炙甘草汤治疗扩张型心肌病(DCM)SD大鼠可改善心功能,抑制RAAS系统的过度激活,降低动物死亡率,对扩张型心肌病有明显治疗作用。
- 肖俊会张茂洪何靖刘继军赵继先董晓吴艳
- 关键词：炙甘草汤扩张型心肌病多柔比星超声心动图
- 细胞穿透肽PEP-1介导增强型绿色荧光蛋白在小鼠体内跨膜转导被引量：8
- 2007年
- 目的研究细胞穿透肽PEP-1介导的大分子物质在小鼠体内的跨膜转导能力。方法用基因工程的方法制备并纯化增强型绿色荧光蛋白EGFP和PEP-1-EGFP融合蛋白,分别将500μg的EGFP蛋白和PEP-1-EGFP融合蛋白通过尾静脉注射入昆明小鼠体内,2 h后麻醉小鼠,PBS充分灌流并取心、脑、肝、脾、肾快速冷冻切片后立即置荧光显微镜下观察。结果2 h后PEP-1-EGFP融合蛋白处理的小鼠大脑、心肌、肝、脾和肾组织里出现均一的明亮绿色荧光,而EGFP蛋白处理的小鼠各脏器内均未见到绿色荧光。结论细胞穿透肽PEP-1能携带增强型绿色荧光蛋白穿透小鼠细胞膜并分布于心、脑、肝、脾、肾组织内,为将来用PEP-1介导各种大分子药物跨膜转导进行各种疾病的蛋白治疗提供实验依据。
- 董晓王家宁唐俊明潘国栋黄永章杨建业曹书芬
- 关键词：细胞穿透肽蛋白转导域蛋白转导PEP-1增强型绿色荧光蛋白
- pET15b-EGFP原核表达载体的构建及其表达和纯化被引量：20
- 2005年
- 目的:利用中间载体pGEM-T easy vector构建表达型载体pET15b-EGFP,在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白EGFP并将其纯化。方法:以质粒pLEGFP-C1为模板采用聚合酶链反应(PCR)的方法特异性扩增EGFP cD-NA序列,利用Taq DNA聚合酶的非模板依赖性末端转移酶活性催化PCR扩增的EGFP序列和三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,在EGFP序列两3’端加“A”,将纯化后的EGFP序列与中间载体pGEM-T easy vector连接后转化感受态大肠杆菌DH5α,经蓝白筛选,挑取白色单菌落进行扩增、酶切鉴定,正确重组的质粒命名为pGEM-T-EGFP。用XhoI和BamH I分别双酶切pGEM-T-EGFP和pET15b,低熔点琼脂糖回收EGFP cDNA和线性化的pET15b片段后将两片段相连,转化感受态大肠杆菌DH5α并对重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序,获取正确重组的表达型质粒并命名为pET15b-EGFP。将正确重组的质粒pET15b?EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。利用表达蛋白N端的组氨酸“标签”(H is-tag)进行N i2+-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和W estern b lotting鉴定纯化蛋白质。结果:经测序证实重组质粒pET15b-EGFP中的EGFP cDNA序列与从C lontech公司购买的质粒pLEGFP-C1中的EGFP cDNA序列完全一致,从而成功构建了表达型重组质粒pET15b-EGFP。pET15b-EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)并经诱导后得到高效表达,表达量可达66 mg/100 m l菌液,SDS-PAGE和W estern b lotting显示纯化蛋白为目的蛋白EGFP。结论:表达型重组质粒pET15b-EGFP的成功构建和表达、纯化为细胞穿透肽-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。
- 董晓王家宁黄永章郭凌郧
- 关键词：重组质粒蛋白表达蛋白纯化
- PEP-1-EGFP融合蛋白的表达和纯化及其转导入人脐静脉内皮细胞被引量：5
- 2006年
- 目的表达并纯化融合蛋白PEP-1-EGFP以对其穿透细胞膜的能力进行研究。方法用分子克隆技术构建出表达型载体pET15b-pep-1-EGFP,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中表达融合蛋白PEP-1-EGFP并进行Ni2+-树脂柱亲和层析纯化以进行融合蛋白穿透人脐静脉内皮细胞的实验。结果经测序证实成功构建了表达型载体pET15b-pep-1-EGFP,PEP-1-EGFP融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,纯化后的蛋白浓度为6.18mg/ml,蛋白产量为14.15mg/100ml菌液,SDS-PAGE和Westernblotting显示纯化蛋白为融合蛋白PEP-1-EGFP,细胞膜穿透实验证实PEP-1-EGFP融合蛋白能进入人脐静脉内皮细胞。结论PEP-1-EGFP融合蛋白的表达和纯化及其穿膜能力的研究为PEP-1携带有生物活性的大分子物质进行蛋白治疗奠定了基础。
- 董晓王家宁黄永章郭凌郧
- 关键词：细胞穿透肽增强型绿色荧光蛋白原核表达蛋白转导人脐静脉内皮细胞
- 细胞穿透肽PEP-1介导增强型绿色荧光蛋白转导人结直肠癌SW480细胞被引量：3
- 2007年
- 背景与目的:细胞穿透肽是近年来发现的一类能介导大分子物质跨膜转导的小分子肽段,本实验研究细胞穿透肽PEP-1携带大分子蛋白穿透人结直肠癌细胞SW480的能力。方法:用基因工程的方法制备并纯化EGFP蛋白和PEP-1-EGFP融合蛋白,将纯化后的两种蛋白与体外培养的人结直肠癌细胞共同孵育,在荧光显微镜下直接观察PEP-1介导目的蛋白EGFP转导入SW480细胞的能力。结果:EGFP蛋白不能进入细胞内,PEP-1-EGFP融合蛋白和SW480细胞共同孵育1h后可见有明亮绿色荧光分布于胞浆和胞核。结论:PEP-1能有效携带目的蛋白进入人结直肠癌细胞。
- 董晓王家宁黄永章郭凌郧孔霞
- 关键词：细胞穿透肽蛋白转导绿色荧光蛋白SW480细胞
- 细胞穿透肽PEP-1在蛋白转导中的应用被引量：1
- 2007年
- 文章对细胞穿透肽PEP-1在大分子物质体内外跨膜转导中的应用进行了综述,为进一步研究PEP-1介导有潜在治疗价值的大分子物质跨膜转导进行疾病的蛋白治疗提供了依据。
- 董晓王家宁
- 关键词：细胞穿透肽蛋白转导域PEP-1蛋白转导蛋白治疗
- 细胞穿透肽PEP-1介导增强型绿色荧光蛋白转导人脐静脉内皮细胞被引量：3
- 2007年
- 目的研究PEP-1-EGFP融合蛋白穿透人脐静脉内皮细胞的能力。方法用基因工程的方法制备并纯化EGFP蛋白和PEP-1-EGFP融合蛋白,将纯化后的两种蛋白和体外培养的人脐静脉内皮细胞共同孵育,分别观察其进入细胞的能力及PEP-1-EGFP进入细胞的时间依赖性、剂量依赖性和稳定性,并用MTT法检测PEP-1-EGFP融合蛋白对细胞的毒性。结果EGFP蛋白不能进入细胞内。PEP-1-EGFP融合蛋白可在5min内穿透人脐静脉内皮细胞,其穿透人脐静脉内皮细胞的能力呈时间和剂量依赖性,进入细胞后27h仍可观察到微量绿色荧光。PEP-1-EGFP蛋白浓度达200μmol/L时对细胞仍无毒性。结论PEP-1能有效携带目的蛋白进入人脐静脉内皮细胞,这为将来用细胞穿透肽PEP-1介导有生物活性的抗氧化物质穿透内皮细胞治疗缺血再灌注损伤奠定了基础。
- 董晓王家宁黄永章郭凌郧孔霞
- 关键词：细胞穿透肽蛋白转导增强型绿色荧光蛋白人脐静脉内皮细胞
- 细胞穿透肽PEP-1介导增强型绿色荧光蛋白穿透在体小鼠皮肤被引量：1
- 2007年
- 目的:研究细胞穿透肽PEP-1介导的增强型绿色荧光蛋白穿透小鼠皮肤的能力。方法:用基因工程的方法制备并纯化EGFP蛋白和PEP-1-EGFP融合蛋白,分别将1mg的蛋白涂抹在昆明小鼠背部皮肤上,4 h后处死小鼠取背部皮肤冰冻切片后立即在倒置荧光显微镜下观察。结果:EGFP处理的小鼠皮肤仅在角质层表面有少量荧光,PEP-1-EGFP融合蛋白处理的小鼠皮肤可见绿色荧光穿透角质层并分布于表皮和真皮内。结论:PEP-1-EGFP融合蛋白能穿透小鼠皮肤角质层并分布于表皮和真皮内,这为将来用细胞穿透肽PEP-1经皮转导大分子药物治疗各种皮肤病以及全身系统性疾病奠定了基础。
- 董晓王家宁潘国栋黄永章郭凌郧曹书芬
- 关键词：细胞穿透肽蛋白转导增强型绿色荧光蛋白经皮给药
- 扩张型心肌病SD大鼠模型的建立被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨用多柔比星诱导建立扩张型心肌病(DCM)SD大鼠模型的可行性。方法:出生四周的雌性SD大鼠共32只,给予多柔比星每周2 mg/kg腹腔内注射连续8周,建立扩张型心肌病(DCM)SD大鼠模型,观察实验前后大鼠超声心动图左室收缩末期容积(LVES)、舒张末期容积(LVED)、左室收缩末期内径(SD)、左室舒张末期内径(DD)、左室内径缩短率(FS)、左室射血分数(LVEF)和体重(BW)、心率(HR)的变化及大鼠心肌组织病理学的改变。结果:多柔比星诱导的扩张型心肌病(DCM)SD大鼠模型超声心动图提示与实验前相比,LVES、SD均明显增加(P<0.01),LVED、DD、FS较实验前有显著性差异(P<0.05),LVEF、BW、HR均明显降低(P<0.01);大鼠心肌组织病理学的改变符合扩张型心肌病的病理学改变。结论:实验证明给予大鼠多柔比星每周2 mg/kg腹腔内注射连续8周建立扩张型心肌病(DCM)动物模型符合人类DCM的改变,以多柔比星诱导的扩张型心肌病SD大鼠模型是可行的。
- 肖俊会王家宁刘继军高宇勤赵继先吴艳董晓
- 关键词：扩张型心肌病动物模型多柔比星超声心动图
- PEP-1-EGFP融合蛋白跨膜转导能力的离体和在体研究
- 王家宁董晓黄永章唐俊明郭凌郧杨建业孔霞郑飞
- 细胞穿透肽PEP-1是一种非常有应用前景的大分子物质跨膜转导工具。国际上还没有用PEP-1-EGFP融合蛋白的方法对PEP-1的跨膜转导能力进行研究的报道。为了研究PEP-1携带大分子物质在体内外的跨膜转导能力，该研究采...
- 关键词：
- 关键词：细胞穿透肽
