董钦
- 作品数：13 被引量：34H指数：3
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- 熊果苷体外抗氧化作用的研究
- 熊果苷体外抗氧化作用的研究目的：探讨熊果苷对人脐静脉内皮细胞(ECV304)氧化应激损伤的拮抗作用。方法：采用H2O2制备人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤模型，细胞分为正常对照组、损伤组、熊果苷组、谷胱甘肽组，光镜和电镜下观...
- 董钦
- 关键词：熊果苷过氧化氢氧化应激人脐静脉内皮细胞谷氧还蛋白
- 文献传递
- 人谷氧还蛋白基因的分子克隆及表达被引量：1
- 2005年
- 目的:克隆人脐静脉内皮细胞谷氧还蛋白(glutaredoxin, Grx)编码区的cDNA序列并进行序列测定,构建原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达. 方法:从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,采用RT- PCR技术,获得该基因编码区的cDNA,并重组入原核克隆表达载体pRSETA,构建重组质粒pRSET- Grx,通过茵落PCR筛选及限制性内切酶鉴定,选择阳性克隆并测序.将测序正确的重组质粒pRSET-Grx 转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达. 结果:将所得序列与GenBank提供的序列(NM002064)比较,测出的序列在核苷酸序列上有一处碱基不同,但在氨基酸序列上与已知序列一致.IPTG诱导4-5 h后, 150 g/L SDS-PAGE分析,表达出Mr16000的蛋白. 结论:从人脐静脉内皮细胞中成功地获得Grx编码区的cDNA,成功构建了原核融合表达载体pRSET-Grx并获得表达.
- 张春晶周宏博邹朝霞董钦于海涛
- 关键词：BL21(DE3)SDS-PAGE分析RT-PCR技术CDNA序列基因编码区阳性克隆
- 大鼠胚胎期心脏Na^+通道基因SCN5A的表达
- 2006年
- 目的研究大鼠胚胎发育过程中,编码心肌组织电压门控Na+通道α亚单位SCN5A基因mRNA的表达和蛋白定位。方法大鼠胚胎期分7个时间点(E12.5-P1),提取心脏总RNA,RT-PCR和免疫组化方法分别检测SCN5A基因mRNA表达和蛋白定位。结果大鼠胚胎发育期SCN5A基因mRNA表达呈动态模式,E12.5d(0.425±0.012)表达最少,E13.5d(0.532±0.012)和E14.5d(0.665±0.119)相对增加,E15.5d达到高峰(1.08±0.01),E17.5d(0.870±0.035)与E19.5d(0.855±0.057)相比略有降低,无显著性差别,提示胚胎发育后期表达量趋于平衡。出生后一天(P1)表达量(0.751±0.041)较胚胎期表达显著降低。除E17.5d与E19.5d比较无统计学意义外(P>0.05),其余组间比较均有统计学意义(P<0.001)。免疫组化结果显示,SCN5A蛋白表达高峰及在左、右心室肌及室间隔中表达持续时间各不相同,胚胎早期SCN5A蛋白在不同心腔表达相对均匀,后期在心外膜和心室左、右束支位置表达增强。结论SCN5A基因与大鼠胚胎心脏传导系统发生及其功能相关,Na+电流是形成胚胎发育中期心肌动作电位的主要成分。
- 金剑峰董钦李凤兰陈诗慧马宁李晖
- 关键词：心肌胚胎SCN5A基因表达
- 谷氧还蛋白的生物学活性及其与人类疾病的关系被引量：8
- 2006年
- 谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx),又称巯基转移酶(thioltransferase,TTase),是巯基-二硫键氧化还原酶家族的重要组分。Grx最早由Holmgren发现,在生物界普遍存在,是一种依赖谷胱甘肽(GSH)催化氧化状态的蛋白质二硫键还原为巯基,修复蛋白质活性的小分子酶蛋白。它具有多种生物学活性,在调节机体的氧化还原反应和细胞生长、抑制凋亡方面起重要作用,与人类某些疾病,如心脑血管疾病、白内障、糖尿病、AIDS、自身免疫性疾病、肿瘤和感染等的发生、发展,以及干预治疗有关。
- 张春晶于海涛邹朝霞董钦周宏博
- 关键词：谷氧还蛋白氧化应激抗氧化
- 肌肽,一种神奇的小肽被引量：8
- 2004年
- 阐述了国内外关于对肌肽生物学作用研究的最新进展和医学应用前景 ,详述了肌肽的抗自由基 。
- 王爱民周宏博董钦
- 关键词：肌肽抗氧化抗衰老
- 熊果苷拮抗H_2O_2 损伤的研究(英文)被引量：15
- 2005年
- 目的 通过体外细胞学实验观察熊果苷拮抗H2 O2 的作用。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞ECV 30 4 ,将细胞分为对照组、损伤组和熊果苷组,熊果苷组提前12h加入熊果苷,5 0 0 μmol/LH2 O2 诱导细胞氧化应激状态。光镜实验比较各组细胞形态学的变化;MTT实验比较各组细胞增殖活力的改变。结果 光镜下可见,对照组细胞结构清晰,呈单层铺路石状紧密排列;损伤组细胞变形、皱缩、排列紊乱、脱落明显,胞浆内出现空泡;熊果苷组细胞形态结构基本清晰,但细胞有轻度肿胀,其它接近于正常对照组;MTT结果显示,与损伤组相比,熊果苷能明显保护ECV- 30 4细胞增殖活力(P <0 .0 5 )。结论 本实验结果提示,熊果苷可以抵御H2 O2 所致ECV- 30 4细胞氧化应激损伤。
- 董钦张春晶周宏博邹朝霞杨歌德
- 关键词：熊果苷ECV-304细胞过氧化氢
- p53基因在5-aza诱导小鼠胚胎干细胞向心肌样细胞分化中表达的研究
- 2011年
- 目的检测p53基因及其蛋白在5-aza诱导C3H10T1/2向心肌样细胞分化过程中的变化,进而探讨p53基因及其蛋白在胚胎早期心肌分化过程中发挥作用的条件。方法以10μmol/L的5-aza诱导C3H10T1/2向心肌样细胞分化,分别选取诱导后1周、2周、3周4、周这4个时间点进行样品收集。Tr-izol法提取诱导后细胞的总RNA,应用RT-PCR方法检测p53基因、肌钙蛋白Ⅰ的表达情况;应用免疫细胞化学方法检测P53蛋白和心肌肌球蛋白重链的表达情况。结果在mRNA水平,p53在诱导后1周和诱导后3周表达量较诱导后2周4、周要高;在蛋白水平,随着诱导时间的延长,蛋白表达量没有降低,而是维持在一定的水平甚至有所增加。结论在5-aza诱导C3H10T1/2向心肌样细胞分化过程中,P53蛋白维持一定水平的表达是5-aza发挥其作用的先决条件。
- 刘端阳董钦李凤兰马宁李晖
- 关键词：5-AZA细胞分化干细胞
- 大鼠SCN5A基因内含子1 +204 bp^+757 bp转录调控功能分析被引量：1
- 2007年
- 目的克隆大鼠心肌SCN5A基因5′端调控区,检测目的片段在HEK293细胞中的转录活性。方法扩增大鼠心肌SCN5A基因+204 bp^+757 bp、+204 bp^+385 bp和+204 bp^+329 bp片段,构建含目的片段的荧光素酶报告基因——pGL3-P0、pGL3-P1和pGL3-P2,比较HEK293细胞中荧光素酶活性,评价不同长度DNA片段的转录调控活性。结果成功构建大鼠心肌SCN5A基因5′端3个片断的荧光素酶报告基因,HEK293细胞中pGL3-P1相对荧光素酶活性分别为pGL3-P0、pGL3-P2的4.3倍和2.8倍。结论SCN5A基因内含子1目的片段在HEK293细胞中具有较强的转录调控活性;SCN5A基因+329 bp^+385 bp为正调控区,软件分析MZF1、USF、C-ETs-1等因子能与这些正调控区域结合并可能参与SCN5A基因的表达调控。
- 刘宇李晖董钦张振明李凤兰李金波马宁
- 关键词：SCN5A基因转录调控顺式作用元件
- H_2O_2对ECV304细胞Grx mRNA表达的影响(英文)被引量：1
- 2005年
- 目的通过体外实验,研究H2O2对人脐静脉内皮细胞(ECV304)谷氧还蛋白(Grx)mRNA表达水平的影响.方法体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV304);MTT实验观察H2O2对ECV304细胞增殖的影响;在时间相关性研究中,将细胞分为6组,第1组为正常对照组,第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol/L H2O2作用5min、10min、30min、60min、120min;在剂量相关性研究中,将细胞分为6组,第1组为正常对照组,第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol/L、200μmol/L 、300μmol/L 、400μmol/L 、500μmol/L H2O2作用30min,采用Trizol一步法提取细胞总RNA,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究各组细胞Grx mRNA表达水平的差异.结果 MTT结果表明,100μmol/L H2O2对细胞增殖无影响,200～500μmol/L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖(P<0.05).RT-PCR结果显示,在时间相关性研究中,终浓度100μmol/L H2O2作用10min、30min、60min均能使ECV304细胞中Grx mRNA表达水平增高,30min达到最大值,差异显著(P<0.05);剂量相关性研究表明,终浓度100μmol/L H2O2～400μmol/L H2O2作用30min均能使Grx mRNA表达水平增高,差异显著(P<0.05),其中终浓度300μmol/L H2O2可使Grx mRNA的表达量最高(P<0.01).结论 H2O2影响人脐静脉内皮细胞Grx mRNA的表达水平.
- 董钦王常松张春晶邹朝霞刘宏伟孙丽红周宏博
- 关键词：谷氧还蛋白过氧化氢人脐静脉内皮细胞
- SOCS-3在妊娠期高血压中参与调控IL-6、IL-10和VCAM-1的研究
- 妊娠期高血压(Pre-eclampsia，pregnancy-induced hypertentioN,PIH)是妊娠期特有的严重的产科并发症。发生于妊娠20周以后，其发病率7％～10％。临床表现为高血压、蛋白尿、浮肿，...
- 董钦
- 关键词：白介素6白介素10人脐静脉内皮细胞
