赵凡凡
- 作品数：15 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国科学院上海巴斯德研究所更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家质检总局科技计划项目国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 乙型脑炎病毒EⅢ结构域蛋白的表达及多克隆抗体的制备与鉴定
- 流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的以中枢神经系统发生病变为主的急性、人畜共患的自然疫源性疾病.该病的...
- 沈强魏建超史子学李满赵凡凡蒋春英王水明马志永
- 猪日本乙型脑炎病毒NS5原核表达和多克隆抗体制备
- 2013年
- 提取猪日本乙型脑炎病毒(JEV)上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,扩增JEV-NS5基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS5,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组JEV-NS5蛋白,获得分子质量为103 ku的重组蛋白.该蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占总菌体蛋白的35%以上,His-band Ni+纯化后,获得高纯度重组蛋白占总蛋白的比例达75%以上.以纯化的蛋白免疫小鼠,制备小鼠抗JEV-NS5抗体,抗体效价达到3×104,并能与病毒感染的样本反应,证明该蛋白具有较好的特异性.
- 余风艳韩秀杰沈红霞张保新赵凡凡王晓杜
- 关键词：日本乙型脑炎病毒原核表达纯化
- 日本脑炎病毒prM蛋白的表达及免疫原性分析被引量：2
- 2014年
- 日本脑炎是一种由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的、经虫媒传播并可导致母猪流产的急性病毒性传染病。JEV的M蛋白参与病毒的感染过程且能诱生具有轻度中和作用的抗体。本研究提取JEV上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增该病毒的prM基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-prM,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组his-JEV-prM蛋白,SDS-PAGE结果表明,获得分子量大小为24 ku的重组蛋白,主要以包涵体形式表达,薄层扫描分析表明,表达量占总菌体蛋白的30%以上,纯化后获得高纯度重组蛋白,占总蛋白比例达60%以上。纯化蛋白his-JEV-prM免疫BALB/c小鼠,制备了小鼠抗JEV-prM抗体,Westernblotting和间接免疫荧光检测小鼠抗JEV-M抗体的特异性。纯化蛋白能诱导小鼠产生高滴度抗体,并且该抗体能特异识别原核、真核和病毒表达的prM。本研究表达纯化的prM蛋白和小鼠抗prM抗体,为基于M蛋白的疫苗开发、检测JEV的方法及致病机理研究提供了工具。
- 梅匀安袁庄川韩秀杰赵凡凡王晓杜
- 关键词：日本脑炎病毒原核表达免疫原性
- 日本脑炎病毒E Ⅲ结构域蛋白的表达及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2013年
- 使用原核表达系统融合表达乙型脑炎病毒EⅢ结构域蛋白,经过纯化后多次免疫BALB/c小鼠,制备了鼠抗JEV E蛋白的多克隆抗体。Western blot结果表明该抗体与重组蛋白能够发生明显反应,与浓缩的JEV反应显出1条分子量大小约为53kDa的目的条带(JEV E蛋白);间接免疫荧光(indirect immunofluorescence,IFA)显示,多克隆抗体与BHK-21细胞内的JEV作用,在细胞质内产生绿色荧光,而对照组无特异性荧光;空斑减少中和试验测定多抗血清的中和抗体效价(PRNT50)为1:160。以上结果暗示制备的多克隆抗体能与重组蛋白和JEV E蛋白都能发生良好反应,并且该多抗有较高水平的JEV中和抗体效价。
- 沈强魏建超史子学常维山赵凡凡蒋春英王水明马志永
- 关键词：乙型脑炎病毒E蛋白多克隆抗体中和抗体
- 鼠尾静脉注射固定装置
- 本实用新型公开了一种鼠尾静脉注射固定装置，其包括一具有盖体和笼体的鼠容器，该盖体上设有一尾部穿出孔，该笼体上设有数个通气孔。本实用新型通过直接在该笼体上设置数个通气孔，节省了该固定装置的制作工序和成本。另外，该鼠尾静脉注...
- 马志永史子学魏建超邵东华王少辉李蓓蓓赵凡凡沈强张书萧刘喆蒋春英刘萍萍姚建楠杨传定
- 文献传递
- 猪日本乙型脑炎检测技术研究进展被引量：10
- 2011年
- 猪日本乙型脑炎是由黄病毒科乙型脑炎病毒引起的一种人畜共患的病毒性传染病。人与多种动物均能感染,其中猪是主要的储存宿主和扩散宿主,猪感染该病毒后引发猪的繁殖障碍,使养猪业遭受重大经济损失,因此学者们一直在致力于寻找可以快速检测和诊断日本乙型脑炎的方法,为预防和治疗该病提供基础条件。文章对猪日本乙型脑炎检测技术,包括病毒分离鉴定方法、血清学方法、分子生物学方法等方面的研究进展进行了较为全面的综述。
- 赵凡凡游卫云王晓杜高利荣袁进强王婷周圻
- 关键词：乙型脑炎
- RT-PCR方法检测犬瘟热的流行情况被引量：2
- 2012年
- 犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的犬科烈性传染病,给患病动物带来重大危害。本研究基于犬瘟热病毒的NP蛋白基因设计特异性引物,利用RT-PCR获得287bp目的片段,经TA克隆并测序。结果表明,该片段与NCBI上公布的犬瘟热病毒NP序列(登录号:EU716322)同源性达到98%。利用该特异性的RT-PCR方法,检测杭州市及周边部分地区犬瘟热的流行情况,结果表明,整个杭州及周边地区犬瘟热病毒总阳性检出率为6.7%,杭州城区阳性个体数最多,阳性率最高达到18.8%,其他地方(临安、台州、舟山)阳性率较低。该研究为犬瘟热的综合防制提供基础数据。
- 裘云云施朋飞夏飞琴张保新赵凡凡王晓杜
- 关键词：犬瘟热RT-PCR
- 一种新型构建HCV病毒感染可视化报告系统的细胞修饰方法
- 本发明提供了一种新型构建HCV病毒感染可视化报告系统的细胞修饰方法使用该方法能够简单灵敏实时进行丙型肝炎病毒(HCV)病毒感染的检测，能清晰准确的显示被感染细胞，可应用于感染细胞筛选及抗HCV病毒药物的高通量筛选。
- 龙钢赵凡凡马鹏娟杨再立蒋望
- 文献传递
- 猪日本脑炎病毒NS3蛋白的基因克隆、原核表达及纯化
- 2012年
- 提取猪日本脑炎病毒(JEV)上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增JEV的NS3基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,酶切鉴定和PCR鉴定重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS3,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组His-JEV-NS3蛋白,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,his-band试剂盒纯化重组蛋白。获得了1.8kb NS3基因片段,成功构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS3。IPTG诱导获得分子质量为64ku的His-JEV-NS3蛋白,该蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占总菌体蛋白的30%以上,纯化后获得高纯度重组蛋白,其占总蛋白比例达70%以上。
- 韩秀杰张保新赵凡凡余风艳沈红霞王晓杜
- 关键词：日本脑炎病毒NS3原核表达
- 宠物犬自然感染乙型脑炎病毒中和抗体动态变化的研究
- 乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的经蚊为主的虫媒传播的一种人兽共患传染病.犬感染JEV无任何临床症状,犬是...
- 沈强张帆刘学辉马志永史子学魏建超邵东华李蓓蓓李满蒋春英赵凡凡王水明
