顾继锐
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
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- 转生长激素基因中华倒刺鲃的构建及其检测被引量：8
- 2006年
- 用从斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)cDNA文库克隆到的生长激素基因,与鲤β肌蛋白启动子、大麻哈鱼生长激素基因的poly(A)终止信号序列等调控元件共同构建了表达重组质粒pFV2 cfGH。提取重组质粒,用精子载体法导入中华倒刺鲃(Spinibarbus sinensis)的受精卵中,经孵化培养成转基因成鱼。抽提423尾转基因实验鱼血总DNA,经PCR检测表明:斑点叉尾鮰生长激素基因已导入中华倒刺鲃基因组中,导入率为17.26%。同时通过RT-PCR技术检测阳性中华倒刺鲃中生长激素基因的表达情况。
- 丁洁顾继锐伍翠芳李永文张涛吴江谢显连徐恒
- 关键词：生长激素基因转基因鱼反转录PCR
- 普通变形杆菌TWN3株DNA疫苗的初步研究
- 2009年
- 普通变形杆菌TWN3分离自死亡大口鲇,菌的DNA文库已构建成功,通过免疫印迹法从文库中筛选到TWN3抗原片段PV4,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建DNA疫苗pcDNA3-PV4。肌肉注射免疫小鼠进行真核表达检测。免疫组织化学分析DNA疫苗在接种局部肌肉中抗原的表达,ELISA检测小鼠血清中的IgG及IFN-γ含量。免疫pcDNA3-PV4疫苗的小鼠肌肉细胞中检测到PV4相关抗原蛋白的表达,外周血中的IgG及IFN-γ显著高于免疫pcDNA3组。对小鼠进行免疫保护试验,免疫DNA疫苗的小鼠对TWN3菌有免疫力。初步显示构建的DNA疫苗有一定效果。试验结果为鱼类水体试验提供了参考依据,同时随着TWN3株菌DNA疫苗研究的深入,将对该疫苗最终大规模用于鱼类提供理论基础。
- 王娟辜文博冯军顾继锐吴江徐恒
- 关键词：DNA文库DNA疫苗
- 草鱼胸腺素β_(11)的cDNA克隆及序列分析
- 2012年
- 以前期构建的草鱼肠道cDNA文库中β胸腺素EST序列为基础,应用cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增草鱼胸腺素β_(11)(thymosinβ_(11),Tβ_(11))的cDNA序列全长(NCBI登录号:HM120850),该序列长320 bp,5'非翻译区47 bp,3'非翻译区141 bp,包含一个132 bp的开放读码框,编码43个氨基酸残基,蛋白质等电点为5.17,分子大小为4892 Da.与其他脊椎动物的同源性对比结果显示,草鱼与斑马鱼胸腺素β_(11)的同源性最高,达到93.0%.结构预测显示草鱼胸腺素β_(11)拥有典型的β胸腺素家族典型的二级结构.
- 辜文博袁恬冯军顾继锐吴江刘汉元徐恒
- 草鱼腺苷酸基琥珀酸裂解酶克隆及序列分析被引量：1
- 2009年
- 腺苷酸基琥珀酸裂解酶(Adenylosuccinate lyase,ADSL)是嘌呤核苷酸合成过程中的关键酶。研究以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库为基础,应用PCR、RT-PCR和RACE技术,成功获得了草鱼肠道组织腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因的cDNA全长和基因组DNA全长。该基因全长1584 bp,包含一个1449 bp的开放阅读框,编码482个氨基酸,与其他脊椎动物比对显示,其序列具有较高的保守性。草鱼腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因组DNA由13个外显子和12个内含子组成,其外显子拼接位点非常保守,遵循GT-AG原则。
- 屈刚顾继锐辜文博朱文漓吴江刘汉元徐恒
- 关键词：草鱼肠道克隆
- 西伯利亚鲟和鲫鱼脑型一氧化氮合酶cDNA片段克隆及序列分析
- 2006年
- 实验根据脑型一氧化氮合酶氨基酸高度保守序列设计一对简并引物,采用RT-PCR方法扩增并克隆了西伯利亚鲟(Acipenser baeri)和鲫鱼(Carassius auratus)的脑型一氧化氮合酶cDNA片段。西伯利亚鲟cD-NA片段为356 bp,鲫鱼cDNA片段为377 bp。氨基酸序列同源分析发现,西伯利亚鲟与斑马鱼(Brachydaniorerio)的脑型一氧化氮合酶同源性为70%,鲫鱼与斑马鱼的同源性为97.6%。
- 刘会明顾继锐伍翠芳邱成书吴江谢显连徐恒
- 关键词：鲫鱼RT-PCR
- 一株嗜盐光合菌的分离及对养殖污水的处理效果被引量：3
- 2011年
- 以海南虾池特殊生境底泥为菌源,富集、分离出一株嗜盐光合菌,命名HPSB2,并对其进行形态学观察、特征峰值测定及生理生化检测。结果显示:其与红环菌科(Rhodocyclaceae)索氏菌属(Thauera)特性相似,16SrDNA序列比对显示与Thauera aminoaromatica和Thauera mechemichensis相似性达99%。该菌株最适生长温度40℃,最适pH值6.5,最适盐度15‰,最适光强>3000 lx,能耐受45℃高温,在pH值9.5、盐度70‰时仍能正常生长。
- 顾继锐苏艳秋伍翠芳府跃军徐恒
- 关键词：菌株鉴定水质改良剂
- 草鱼胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)的序列克隆及分析被引量：6
- 2008年
- 以实验室构建的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库苹果酸脱氢酶(cMDH)EST序列为基础,采用末端快速扩增法(RACE),从健康雌性草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道细胞RNA中获得1391 bp的草鱼肠道cMDH的cDNA序列(NCBI登录号:EU569765)。结果显示:该序列包含62 bp的5′非编码区(5′-UTR),330 bp的3′非编码区(3′-UTR),典型加尾信号AATAA位于polyA起点上游16 bp。开放阅读框ORF长999 bp,共编码333个氨基酸,预测蛋白等电点为6.67,大小为36 kDa。多序列比对显示草鱼胞质苹果酸脱氢酶具有典型的苹果酸脱氢酶功能区保守序列,该酶与斑马鱼cMDH相似度最高达到95.5%,与模式植物拟兰介的相似度为57.8%,其预测三级结构具有典型cMDH功能区。Southern杂交结果表明草鱼cMDH属于多拷贝基因家族。
- 朱文漓顾继锐辜文博吴江刘汉元徐恒
- 关键词：肠道CDNA克隆
