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小麦α-双加氧酶cDNA克隆及表达分析: 2014年; 以普通小麦陕225为材料,同源克隆小麦脂肪酸α-双加氧酶基因(TaDOX)cDNA,全面分析其基因结构、染色体定位、进化关系及蛋白结构特征,并利用实时定量RT-PCR分析其在PEG和盐胁迫下的表达模式。克隆的cDNA片段长1 854bp,编码617个氨基酸残基的小麦脂肪酸α-双加氧酶。TaDOX基因组DNA长5 529bp,位于小麦5D染色体长臂,包含10个外显子。小麦、水稻等禾本科植物α-DOX序列高度同源,聚集在同一独立进化枝,而双子叶植物存在2类DOX蛋白,聚集在另外2个分枝中。TaDOX具有脂肪酸α-双加氧酶以α-螺旋为主的空间结构特征,包含血红素结合位点及保守氨基酸His310、Thr315、Tyr378、Arg558组成的活性中心。TaDOX主要在叶和根中表达,花序和种子中也有痕量表达;叶片中TaDOX的表达在PEG和盐胁迫条件均明显下降;根中TaDOX的表达在PEG胁迫条件下无显著变化,但在盐胁迫条件下表达水平急剧升高。; 范三红陈志刚王欣魏少华齐亚飞单丽伟; 关键词：小麦染色体定位

玉米脂肪酸α-双加氧酶cDNA克隆与表达分析被引量：2: 2012年; 以玉米自交系丹340为实验材料,同源克隆到玉米脂肪酸α-双加氧酶基因(ZmDOX)cDNA序列,并利用半定量与定量RT-PCR分析其在不同组织和PEG胁迫下的表达特征。序列分析结果表明,该cDNA序列包含1 857 bp完整的开放阅读框,编码619个氨基酸残基的蛋白产物。玉米、水稻、小麦中DOX氨基酸序列高度同源,聚集在同一进化枝,而双子叶植物存在两类DOX蛋白。组织表达特征分析发现,ZmDOX在根、茎、叶中均有表达,其中在根中表达量最高。PEG胁迫条件下,根中ZmDOX对胁迫的响应较快且增加幅度较大,而在叶中表达量有降低的趋势。; 单丽伟张丙凯王美艳魏少华范三红; 关键词：玉米同源克隆

小麦Ra3基因编码区的克隆、原核表达及纯化被引量：1: 2010年; 【目的】克隆小麦ramosa3(Ra3)基因完整编码区,利用原核表达系统表达并纯化获得重组的小麦RAMOSA3(RA3)。【方法】利用RT-PCR技术,从普通小麦"中国春"幼穗中扩增小麦Ra3,将其重组到原核表达载体pET-41a,并在T7Express competentE.coli菌株中进行诱导表达;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组蛋白,并通过Western印迹技术对其进行鉴定。【结果】获得了长度为1080bp的cDNA片段,该片段包含小麦Ra3完整编码区,编码产物长度为360个氨基酸残基,属于TPP酶家族成员;SDS-PAGE结果显示,菌体总蛋白中出现约66ku的预期条带,其表达量占总蛋白的44.6%;抽提液中加入体积分数0.3%的Triton X-100,可显著提高重组蛋白的溶解度;纯化后的重组蛋白呈单点纯,Western印迹结果进一步确证其为目标蛋白。【结论】利用原核系统高效表达并纯化获得了重组的小麦RA3。; 杨宇衡赵金阳唐如春魏少华范三红; 关键词：小麦同源克隆

拟南芥Antiquitin基因的原核表达和生物信息学分析被引量：1: 2009年; 将拟南芥Antiquitin基因重组到原核表达载体pMAL-c4x和pET41中,在T7 Express菌株中诱导表达,经Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组蛋白。SDS-PAGE结果表明:MBP和His-tag融合的拟南芥An-tiquitin主要以可溶性形式存在,表达量分别占细胞总蛋白的25.1%和39.4%。以乙醛和NAD+为底物测定融合蛋白活性,结果显示:His-tag融合的Antiquitin具有醛脱氢酶活性,比活力为8.98 U/mg,乙醛的表观Km和Vmax值分别为0.98 mmol/L和12.75 U/mg。序列比对和结构预测结果显示:拟南芥Antiquitin包含该家族蛋白典型的催化结构域、NADH结合结构域和寡聚化结构域,活性中心残基为Gly238、Gly291、Glu391、Phe393。; 安瑞魏少华范三红单丽伟; 关键词：拟南芥 ANTIQUITIN NADH

拟南芥、小麦及玉米脂肪酸Alpha-DOX基因研究: 植物在自然界的生长过程中,经常会遭受各种自然环境的胁迫,比如冷冻、干旱和盐渍等,为了避免各种灾害,植物必须对环境作出适应,其机体结构和生化功能都会发生变化,分子调节机制也会有所不同。已有研究发现,植物中双加氧酶参与的氧化...; 魏少华; 关键词：拟南芥实时定量PCR; 文献传递

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魏少华