黄亚娟
- 作品数：8 被引量：15H指数：3
- 供职机构：北京正旦国际科技有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项贵州省科技厅农业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生理学生物学农业科学更多>>
- 基质辅助激光解析电离质谱和电喷雾质谱共同快速确证达托霉素结构
- 2015年
- 运用基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)和电喷雾-四级杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF MS)快速确证环脂肽达托霉素的结构。首先,ESI检测达托霉素相对分子量为1619.7107,与理论值偏差0.0007。选择其双电荷峰m/z 809.848作为母离子进行ESI串联质谱(MS/MS)测定,成功匹配了达托霉素环外氨基酸序列C9H19CO-Trp-Asn-Asp。其次,优化Li OH裂解达托霉素的实验条件,以MALDITOF/TOF MS监测开环效果,获得95%以上的开环样本后,分别运用MALDI和ESI进行MS/MS测定,达托霉素开环产物的b+和y+全部被匹配,达托霉素全部氨基酸序列得到确证。最后,对开环产物的ESI-MS/MS条件进一步优化,获得了丰富的低端碎片离子,解析了脂肪酸链结构,并绘制了脂肪酸链的裂解图。本方法快速、简便、准确,是确证环脂肽类化合物结构的可靠方法。
- 黄亚娟张拓韩治国孟晓光宋纯艳刘曙晨郑俊杰魏开华
- 关键词：达托霉素串联质谱电喷雾质谱
- 酶切质谱法和氰基化裂解法联合解析新药重组人门冬胰岛素二硫键被引量：2
- 2013年
- 目的:建立一种简化、快速、准确的分析含有相邻Cys的双链型二硫键的方法,并确定重组人门冬胰岛素的二硫键。方法:(1)ESI-Q-TOF质谱准确测定样品还原烷基化及烷基化前后的相对分子质量,计算二硫键数和自由巯基数;(2)采集Glu-C酶切肽质量指纹谱,MS-Bridge检索并确定1对链间二硫键;(3)简化氰基化裂解法步骤,LC-MS/MS测定关键肽段序列,自编软件结合人工解析,确定第2、3对二硫键。结果:(1)相对分子质量测定出重组人门冬胰岛素含3对二硫键;(2)酶切肽谱的序列覆盖率为100%,关键肽段m/z 1377.5568、m/z 2493.1045,测量偏差小于0.05,对应二硫键A20-B19。(3)Glu-C酶切液经氰基衍生后以ZipTip除盐代替HPLC制备,氨水裂解后用MALDI-TOF测肽谱,获得关键肽段m/z1530.7163,对应二硫键A6-A11,其串联质谱共匹配14个关键序列离子,碎片离子强度高,质量偏差小于0.01,证实该二硫键连接正确。结论:新药重组人门冬胰岛素主要的二硫键连接方式为A6-A11、A7-B7、A20-B19,与已知胰岛素一致。本方法降低了双链连接型胰岛素二硫键分析复杂度,简化了步骤,具有良好的实用性。
- 黄亚娟傅海媛侯利平孙云波张拓王东茂郑俊杰魏开华
- 关键词：肽质量指纹图谱质谱分析
- 多肽抗体检测原发性肝癌血清标志物ELISA方法的建立及应用被引量：4
- 2012年
- 血清多肽是癌症诊断信息的重要来源,建立、优化了检测多肽标志物的直接ELISA法,并应用于肝癌血清中的多肽标志物的检测。制备及纯化针对多肽标志物Pep5的单克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记,用其建立检测相应抗原的直接ELISA法。方法线性范围为1.5-20 ng/mL,检测限为1.24 ng/mL;标准品批内及批间CV分别小于3.66%及4.89%,血清样本批内及批间CV分别小于11.69%及18.18%;线性范围内(9、12和15 ng/mL)的回收率分别为98.98%,99.61%和101.58%。应用该方法共检测160例正常血清、104例肝硬化及156例肝癌患者血清,正常组与肝硬化组及肝癌组间差异显著(P<0.001),Pep5诊断肝癌的敏感性和特异性分别为80.8%和96.2%。同时检测94例HCC血清中的AFP和Pep5,AFP检出率为63.8%,Pep5检出率为90.4%,AFP联合Pep5检测时,能将HCC的检出率提高至94.7%。
- 周晓明傅海媛黄亚娟侯利平孙云波原剑杨保安郑俊杰甄蓓肖汉族貌盼勇魏开华
- 关键词：多肽抗体ELISA肝癌
- 烟草肌醇半乳糖苷合成酶基因NtGolS1的克隆及序列分析被引量：3
- 2012年
- 为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的肌醇半乳糖苷合成酶基因GolS,以辣椒GolS基因为探针,通过电子克隆法从烟草栽培品种K326中分离出一条编码GolS基因的cDNA序列,暂被命名为NtGolS1。NtGolS1包含一个完整的开放读码框,编码343个氨基酸,具备糖基转移酶保守结构域;序列比对结果表明,NtGolS1蛋白与其他植物的GolS蛋白具有很高的相似性;系统进化树分析表明,NtGolS1与耐旱植物维柯萨的Gols亲缘关系最近。这些结果为进一步研究NtGolS1的性质和功能,并为植物抗逆基因工程研究提供理论基础。
- 林世锋王仁刚任学良王东茂张拓黄亚娟
- 关键词：烟草克隆
- 联合UV及SDS-PAGE监测并优化碳二亚胺偶联法制备多肽免疫原被引量：3
- 2013年
- 建立了一种多肽免疫抗原偶联的双监测法,获得一种操作简便、成功率高、适用范围广的碳二亚胺偶联法,并应用于多种肿瘤相关多肽标志物的免疫抗原制备。以合成多肽SP0104为标准品,牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,碳二亚胺(EDC)为偶联剂,对加样顺序、投料比、偶联时间等关键条件进行考察,采用UV和SDS-PAGE对反应产物进行联合监测,以偶联比和偶联率联合评价反应条件。加样顺序为多肽和载体蛋白先混合再加到碳二亚胺中,三者质量比为1∶1∶1,偶联时间为12 h,偶联比在4∶1～12∶1之间,偶联率在9%～20%之间,所得SP0104多抗效价达到1∶80 000,MALDI-TOF质谱分析证实该抗体准确捕获目标抗原。用优化的偶联方法制备多肽SPC09、SPC15、SPG01、SPG03、SPG04的免疫抗原,所得免疫血清效价均在1∶1万以上,最高可达1∶51.2万。所建碳二亚胺多肽偶联联合监测法简便实用,可提高多肽抗体制备的成功率。
- 侯利平傅海媛陶亚岚黄亚娟孙云波宋纯艳夏云飞杨保安韩治国肖汉族郑俊杰甄蓓魏开华
- 关键词：抗体
- 溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶菌酶质量标准建立中的应用
- 2014年
- 获得一种趋于均相反应体系的比浊法,用于重组人溶菌酶活性的研究,并建立相关操作规程和质量标准.通过显微计数法进行底物菌液质控,改进酶与菌液的混合方式和最佳酶用量,采用“双直线法”优化反应计时区间,并精确测定重组人溶菌酶含量.显微镜菌体计数法确定0.3 mg/mL底物菌液中菌体数保持在1.1 ×108个/mL左右;酶与菌液在样品池内经吸排法快速混合可趋近均相体系;酶的最佳用量为3μg;确定反应计时区间为0～60s;依据所制定的酶活性操作规程,确定重组人溶菌酶活性质量标准为45 000～ 65 000U/mg,日内、日间相对标准偏差均小于5％;优选Lowry法并精确测定蛋白含量为（1.0±0.1）mg/mL.改进后的方法稳定性得到明显提高,且操作简便、结果可靠,已被3家研究单位、企业验证并接受.建立的重组人溶菌酶活性和含量测定质量标准及操作规程具有实际参考价值.
- 宋纯艳张拓侯利平原剑黄亚娟韩治国刘曙晨甄蓓魏开华
- 关键词：比浊法
- 免疫质谱法检测肝癌血清多肽标志物被引量：4
- 2012年
- 建立免疫亲和富集分离与质谱分析相结合的免疫质谱法用于血清多肽标志物pep5的检测。多克隆抗体与蛋白A琼脂糖颗粒偶联用于捕获pep5,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测标志物。本方法的线性范围为1～48 nmol/L,检出限0.2 nmol/L;回收率为93.0%～103.1%,相对标准偏差(RSD)为6.4%～11.8%;反复冻融3次pep5,检测结果稳定;检测临床肝癌/正常血清样本灵敏度为78.0%、特异度为90%。该方法方便、快速、准确,适用于临床样本中低浓度标志物的检测研究,对于癌症的早期诊断具有重要意义。
- 傅海媛原剑周晓明孙云波黄亚娟侯利平宋纯艳杨保安甄蓓高蓉貌盼勇林利忠徐淑芳肖汉族魏开华
- 关键词：多肽抗体质谱
- 新型肝损伤血清标志物Pep5定量检测方法的建立及临床应用被引量：1
- 2013年
- 目的建立定量检测血清多肽Pep5的酶联免疫吸附方法(ELISA),用于判定肝损伤进程的研究。方法以待测血清样本稀释液包被酶联板,5%脱脂奶粉封闭,辣根过氧化物酶标记的抗Pep5单克隆抗体作为标记抗体,建立定量检测人血清多肽Pep5的ELISA,并用于临床检测690例肝损伤及健康血清样本。结果灵敏度为1.25ng/mL;线性范围(0～24ng/mL)内相关系数为0.998 7;与乙酰胆碱酯酶、层黏连蛋白、透明质酸、三型前胶原交叉反应率小于1.00%;添加回收率在99.09%～107.08%;批内、批间变异系数(CV)分别为5.62%～7.32%、6.21%～6.45%。与其他肝损伤指标乙酰胆碱酯酶试剂盒进行对比试验,表明两种检测方法有一定的相关性(r=0.68)。临床检测结果表明血清多肽Pep5水平随着肝损伤程度加重而升高,与正常血清差异有统计学意义(P<0.01)。结论多肽Pep5可用于肝损伤进程定量血清学检测,检测方法简便、可靠,为后续深入研究多肽Pep5的功能及相关诊断试剂盒的研制和开发提供了科学依据。
- 傅海媛侯利平周晓明黄亚娟宋纯艳孙云波汪洋杨保安肖汉族甄蓓魏开华王海滨
- 关键词：酶联免疫吸附法肝损伤血清学诊断
