黄利文
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 中国人促红细胞生成素cDNA的克隆及其在COS-7细胞中的表达被引量：9
- 1996年
- 利用PCR技术,以中国人促红细胞生成素(EPO)次全基因组为模板,进行了基因修补和重组,克隆出EPO cDNA全序列。同时发现中国人EPO cDNA与国外的克隆比较有一个核苷酸的差异,导致第62位氨基酸是丝氨酸,不是亮氨酸。将人EPO cDNA基因插入表达载体pSV2-dhfr中的不同克隆位点,构建了6种不同的转移载体质粒,即pSV2-dhfr/F1,pSV2/N2,pSV2-dhfr/F3,pSV2-dhfr/P4,pSV2-dhfr/G1和pSV2-dhfr/G3。将它们分别转染导入COS-7细胞,结果表明6种转移载体质粒转染的细胞上清液都有明显的EPO活性。人EPO cDNA基因转移载体质粒在COS-7细胞中的表达水平高于人次全EPO基因组转移载体质粒。
- 韩峰吴淑华薛水星黄利文马学军
- 关键词：促红细胞生成素CDNA基因工程
- 中国人GM-CSF基因的克隆及初步表达后活性的研究被引量：1
- 1997年
- 中国人ＧＭ┐ＣＳＦ基因的克隆及初步表达后活性的研究何湘君①金奇黄利文李晶袁劲松侯云德（中国预防医学科学院病毒基因工程国家重点实验室，北京１０００５２）①现在首都儿科研究所，病毒室，北京１０００２０作者简介：何湘君，女，３４岁，硕士，副研究员，主要从事...
- 何湘君金奇黄利文李晶袁劲松侯云德
- 关键词：GM-CSF基因克隆
- 应用痘苗病毒载体在动物细胞中高效表达人α-瘤坏死因子cDNA及其特性的研究被引量：3
- 1993年
- 构建了含不同长度的人α-肿瘤坏死因子(hTNF-a)cDNA的两种重组痘苗病毒。hTNF-α cDNA插入痘苗病毒(天坛株)的tk区,在11k启动子的控制下,表达量可达1.6×10~7U/L,如果缩短hTNF-α cDNA起始密码子ATG与启动子之间距离并去除3′端非编码区,可使hTNF-α的表达量提高3倍。表达产物的细胞毒活性可被抗hTNF-α单克隆抗体所中和,免疫沉淀产物的SDS-PAGE有一特异性17kD的蛋白条带;同时,在细胞毒活性相同的前提下,哺乳动物细胞表达的hTNF-α的抗病毒活性高于大肠杆菌表达的hTNF-α。
- 万晓余吴淑华黄利文张求旺张丽兰侯云德
- 关键词：痘苗病毒肿瘤坏死因子
- 中国人促红细胞生成素基因组的克隆及其表达
- 1994年
- 促红细胞生成素(EPO)是调节前体红细胞增殖、分化和保持外周血中红细胞处于正常生理范围的最主要的激素,国外已能生产rhEPO并用于临床治疗多种红细胞减少症,临床实验结果表明rhEPO具有很好的临床疗效。1989年,美国FDA已批准rhEPO投放市场用于治疗肾衰后引起的贫血。EPO基因组的5’侧翼区和第一个内含于以及3’侧翼区可能存在着氧敏感调控序列,在人和动物的肝肾及某些特异的细胞系中,它们使EPO基因对于缺氧敏感从而增强其表达;而这些序列对于EPO基因组在COS等常见的用于表达外原基因的哺乳动物细胞中的表达则没有增强作用,此外,在EPO基因组的5’旁侧0.4-6kb,存在一个负调控序列不适宜用于体外表达。据此本文构建了去除上述负调控片段和不必要的片段的EPO次全基因组,并证明了人EPO次全基因组在COS-7细胞系中获得了,表达。 首先根据人EPO基因组的结构(图1(a)),设计了两对引物。第一对引物:P1与P2。
- 黄利文韩峰郑秋君马学军李玉英蒋盘宏吴淑华侯云德
- 关键词：促红细胞生成素PCR技术无性系
