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重组人Flt3配体对微血管内皮细胞的抗辐射作用研究被引量：2: 2001年; 目的　研究Flt3配体 (FL)对人微血管内皮细胞系细胞 (ECV)的抗辐射作用及其可能的作用机理。方法　用流式细胞仪分析ECV表面Flt3受体的表达 ;用MTT法观察FL对受照射ECV增殖的影响 ;用AnnexinV PI方法测定细胞凋亡 ,用RT PCR方法分析细胞凋亡基因bax和Bcl 2的改变。结果　ECV表达Flt3受体 ,FL能激发ECV增殖 ,ECV经 15Gy的照射后 ,FL能有效地拮抗照射对ECV增殖的抑制作用 ;同时照射后ECV的bax基因表达增加 ,bcl 2基因表达轻度降低。FL通过抑制bax基因的表达 ,降低辐射引起的ECV细胞凋亡。结论　FL通过抑制细胞凋亡 ,减轻辐射引起的ECV的损伤 ,可能在辐射损伤患者造血微环境的保护中具有应用价值。; 许志祥张学光强亦忠徐颖施勤朱剑昆丁天; 关键词：FLT3配体造血微环境微血管内皮细胞抗辐射作用细胞增殖

Flt3配体联合其他细胞因子对受照射小鼠免疫系统的作用研究被引量：6: 2002年; 目的　研究Flt3配体 (FL)在受照射小鼠免疫系统恢复中的作用。方法　采用F 80 0血细胞自动计数仪行外周血细胞计数及白细胞分类计数 ,流式细胞仪分析外周血淋巴细胞表型。结果　照射前应用FL或照射后联合应用FL、IL 11、EPO和G CSF等细胞因子 ,能有效地促进受照小鼠外周血白细胞和淋巴细胞的恢复 ,对CD8+ 细胞的恢复作用尤为明显 ,同时使CD4 + CD8+ 细胞比值较早恢复正常 ,提高受照射小鼠的生存率。结论　FL不但能促进辐射损伤机体造血功能的恢复 ,对免疫系统的恢复亦具有重要的作用。FL单独或与其他细胞因子联合应用。; 许志祥张学光朱剑昆徐颖李颖丁天赵仁亮於葛华强亦忠; 关键词：FLT3配体细胞因子小鼠免疫系统

异亮氨酸拉链结构对可溶性CD40L生物学活性的影响: 近年来,CD40L在肿瘤免疫中的潜在应用价值正倍受关注.前人的相关工作都是在酵母表达体系中完成的,我们尝试利用大肠杆菌表达体系进行研究.该实验中,我们人工合成了符合大肠杆菌密码子偏爱性的异亮氨酸拉链,并将异亮氨酸拉链连接...; 丁天; 关键词：可溶性CD40L 生物学活性; 文献传递

弓形虫GRA6抗原基因的克隆与表达被引量：5: 2003年; 目的　在大肠杆菌中高效表达弓形虫抗原GRA6。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株和RH株总DNA中分别扩增到编码GRA6的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体PGEX - 5X - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1 -CodonPlus(DE3) -RP中进行表达 ,以SDS -PAGE和Westenblotting进行鉴定 ,用GST亲和层析柱纯化表达产物。结果　 1 在我们所比较的 336个碱基中 ,弓形虫昆山分离株与RH株之间碱基基本一致。 2 得到一分子量为 49kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 2 5 55 % ,通过Westenblotting证实 ,该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所识别。结论　 1 弓形虫昆山分离株和RH株的GRA6基因片段几乎完全一致 ;2 在大肠杆菌中得到了高效表达的融合蛋白 ;3 该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所别。; 朱翔丁天陆惠民张惠琴黄伟达; 关键词：弓形虫克隆聚合酶链反应

人4-1BB转基因细胞的构建及其对SHI-1细胞的促增殖作用: 2003年; 徐颖沈丽琴丁天邓忠彬於葛华李文香陈苏宁薛永权张学光; 关键词：4-1BB 转基因细胞 SHI-1细胞促增殖作用急性单核细胞白血病

异亮氨酸拉链结构对可溶性CD40L生物学活性的影响被引量：3: 2003年; CD40配基(CD40L)为TNF超家族中的一员,瞬时表达于激活的CD4+的T淋巴细胞上.自然状态下膜上三聚体的CD40L通过和CD40受体(CD40R)结合,在免疫监视和肿瘤免疫中发挥作用.以PCR方法从pcDNA3 CD40L质粒上扩增得到编码CD40L基因的胞外部分sCD40L,并将该片段插入大肠杆菌表达质粒pET30a上,构建得到大肠杆菌表达质粒pET30a sCD40L;同时,在sCD40L的N端融合了异亮氨酸拉链(IsoleucineZipper,IZ)结构,构建得到表达质粒pET30a IZ sCD40L.表达质粒在大肠杆菌中表达,得到可溶性的重组人CD40L和IZ CD40L.SDS PAGE分析结果表明重组人rhsCD40L和IZ rhsCD40L在相应分子质量位置都有明显的条带产生,并得到Westernblotting的确认.非SDS PAGE电泳结果显示,异亮氨酸拉链结构有利于rhsCD40L蛋白形成聚合体结构.B细胞增殖实验和人骨髓瘤细胞株XG2凋亡实验结果都表明,异亮氨酸拉链结构提高了rhsCD40L的生物学活性.; 丁天洪洁徐颖周璇江培翃钱志康张学光黄伟达; 关键词：可溶性CD40L 生物学活性

分泌人可溶性FL基因转染细胞及其生物学活性分析: 2003年; 应用基因重组技术构建了人可溶性FL基因逆转录病毒载体pLXSN FL ,经转染PA317细胞和G4 18筛选抗性细胞克隆 ,获得重组病毒液。NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后 ,选择适当滴度的重组病毒 (5× 10 5CFU/ml)感染ECV30 4细胞 ;应用聚合酶链反应 (PCR )及反转录聚合酶链反应 (RT PCR )检测感染ECV30 4细胞FL的DNA及mRNA表达 ;应用ELISA测定rhFL在ECV30 4中的表达水平 ,用荧光标记和流式细胞仪检测转基因上清对单个核细胞来源DC的表型影响及3 H TdR掺入法测定DC对T细胞的促增殖作用。结果表明 ,外源性rhFL基因整合到ECV30 4细胞染色体DNA并有效地转录和翻译 ,稳定表达水平为 82 4ng (10 6细胞 /2 4h )的人FL。转基因ECV细胞培养上清能有效诱导人PBMC来源DC的分化和增强DC对T细胞的激发作用。外源性FL基因可以转移到ECV30 4细胞并稳定表达。; 丁天徐颖沈丽琴许志祥朱一蓓王月丹张学光; 关键词：FLT3配体 FL 逆转录病毒载体 ECV304细胞

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丁天