丁玉兰
- 作品数：10 被引量：15H指数：3
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- 自体NK细胞体外活化扩增培养的方法及其专用培养基
- 本发明公开了一种自体NK细胞体外活化扩增培养的方法及其专用培养基。该方法是利用如下成套培养基并同时添加饲养细胞体外活化扩增自体NK细胞：由培养基1、培养基2和培养基3组成的成套培养基；所述培养基1是在干细胞生长培养基中添...
- 赵卫东金夏马杰周虎周颖冯定庆张丽娜宣恒华丁玉兰桂云程敏李青王晓丽
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- 曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用及其相关机制。方法:TSA与ATRA联合或者单独作用于SiHa细胞,采用CellTiter 96Aqueous法检测细胞增殖情况,7AAD荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V/7AAD法流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot法检测P53、BCL-2和Caspase-3蛋白的表达变化。结果:细胞增殖实验结果显示TSA联合ATRA对SiHa细胞有显著的增殖抑制作用;7AAD荧光染色结果显示联合用药组细胞凋亡明显增加,出现核碎裂等典型凋亡改变;流式细胞术检测结果显示联合用药组凋亡率显著增高;Western Blot结果显示:与对照组比较,联合用药组中P53和活化性Caspase-3蛋白的表达水平显著升高,而BCL-2蛋白表达水平显著下降。结论:TSA联合ATRA在体外对SiHa细胞具有明显的协同抑制增殖和诱导凋亡作用,推测其机制可能与P53和活化性Caspase-3蛋白表达水平上调、BCL-2蛋白表达水平下调有关。
- 周虎冯定庆桂云宣恒华丁玉兰赵卫东
- 关键词：曲古菌素A全反式维甲酸SIHA细胞
- c-myc基因扩增与HPV感染在宫颈病变中的关系被引量：3
- 2012年
- 分别以HC-Ⅱ法及荧光原位杂交(FISH)法检测109例不同级别宫颈病变患者宫颈脱落细胞中高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染情况及c-myc基因扩增情况,结果显示宫颈脱落细胞中c-myc基因的扩增率、高危型HPV的感染率与宫颈病变程度密切相关,高危型HPV感染和c-myc基因扩增在宫颈癌的发生发展中可能起着协同作用。
- 丁玉兰赵卫东冯定庆朱园园金夏宣恒华周虎桂云
- 关键词：高危型HPV荧光原位杂交
- 辐照后的AlloMNCs诱导NK细胞体外扩增
- 2011年
- 目的探讨照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs)对人自然杀伤细胞(NK)体外扩增的影响,为NK细胞的过继免疫治疗奠定基础。方法 Ficoll密度梯度离心法分离健康成人外周血单个核细胞(PBMCs),30、50和70 Gyγ射线照射后的AlloMNCs作为饲养细胞,分别加入上述PBMCs,在添加细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中进行培养扩增,同时选择未添加饲养细胞的作为对照组;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD56+CD3-NK细胞纯度;MTT法检测细胞杀伤活性。结果加入饲养细胞的PBMCs在添加了细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中可培养21 d,30 Gy照射后的AlloMNCs作为饲养细胞时细胞扩增最明显,在第21天时扩增了270.3±10.4倍,CD56+CD3-NK细胞纯度由培养前的(9.7±2.4)%提高到扩增后的(56.5±7.8)%,与无饲养细胞的对照组相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,添加30Gy照射后的AlloMNCs刺激扩增的NK细胞对K562和HO8910的杀伤率平均达到59.7%、63.2%,分别与对照组的28.3%、32.2%相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 30 Gy照射后的AlloMNCs可作为饲养细胞在体外促进NK细胞的增殖,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法。
- 马杰赵卫东周虎张丽娜丁玉兰宣恒华桂云金夏
- 关键词：自然杀伤细胞扩增饲养细胞免疫治疗
- 荧光原位杂交技术检测宫颈病变中C-MYC基因的表达及其意义被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨c-myc原癌基因在宫颈病变中的表达及其临床意义。方法:筛选114例宫颈细胞涂片,按最终病理学结果分组,其中正常宫颈20例,CINⅠ20例,CINⅡ25例、CINⅢ25例、宫颈癌24例;同时选取上述病例的宫颈病理切片,均用FISH方法检测c-myc基因的表达情况。结果:①C-myc基因在不同细胞学分级中即ASCUS、LSIL、HSIL和SCC宫颈脱落细胞中的阳性表达率为0.0%、20.8%、38.9%、61.2%、95.2%,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。②C-myc基因在不同病理学分级中即正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌脱落细胞中的阳性表达率分别为0.0%、10.0%、44.0%、72.0%、90.2%,其组间差异有统计学意义(P<0.01)。③在宫颈病理切片组织中C-myc基因阳性表达率在正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌组织中依次为0.0%、20.0%、56.0%、80.0%、95.0%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:c-myc基因在各级CIN和宫颈癌的脱落细胞及组织中均有异常扩增,其扩增率随着宫颈病变程度增加而增加,提示c-myc基因异常扩增在宫颈病变筛查中具有一定的价值和意义。
- 丁玉兰赵卫东朱园园金夏冯定庆宣恒华周虎桂云程敏李青
- 关键词：荧光原位杂交宫颈癌宫颈上皮内瘤变
- 不同刺激因子组合诱导NK细胞体外扩增及其功能的研究被引量：3
- 2011年
- 目的探讨不同刺激因子组合对人自然杀伤细胞(NK细胞)体外扩增及其功能的影响。方法 VarioMACS分选健康成人外周血单个核细胞(PBMC)中的NK细胞,依据添加刺激因子的不同分为A组(IL-2)、B组(IL-2+IL-15)、C组(IL-2+IL-15+饲养细胞),饲养细胞为30 Gyγ射线照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs),未添加任何刺激因子的细胞的作为对照组,在干细胞生长培养基(SCGM)中进行培养扩增14 d,第1天添加PHA及OKT3,第5天离心洗去;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测分选及扩增前后CD56+CD3-NK细胞纯度;改良的MTT法检测NK细胞对K562、HO8910及PBMC的杀伤活性。结果经VarioMACS免疫磁珠阴性分选后NK细胞纯度由分选前的(9.2±2.9)%提高到(93.5±3.2)%,培养14 d后,除对照组NK细胞纯度降低外,其余组与扩增前无明显差异(P>0.05)。细胞扩增倍数分别为17.2±1.7、51.3±6.6和82.4±9.8倍,均显著高于对照组(5.7±1.2)(P<0.01)。实验组组间比较,C组明显高于A组和B组(P<0.01)。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,各组的杀伤活性显示为C组>B组>A组>对照组,C组扩增的NK细胞对K562及HO8910的杀伤率可分别达到(70.1±8.9)%和(64.6±6.2)%,显著高于对照组、A组(P<0.01)和B组(P<0.05),对PBMC的杀伤率仅为(4.2±1.2)%。结论经VarioMACS分选获得的NK细胞,在体外使用SCGM培养基培养,添加IL-2、IL-15和照射后AlloMNCs作为刺激因子,可获得高效扩增和有效活化的NK细胞,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增高纯度NK细胞的方法。
- 马杰赵卫东张丽娜周虎丁玉兰宣恒华桂云金夏
- 关键词：自然杀伤细胞扩增饲养细胞免疫治疗
- IL-15基因修饰的NK细胞对原代卵巢癌细胞的杀伤作用被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨γ射线照射后的IL-15基因修饰的NK细胞(简称NK-ustc细胞)对原代卵巢癌细胞的体内外杀伤活性。方法:分离卵巢癌患者腹水原代卵巢癌细胞。不同剂量γ射线(0、1、2、4、8、16 Gy)照射NK-ustc细胞,3H-TdR掺入法检测照射后NK-ustc细胞的增殖情况,51Cr释放法检测NK-ustc细胞对K562和原代卵巢癌细胞的杀伤活性。建立人裸鼠荷卵巢癌模型,随机分为NK-ustc治疗组(模型鼠腹腔注射辐照后的NK-ustc细胞)和培养基对照组,同时设空白对照组(正常裸鼠腹腔注射辐照后的NK-ustc细胞),观察各组裸鼠体重、腹围及生存期。结果:1、2、4、8、16 Gy辐照后NK-ustc细胞的增殖率分别为(62.1±9.8)%、(41.3±8.7)%、(14.6±4.1)%、(0.1±0.03)%和(0.2±0.04)%。当效靶比为10∶1时,0、8 Gy辐照后NK-ustc细胞对K562的杀伤率分别为(45.4±8.9)%和(43.1±6.4)%,对原代卵巢癌细胞的杀伤率分别为(54.6±6.4)%和(48.3±5.8)%,说明辐照不影响NK-ustc细胞的杀伤活性(P>0.05)。辐照后NK-ustc细胞治疗组荷瘤小鼠的中位生存期为75 d,对照组为39 d(P<0.05),空白对照组小鼠全部存活。结论:γ射线照射可有效抑制NK-ustc细胞增殖,但保留该细胞对原代卵巢癌细胞的杀伤活性。
- 马杰赵卫东马娟金夏张丽娜丁玉兰周虎宣恒华桂云
- 关键词：自然杀伤细胞卵巢癌免疫治疗
- 自体NK细胞体外活化扩增培养的方法及其专用培养基
- 本发明公开了一种自体NK细胞体外活化扩增培养的方法及其专用培养基。该方法是利用如下成套培养基并同时添加饲养细胞体外活化扩增自体NK细胞：由培养基1、培养基2和培养基3组成的成套培养基；所述培养基1是在干细胞生长培养基中添...
- 赵卫东金夏马杰周虎周颖冯定庆张丽娜宣恒华丁玉兰桂云程敏李青王晓丽
- 曲古菌素A联合全反式维甲酸对宫颈癌HeLa细胞株杀伤机制的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)对宫颈癌HeLa细胞株的杀伤作用及其作用机制。方法 TSA联合ATRA或单独处理HeLa细胞,CellTiter 96AQueous法检测细胞增殖抑制情况;7-AAD荧光染色法观察细胞凋亡改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测p21、p53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达变化。结果 TSA联合ATRA对HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,诱导细胞凋亡,出现核碎裂等典型凋亡改变,细胞凋亡率明显升高,与对照组和单独用药组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,TSA联合ATRA组中p21、p53、活化性Caspase-3蛋白的表达显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论 TSA联合ATRA在体外对HeLa细胞有明显的杀伤作用,推测其机制可能是上调p21、p53、活化性Caspase-3蛋白表达水平,下调Bcl-2蛋白表达水平有关。
- 周虎冯定庆桂云宣恒华丁玉兰赵卫东
- 关键词：曲古菌素A全反式维甲酸HELA细胞
- 机器人手术在妇科恶性肿瘤手术治疗中的应用被引量：3
- 2011年
- 机器人技术的出现使外科微创手术进入新的发展阶段。在妇科恶性肿瘤手术治疗中机器人也逐步得到应用,其主要应用于宫颈癌的广泛性全子宫切除和盆腔淋巴清扫术,此外机器人根治性宫颈切除术、晚期宫颈癌分期手术及复发性宫颈癌的盆腔脏器切除术也有相关报道;子宫内膜癌和卵巢癌的机器人分期手术也日趋增多。目前,机器人手术多是回顾性病例报告,缺乏随机对照、大样本比较性研究,其适应证和手术效果还需要大量临床探索,以作出全面的评价。
- 丁玉兰赵卫东
- 关键词：宫颈肿瘤子宫内膜肿瘤
