俞悦
- 作品数：52 被引量：161H指数：7
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- miR-21高表达与肺鳞癌预后相关
- 高雯曾海龙俞悦潘世扬束永前
- 内质网应激调节肝星状细胞HGF表达的作用机制被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨内质网应激对肝星状细胞分泌肝细胞生长因子(hypatocyte growth factor,HGF)的影响及其可能机制。方法 :通过在培养的大鼠肝星状细胞T6中分别加入5.0μg/m L衣霉素或0.2μmol/L毒胡萝卜素建立肝星状细胞内质网应激模型,4.0 mmol/L 4-苯基丁酸钠(4-phenylbutyrate,4-PBA)和200.0μmol/L salubrinal作为内质网应激抑制剂对T6细胞进行预处理,重组慢病毒LV-e If2α-sh RNA-GFP敲减T6细胞中的e If2αm RNA表达,并提取m RNA和全蛋白进行RT-PCR和Western blot实验检测HGF、分子伴侣重链结合蛋白(glucose-regulated protein 78,GRP78)、真核翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,e If2α)、磷酸化e If2α、激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)以及凋亡信号分子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)。结果:衣霉素、毒胡萝卜素可诱导T6细胞GRP78升高,激活内质网应激状态的同时抑制HGF表达,4-PBA和salubrinal可阻止内质网应激引起的HGF降低,但对ATF4和CHOP的表达作用不同。慢病毒转染T6降低细胞e If2α表达的同时成比例降低HGF表达。结论:ERS激活后可通过影响e If2α表达从而抑制HGF表达。
- 刘雨亭李书陈建亮周澍曹守纪俞悦李国强
- 关键词：内质网应激肝细胞生长因子肝星状细胞
- 大鼠CD4^+CD25^+T调节细胞的分离培养及其功能分析被引量：5
- 2006年
- 目的:研究大鼠CD4+CD25+T调节细胞(Tr)的分离培养,并对其功能进行初步分析。方法:无菌条件下切取大鼠脾脏分离脾淋巴细胞。用免疫磁珠细胞分离系统(MACS)分选CD4+CD25+T细胞,并以流式细胞术检测其纯度后,对其进行扩增。采用混合淋巴细胞反应研究CD4+CD25+Tr细胞对CD4+CD25-T细胞的免疫抑制作用。用ELISA法检测培养上清中IL-2、IFN-γ及IL-10水平的差异。结果:MACS分离的CD4+CD25+T细胞的纯度达86%~93%。该细胞与CD4+CD25-T细胞相比能特异性地表达Foxp3基因。体外培养中能明显抑制效应T细胞增殖及其分泌IFN-γ、IL-2,但其自身能分泌Th2型细胞因子IL-10。结论:采用MACS系统阴性加阳性分选,可高效快速的获得理想纯度和免疫抑制功能的大鼠CD4+CD25+T调节细胞,该细胞对CD4+CD25-T细胞具有明显的免疫抑制作用,并能特异性的表达Foxp3基因。
- 吕凌张峰王学浩浦立勇姚爱华俞悦
- 关键词：CD4^+FOXP3免疫抑制
- 多药耐药基因MDR1在原发性肝癌组织中表达的意义被引量：8
- 1998年
- 肿瘤细胞对化疗药物产生抗药性的原因有几种，其中最主要的是多药耐药基因MDR1。应用免疫组化方法测定30例原发性肝癌（PHC）癌组织和癌周组织中MDR1的表达产物Pgp（P-gly-coprotein，PgP），结果显示，PHC癌组织中MDR1基因表达阳性率（60．0％）远较癌周组织高（23．3％）。化疗后肿瘤组织MDR1阳性率（88．9％）较未化疗瘤的癌组织（47．6％）高。结合临床资料分析，MDR1基因的过度表达在我国PHC的内在性和获得性药物耐受产生中起着一定的作用。关键词:##4多药耐药基因;;
- 俞悦文跃进郑肇巽
- 关键词：多药耐药基因原发性肝癌
- 肝移植围手术期损伤控制的理论创新及其临床应用
- 吕凌王学浩张峰饶建华黄新立孔连宝鲁皓俞悦成峰戴新征潘熊熊
- 供肝匮乏是制约肝移植深入发展的瓶颈，高效利用供肝资源，尤其是控制肝移植围手术期的损伤是提高移植预后的关键。移植早期损伤因素除缺血再灌注损伤(IRI)外，还有免疫过激及手术创伤应激，上述三者直接影响围手术期的康复。项目组历...
- 关键词：
- 关键词：肝移植治疗
- CD133作为肝癌干细胞表面标记的初步研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究人肝癌SMMC7721和Bel-7402细胞株中CD133的表达，探讨CD133作为肝癌干细胞表面标记的可能性。方法采用流式细胞仪检测SMMC7721和Bel-7402细胞株中CD133的表达；免疫磁珠细胞技术分离SMMC7721和Bel-7402细胞株中CD133阳性和CD133阴性细胞，检测其细胞周期，观察并采用单因素方差分析和u检验分析体外培养过程中CD133阳性和CD133阴性细胞的细胞形态、增殖和分化能力的差异。结果CD133阳性细胞在SMMC7721和Bel-7402细胞株中所占比例分别为0．7％-1．0％、1．7％～8．9％；流式细胞仪检测显示两种细胞株中处于G0／G1期的CD133阳性细胞分别为85．3％、89．4％，明显高于CD133阴性细胞和未分选细胞（F=14．49，38．84，P〈0．05）；CD133阳性细胞体外增殖能力强于相同条件下CD133阴性细胞和未分选细胞，在1～3d和5～7d曲线变化更明显（F=49．32，784．04，89．91，152．83，P〈0．05）；体外培养过程中，CD133阳性细胞的比例逐日下降，至扩增的第15天，与未分选细胞含量相似（u=0．271，P〈0．05）。结论人肝癌SMMC7721和Bel-7402细胞株中，CD133阳性细胞体外增殖和分化能力较强，CD133是肝癌干细胞的表面标记之一。
- 张荣生吕凌张峰俞悦王学浩
- 关键词：CD133肝细胞干细胞
- 人补体对猪血管内皮细胞的溶细胞效应研究被引量：1
- 1997年
- 选择猪血管内皮细胞为靶，人血清为天然抗体和补体源，用四唑盐法（ＭＴＴ）行补体依赖的细胞毒反应（ＣＤＣ），建立了体外超急性排斥模型。人血清能溶解５８±５％的猪血管内皮细胞。Ｃ１ｑ缺乏的人血清（阻断经典途径）仅溶解３７±７％猪血管内皮细胞（Ｐ＜０．０１）。Ｂ因子缺乏的人血清（阻断旁路途径）仅溶４２±１０％的猪血管内皮细胞（Ｐ＜０．０１）。同种猪血清及加热灭活补体的人血清不溶猪血管内皮细胞。将经典途径及旁路途径缺陷的人血清等体积混合，其细胞毒作用恢复正常。同样，Ｃ１ｑ缺乏的人血清和Ｂ因子缺乏的人血清分别补加Ｃ１ｑ和Ｂ因子后，血清细胞毒作用亦恢复正常。因此，补体经典和旁路两条途径可能均参与体内超急性排斥反应。提示抑制猪／人之间的超急性排斥应考虑补体旁路途径激活的问题。
- 赵中辛王学浩杜竞辉钱建民张峰李相成王萱仪俞悦姚冬明武正炎
- 关键词：异种补体血管内皮排斥反应
- 大鼠部分肝移植的实验研究被引量：16
- 2002年
- 目的 建立稳定的大鼠部分肝移植动物模型 ,以对移植肝的功能、移植肝的增殖活性进行研究。方法 采用雄性SD大鼠 ,用两袖套法行活体供肝移植 ,设部分肝移植组、全肝移植组及部分肝切除组。分别于术后不同时间段取血检测总胆红素、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶及谷氨酰转移酶 ;取肝组织行组织学检查。结果 部分肝移植组和全肝移植组术后受者存活时间的差异无显著性 ;各组术后 1周肝功能酶学指标增高 ,后逐步降至正常 ;组织学检查可见大量单核细胞浸润 ,特别是在门静脉周围汇管区 ,术后 1个月细胞浸润和坏死减少 ,可见胆管增殖 ;肝切除和部分肝移植组的肝组织可见线粒体肥大以及二倍体和多倍体的肝细胞 ,中央小静脉、肝窦和叶间静脉轻度扩张 ;术后30 0d ,各组的肝组织结构基本正常。
- 李相成王学浩俞悦黄蓬
- 关键词：肝移植活体供者
- 细胞毒性T淋巴细胞抗原4免疫球蛋白重组腺相关病毒载体的构建及其在移植肝中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的 将细胞毒性T淋巴细胞抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)cDNA克隆到腺相关病毒载体pSNAV中,获得目的基因在移植肝表达,为器官移植免疫耐受基因治疗奠定基础。 方法 应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建pSNAV-CTLA-4Ig,转化DH-5α,得到抗性克隆,BamH Ⅰ酶切鉴定。用脂质体将psNAV-CTLA-4Ig导入BHK-21中,G418筛选,以HSV1-rc感染此细胞株,产生pSNAV-CTLA-4Ig病毒。斑点杂交法测定病毒滴度, PCR鉴定CTLA-4Ig基因的整合并测序鉴定CTLA-4Ig全长,免疫组织化学方法检测CTLA-4Ig蛋白在大鼠移植肝中的表达。 结果 重组质粒经BamH Ⅰ酶切得到CTLA-4Ig全长cDNA片段,表明CTLA-4Ig成功地插入pSNAV内;病毒滴度测定的病毒颗粒数为8.5×1011／ml;PCR扩增产物为500~600 bp的基因片段,证实有CTLA^4Ig基因的整合;所测得的DNA序列与已知的CTLA-4Ig基因序列完全一致。经pSNAV-CTLA-4Ig病毒灌注的肝脏可见CTLA-4Ig蛋白的表达。 结论将CTLA-4Ig cDNA成功克隆到腺相关病毒载体pSNAV内,证实CTLA^4Ig cDNA正确插入pSNAV多克隆位点内,CTLA-4Ig蛋白可在移植肝中表达。
- 陆森王学浩李国强高云俞悦
- 关键词：CTLA-4移植肝细胞毒性T淋巴细胞G蛋白免疫球蛋白
- 导入FasL基因对荷肝癌裸鼠肿瘤增殖影响的实验研究被引量：2
- 2002年
- 目的 对 PA 317/ Fas L - p L XSN在裸小鼠体内抗肿瘤作用及机理作进一步探讨。方法 制备 PA317/ p KXSN -Fas L +病毒上清及转 Fas L CBRH7919细胞株。 6 0只实验动物 ,随机分成 4组。收集处于对数生长期的 CBRH 7919肝癌细胞 ,A、C、D三组每只裸小鼠接种肝癌细胞于腋窝皮下。 A组 (对照组 ) :接种 5天后 ,在腋窝部肿瘤内注射生理盐水 ;B组 :接种Fas L - CBRH7919制备模型 ;C组 :实验方法同 A组 ,在腋窝部肿瘤内注射 PA 317/ p L XSN- Fas L +病毒上清 ;D组 :实验方法同 C组 ,在腋窝部肿瘤内注射 PA 317/ p L XSN空载体。肿瘤细胞接种后测量、计算肿瘤的体积 ;间接免疫荧光流式细胞仪(flowcytom eter,FCM)检测各组肿瘤组织 Fas L的表达情况。采用 PI- Annexin V方法 ,用 FCM检则各组肿瘤细胞凋亡情况。结果 观察时间为 2 0天 ,B、C组肿瘤生长受到明显抑制 ,但并未完全消退 ,且与对照组有显著差异 ;D组肿瘤生长与对照组无显著差异。 B、C组肿瘤组织中 Fas L表达显著高于 A、D组 (分别为 72 .3% ,6 8.6 % vs7.2 % ,11.3% ,P<0 .0 1) ;与此对应 ,B、C组肿瘤组织中细胞凋亡显著高于 A、D组 (分别为 30 .5 % ,31.3% vs 12 .1% ,19.4 ,P<0 .0 1)结论 采用逆转录病毒载体将Fas L基因导入裸小鼠肝癌组织 ,?
- 李国强王学浩孙倍成钱建民俞悦
- 关键词：FASL基因原发性肝细胞癌裸鼠肿瘤增殖
