周瑞敏 作品数:7 被引量:5 H指数:1 供职机构: 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 国家科技攻关计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 更多>>
人doppel蛋白及其类似蛋白PrPΔ32-121对SH-SY5Y细胞的细胞毒性作用 被引量:1 2010年 目的体外观察细胞瞬时表达的人Dpl(doppel)蛋白对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,并与其结构类似蛋白——截短型PrP(PrPΔ32-121)加以比较。方法通过PCR方法获得人PRND基因及截短型PRNP基因并克隆至真核表达载体,瞬时转染SH-SY5Y细胞后,观察蛋白表达及其定位情况;采用MTT实验检测转染细胞的生长状态;用流式细胞仪、Western blot等方法检测转染细胞的凋亡状态。结果两种蛋白均可在转染细胞中表达,并存在于细胞膜上;MTT结果显示,在转染24 h后均出现明显的细胞毒性作用;细胞凋亡相关实验发现,转染细胞AnnexinV/PI双染阳性细胞数量增多,pro-casepase-3和Bcl-2因子水平降低。结论瞬时表达的Dpl蛋白与截短型PrP可产生类似的神经细胞毒性作用,并诱导启动细胞凋亡过程。 徐琨 王新 田婵 石崧 王桂荣 石琦 周瑞敏 姜惠英 楚雍烈 董小平关键词:朊蛋白 细胞毒性作用 细胞凋亡 感染羊瘙痒因子263K和139A仓鼠脑组织中tau、磷酸化tau、GSK3β和β-tubulin变化的研究 前言朊病毒病又称传播性海绵状脑病,是一类以脑内出现海绵状病理改变为特征的致死性神经退行性疾病,被认为是细胞内正常PrP蛋白转化为PrPSc所致,包括人类的克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJ... 王桂荣 石崧 高晨 张宝云 田婵 董辰方 周瑞敏 李晓丽 陈操 韩俊 董小平文献传递 利用PMCA对PrPSc在外周组织复制和NADPH促进PrPSc扩增的研究 可传播性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs),又称朊病毒病(prion disease),是一类由于中枢神经系统中的细胞型PrP发生错误折叠转变成为致... 董小平 石崧 董辰方 田婵 周瑞敏 张宝云 徐琨 石琦 高晨 韩俊文献传递 蛋白质错误折叠循环扩增技术及其应用 被引量:1 2008年 可传播性海绵状脑病是一类由朊病毒侵袭中枢神经系统而引起的致死性神经退行性疾病。在朊病毒病的病理过程中,细胞正常朊蛋白PrPC(cellular PrP)转化为异常构象的PrPSc(scrapie PrP)是至关重要的。目前,PrPSc转化增殖及致病机理仍不清楚。蛋白质错误折叠循环扩增(protein misfolding cyclic amplification,PMCA)技术的出现和应用,为研究朊病毒病的发病机制和发展敏感性高、特异性强的检测方法提供了很好的技术平台。 周瑞敏 田婵 董小平关键词:朊病毒 感染羊瘙痒因子263K株或139A株仓鼠脑组织中tau蛋白和磷酸化tau蛋白变化的研究 2009年 为探讨朊病毒病的神经病理特征,应用Western blot方法检测了感染羊瘙痒因子263K株或139A株的仓鼠脑组织中总tau蛋白和Ser396和Ser404位点发生磷酸化tau蛋白表达水平的变化;并应用Real Time PCR方法检测了tau mRNAs转录活性的改变。结果表明总tau蛋白含量升高而Ser396和Ser404位点发生磷酸化的tau蛋白含量降低,该现象与羊瘙痒因子毒株类型和临床潜伏期无关;感染羊瘙痒因子的仓鼠脑组织中Tau2和Tau4这两个异构体的转录水平升高。这些结果表明tau蛋白在Ser396和Ser404位点的去磷酸化可能与朊病毒病发病相关。 王桂荣 石崧 高晨 张宝云 田婵 董辰方 周瑞敏 李晓丽 陈操 韩俊 董小平关键词:朊病毒 TAU蛋白 磷酸化TAU蛋白 朊蛋白与信号蛋白14-3-3β的相互作用研究 被引量:3 2009年 为进一步确定PrP蛋白与14-3-3蛋白是否发生分子间的相互作用并确定PrP蛋白与14-3-3蛋白相互作用的区域,利用免疫共沉淀、pull down和能量共振转移(FRET)实验检测PrP蛋白与人14-3-3蛋白是否发生分子间的相互作用及相互作用的部位。结果证明,PrP蛋白与人14-3-3蛋白在体外、组织水平及细胞水平均可以发生相互作用,且证实作用的部位在PrP蛋白的106-126位氨基酸。该结果为进一步研究14-3-3蛋白在Prion疾病中的影响及Prion疾病的发病机制奠定了一定基础。 梅国勇 李媛 王桂荣 张宝云 田婵 陈操 周瑞敏 王新 李晓丽 王克霞 韩俊 董小平关键词:PRP 相互作用 人tau蛋白外显子2和外显子3特异性抗体的制备 2009年 目的制备人微管相关蛋白tauN端的外显子2和外显子3特异性多克隆抗体。方法从人外周血DNA中获得tau蛋白外显子2及外显子3序列并连接至原核表达载体pGEX-2T,表达纯化重组融合蛋白GST—E2、GST-E3;以此融合蛋白免疫家兔及小鼠制备抗血清,通过ProteinG/A、偶联GST蛋白的溴化氰(CNBr)活化柱对抗血清进行亲和纯化;用WesternBlot及ELISA方法确定所制备抗体的特异性和敏感性。结果在大肠埃希菌中表达纯化出人tau外显子2和外显子3重组融合蛋白GST-E2和GST-E3,相对分子质量为29×10^3。免疫实验动物后获得抗血清,经系列纯化后WesternBlot和ELISA检测显示,制备的抗人tau蛋白外显子2和外显子3抗体具有良好的特异性和免疫反应效价。结论成功制备了4种人tau外显子2和外显子3特异性抗体,为进行tau蛋白在神经退行性疾病中的作用研究提供了基础。 陈操 王桂荣 石琦 张宝云 梅国勇 李媛 王新 周瑞敏 韩俊 赵玉军 董小平关键词:蛋白质类 外显子 抗体 病毒 朊病毒病