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胰岛素对人脐血内皮祖细胞生物活性的影响被引量：3: 2008年; 目的探讨胰岛素对人脐血内皮祖细胞增殖、迁移与黏附功能的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法从人脐血中分离单个核细胞,加入EGM-2培养液,接种于包被人纤连蛋白的培养皿中贴壁培养,收集48 h后的悬浮细胞重新贴壁培养至第7天,利用免疫荧光和流式细胞术鉴定。细胞随机分为对照组和不同浓度(0.1、1和10nmol/L)胰岛素处理组干预24 h,分别采用MTT比色法、Transwell法和细胞黏附实验来观察胰岛素对内皮祖细胞增殖、迁移与黏附功能的影响。结果与对照组相比,0.1、1、10nmol/L的胰岛素干预内皮祖细胞24 h能明显增强其增殖、迁移和黏附能力(P<0.05或P<0.01);其中胰岛素浓度为1nmol/L时增殖功能达到峰值,胰岛素浓度为0.1nmol/L时迁移和黏附功能达到峰值。结论生理浓度与较低浓度胰岛素能增强内皮祖细胞的增殖、迁移与黏附能力。; 李建辉初少莉姬开达李华; 关键词：胰岛素内皮祖细胞增殖迁移

OSX基因沉默对醛固酮诱导的小鼠血管平滑肌细胞钙化的影响: 2015年; 目的研究成骨相关转录因子(OSX)沉默对醛固酮诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)成骨样分化和钙化的影响。方法体外原代培养小鼠的VSMC。针对小鼠OSX基因设计合成小分子干扰RNA(siRNA)序列,使用Lipo 2000为载体,转染体外培养的VSMC;FAM荧光标记siRNA优化转染条件。实时PCR检测OSX mRNA表达。将siRNA序列转染VSMC,细胞分为4组:1正常组;2醛固酮组(1.5 mmol/L);3siRNA转染组:醛固酮+OSX-siRNA;4阴性转染对照组:醛固酮+阴性对照siRNA。实时RT-PCR及免疫印迹法检测OSX、整联结合涎蛋白(Ibsp)基因和蛋白表达;茜素红染色观察细胞钙盐沉积。结果与醛固酮组相比,siRNA转染组OSX mRNA表达在转染后24 h及48 h均明显低于醛固酮组(均P<0.01);OSX蛋白表达在转染后48 h和72 h均低于醛固酮组(均P<0.01),以48 h最明显。siRNA有效沉默OSX基因表达后,OSX转染组Ibsp mRNA和蛋白的表达低于醛固酮组(均P<0.01),而且细胞钙盐沉积低于高磷组。结论 OSX-siRNA可以有效抑制VSMC OSX基因和蛋白的表达,从而抑制醛固酮诱导的VSMC成骨样分化和细胞钙化。OSX可以成为CKD血管钙化治疗的靶点。; 蔡凯愉何悦王浩龚艳春牛文全姬开达张晨莉薛敏; 关键词：醛固酮钙化

重组结缔组织生长因子对大鼠血管外膜成纤维细胞表型转化的影响被引量：3: 2006年; 目的:克隆和构建带大鼠结缔组织生长因子(CTGF)基因真核表达载体pcDNA3.1(+)/CTGF,并观察其对血管外膜成纤维细胞(AF)表型的影响。方法:以AF总RNA为模板,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),获得CTGF的cDNA,克隆入pcDNA3.1(+)载体,酶切和测序鉴定重组子。将构建好的pcDNA3.1(+)/CT-GF用脂质体法转入AF细胞。W estern b lotting观察CTGF的表达。同时观察转染pcDNA3.1(+)/CTGF对细胞表型的影响。结果:成功构建大鼠CTGF基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/CTGF.并证明其能在真核细胞内表达。转染pcDNA3.1(+)/CTGF可以诱导AF表型转化。结论:重组结缔组织生长因子可诱导大鼠血管外膜成纤维细胞表型转化。; 车在前高平进姬开达朱鼎良; 关键词：结缔组织生长因子血管外膜成纤维细胞表型转化

野生型犬尿氨酸酶表达载体的构建及酶活性检测: 2017年; 目的构建野生型犬尿氨酸酶(KYNU)的真核表达载体,并分析其在HEK293细胞中的表达及其酶活性。方法抽提人肝脏细胞的总RNA,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法获得KYNU基因全长cDNA,将野生型KYNU基因克隆到pcDNA载体质粒中,获得野生型pcDNA-KYNU重组表达质粒,经酶切鉴定和测序验证后转染HEK293细胞,用蛋白质印迹法技术检测野生型KYNU在细胞中的表达,用高效液相色谱法(HPLC)检测HEK293细胞表达的野生型KYNU酶蛋白的活性。结果通过测序及酶切鉴定野生型pcDNAKYNU重组表达质粒扩增后的PCR产物电泳结果显示构建成功,蛋白质印迹法结果显示转染有重组野生型cDNA-KYNU质粒的HEK293细胞能表达KYNU蛋白,HPLC结果显示野生型KYNU酶存在活性。结论成功构建野生型pcDNA-KYNU的真核表达载体,野生型重组质粒在HEK293细胞中能够表达KYNU并具有一定的酶活性。; 沈杰陈闻东姬开达高平进朱鼎良; 关键词：野生型高血压高效液相色谱法

C反应蛋白基因多态性与原发性高血压病的关系被引量：2: 2010年; 目的：研究C反应蛋白（CRP）基因的3个单核苷酸多态性（SNP）位点（rs1205r、s1130864、及rs1800947）与原发性高血压病的相关性。方法：采用TaqMan荧光定量PCR技术,对中国上海地区712例高血压病患者和672名正常血压者进行基因分型、分析单位点和单倍型与高血压及表型的相关性。结果：未发现CRP基因的3个SNP位点的基因型和等位基因频率在原发性高血压病组（EH）和正常血压者对照组（NT）之间存在显著差异（P〉0.05）。CRP基因rs1205（T/C）基因位点和rs1130864（G/A）基因位点经过连锁不平衡分析,D’值〈0.85,进行单倍型分析显示,单倍型C-A分布频率在EH组和NT组中有显著差异[NT比EH：0.064比0.040,优势比（OR）=0.617,95%可信区间（CI）：0.429~0.887,P=0.009],并且经过FDR校正后仍具有显著差异。未发现高血压病患者中不同单倍型之间血压、体质量指数和血清超敏CRP存在显著差异。结论：CRP基因3个SNP单点与原发性高血压病无明显相关性,单倍型CA可能与高血压保护作用有关。; 孔红金玥雯肖冰姬开达朱鼎良高平进张怡; 关键词：C-反应蛋白原发性高血压单核甘酸多态性基因

差速贴壁法体外培养人脐血内皮祖细胞的实验研究被引量：2: 2008年; 目的建立一种经济可靠、稳定、高纯度内皮祖细胞的培养方法。方法采用 Ficoll 密度梯度离心法从人脐血中分离单个核细胞,于包被人纤连蛋白的培养皿中贴壁培养,收集48 h后的悬浮细胞重新贴壁培养至第7天,利用免疫组化、免疫荧光及流式细胞术对培养的细胞进行鉴定。结果培养的细胞呈短梭形、多角型、胞体小;可见到大量典型的内皮祖细胞克隆;vWF 和 flk-1免疫组化细胞阳性率>95%,免疫荧光 Dil-ac-LDL 和 FITC-UEA-1双染阳性的细胞阳性率>98%,流式分析 CD_(133)^+细胞的百分率为(7.0±1.8)%。结论差速贴壁法是一种经济可靠、稳定、高纯度内皮祖细胞的培养方法。; 李建辉初少莉姬开达李华; 关键词：差速贴壁法脐血单个核细胞内皮祖细胞

RhoA／ROKα反义寡核苷酸抑制TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-actin表达被引量：4: 2006年; 目的α-平滑肌-肌动蛋白(a-SM-actin)的表达是血管外膜成纤维细胞/肌成纤维细胞表型转化的分子标记。本研究观察阻断RhoA-ROKα信号转导通路对于转化生长因子β1(transfor- ming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-肌动蛋白(actin)表达的影响,以揭示RhoA-ROKα信号通路在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的作用。方法使用贴壁法体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞；用Western blot技术测定RhoA和ROKα在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的表达。结果RhoA-ROKα在血管外膜成纤维细胞表达,TGF-β1可以诱导RhoA表达上调。用反义寡核苷酸技术抑制RhoA或ROKα的表达后能够抑制α-SM-actin的表达。结论RhoA-ROKα信号转导通路参与了TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞的过程。; 陈闻东朱鼎良姬开达高平进; 关键词：RHOA KINASE 肌成纤维细胞反义寡核苷酸

循环内皮祖细胞、C-反应蛋白与冠心病严重程度分析: 目的自1997年Asahara等首次在体外成功诱导人外周血CD34+细胞分化为内皮细胞以来,越来越多的证据表明成年骨髓中存在内皮祖细胞(EPCs),当血管损伤时骨髓EPCs被动员至外周血,分化并整和到损伤部位,参与血管内...; 汪海娅高平进姬开达沈卫峰陆林朱鼎良; 文献传递

蛋白激酶Cα在血管外膜细胞表型转化中的作用: ＜正＞近期研究发现血管病变发生时,不仅血管内膜、中膜参与血管重塑过程,外膜也在其中起重要作用。血管损伤时,外膜成纤维细胞（adventitial fibroblasts,AF）迅速转变为肌成纤维细胞（myofibrob...; 高平进朱鼎良孙爱军李燕姬开达刘建军; 文献传递

骨桥蛋白增强自发性高血压大鼠血管外膜成纤维细胞的迁移活性: 血管外膜成纤维细胞迁移参与形成新生内膜是一些血管疾病的共同发病过程。研究高血压动物模型的外膜成纤维细胞是否与对照组不同将有利于阐述高血压血管重塑的机制。本实验比较自发性高血压大鼠(spontaneously hy-per...; 孙爱军高平进刘建军姬开达朱鼎良; 关键词：主动脉外膜骨桥蛋白高血压细胞迁移; 文献传递

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姬开达

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