孙淑红
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：青岛大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EBV即刻早期基因BZLF1腺病毒表达载体的构建及初步应用被引量：2
- 2007年
- 目的构建EBV即刻早期基因BZLF1的重组腺病毒表达载体,探讨其表达诱导潜伏状态EBV进入裂解期增殖的作用。方法采用AdEasy系统构建携带BZLF1的重组腺病毒载体pAd- BZ,脂质体法转染人胚肾293细胞,包装产生重组腺病毒vAd-BZ。vAd-BZ感染EBV阳性细胞NEC后,采用RT-PCR、Western blot、流式细胞术和MTT等方法检测目的基因表达,以及目的基因表达对EBV阳性细胞的影响。结果PCR、序列测定以及限制性酶切证实BZLF1基因正确插入穿梭质粒,并与病毒骨架质粒pAdEasy-1重组,重组腺病毒表达载体构建成功。经293细胞包装获得具有稳定感染性的重组腺病毒vAd-BZ,感染重组腺病毒的NEC靶细胞可以检测到BZLF1基因的表达,进而诱导EBV从潜伏期进入裂解期。结论重组腺病毒vAd-BZ可有效感染EBV阳性细胞NEC,诱导潜伏状态的EBV活化,进而特异性杀伤EBV阳性肿瘤细胞。
- 孙淑红王云王笑峰孙坚萍朱伟罗兵
- 关键词：腺病毒载体EBV即刻早期基因
- 应用siRNA特异沉默EBV潜伏期基因EBNA2表达的初步研究
- EBNA2是EBV感染宿主细胞后最先表达的病毒基因产物之一，由BYRF1基因编码，与细胞内蛋白无任何明显的同源序列。EBNA2是一种病毒转录因子，不能直接与DNA结合，但可通过与细胞抑制重组信号结合蛋白RBP-Jκ及其它...
- 孙淑红
- 关键词：小干涉RNA小发夹RNA
- 文献传递
- 靶向EBV潜伏期基因EBNA2小干涉RNA系统的构建
- 2007年
- [目的]构建携带靶向EBV核抗原EBNA2(EBV nuclear antigen,EBNA)的pSUPER.retroRNAi逆转录病毒载体,进而筛选出稳定产毒的细胞克隆。[方法]用DNA重组技术将60nt能转录产生靶向EBNA2小发夹RNA(smallhairpin RNA,shRNA)的寡核苷酸序列定向插入逆转录病毒载体pSUPER.retro,并用限制性内切酶酶切和测序鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒载体转染包装细胞系PheonixA,G418筛选稳定产生逆转录病毒的细胞克隆。[结果]重组逆转病毒载体经限制性内切酶酶切,电泳后可观察到7167bp和281bp两条DNA条带;测序鉴定结果表明序列正确;重组载体转染的包装细胞经G418筛选获得能产生逆转录病毒的抗性细胞克隆,病毒滴度为2.5×104CFU/ml。[结论]成功构建和筛选出靶向EBV潜伏期基因EBNA2的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞系,为深入探讨EBNA2基因的细胞转化和抗凋亡作用提供了实验基础。
- 孙淑红胡晓峰王笑峰殷凡罗兵
- 关键词：小发夹RNA逆转录病毒载体EB病毒
- EBV相关胃癌ras基因突变及法尼基转移酶β-亚单位基因的表达被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨EBV相关胃癌(EBVaGC)、EBV阴性胃癌(EBVnGC)及相应癌旁组织中ras基因突变和法尼基转移酶(FTase)的表达意义.方法:应用PCR-RFLP技术检测EBVaGCs13例、EBVnGCs45例以及相应癌旁组织58例中H-ras12和K-ras12,13密码子点突变情况;RT-PCR技术检测FTaseβ亚单位mRNA的表达水平.结果:共检测到H-ras12位点突变2例,突变率为3.45%(2/58),均发生在EBVnGCs,未发现K-ras12和13密码子点突变.58例癌组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平为0.93±0.39,癌旁组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平为0.78±0.26,两者有显著性差异(t=2.44,P=0.02).EBVaGCs组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平为0.80±0.19,EBVnGCs组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平为0.96±0.43,两者无显著性差异(t=1.93,P=0.06);EBVaGCs和癌旁组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平无显著性差异(t=0.54,P=0.60);EBVnGCs和癌旁组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平有显著性差异(t=2.39,P=0.02);2例BHRF1阳性和11例BHRF1阴性EBVaGCs组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平无显著性差异(t=0.26,P=0.80);6例BARF1阳性和7例BARF1阴性EBVaGCs组织中FTaseβ亚单位mRNA表达水平亦无显著性差异(t=1.59,P=0.14).结论:胃癌组织ras基因突变率较低,胃癌组织中FTaseβ亚单位mRNA明显高于癌旁组织.EBVaGC组织中ras基因突变、FTaseβ亚单位表达与EBV感染无明显相关性.
- 孙佰秀殷凡朱伟高玉孙淑红罗兵
- 关键词：EB病毒RAS
