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宋帅

作品数:12 被引量:42H指数:4
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室更多>>
发文基金:国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域:农业科学医药卫生更多>>

文献类型

  • 12篇中文期刊文章

领域

  • 9篇农业科学
  • 3篇医药卫生

主题

  • 9篇疫病
  • 9篇口蹄疫
  • 9篇口蹄疫病毒
  • 9篇病毒
  • 6篇O型口蹄疫
  • 6篇O型口蹄疫病...
  • 5篇抗体
  • 5篇克隆
  • 4篇病毒单克隆抗...
  • 3篇单克隆
  • 3篇单克隆抗体
  • 2篇受体
  • 2篇抗原
  • 2篇基因
  • 1篇单抗
  • 1篇蛋白
  • 1篇动物
  • 1篇动物疫病
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体

机构

  • 12篇中国农业科学...
  • 2篇甘肃农业大学

作者

  • 12篇宋帅
  • 12篇常惠芸
  • 10篇林彤
  • 10篇独军政
  • 10篇邵军军
  • 9篇高闪电
  • 6篇丛国正
  • 4篇谢庆阁
  • 2篇胡永浩
  • 2篇丛国政
  • 2篇李菁
  • 1篇伏小平
  • 1篇王景锋
  • 1篇赵建勇

传媒

  • 3篇中国人兽共患...
  • 1篇中国免疫学杂...
  • 1篇生物技术通报
  • 1篇安徽农业科学
  • 1篇浙江农业科学
  • 1篇甘肃畜牧兽医
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇中国预防兽医...
  • 1篇Agricu...
  • 1篇中国兽医科学

年份

  • 1篇2010
  • 9篇2009
  • 2篇2008
12 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
亲和层析和反相层析纯化O型口蹄疫病毒单抗的比较被引量:1
2009年
为了获得有效纯化抗体的方法,将杂交瘤细胞株(4C3)用细胞培养液扩大培养后制备腹水,所得腹水依次用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀后再分别用亲和层析和反相层析进一步纯化抗体,并用SDS-PAGE和间接酶联免疫吸附试验分析其纯化抗体的纯度和活性。结果表明,亲和层析获得了较高纯度的抗体,并且抗体活性没有丧失,反相层析获得的抗体有较好的活性,但抗体中还有微量的杂蛋白。因此亲和层析是单抗纯化的较好途径,所获得的高纯度单抗将为O型口蹄疫病毒的基础研究和应用研究提供良好的物质基础。
宋帅林彤邵军军常惠芸胡永浩
关键词:O型口蹄疫病毒单抗
口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的细胞定位及组织分布
2009年
利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的单克隆抗体作为一抗,FITC标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG分别作为二抗。结果表明,pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染的CHOK1细胞的细胞膜及细胞质内可见致密的绿色荧光(IFA),猪舌、唇、气管等组织细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物,表明整联蛋白αvβ6受体广泛分布于猪体的器官组织细胞中,为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定了基础。
赵建勇常惠芸独军政高闪电宋帅伏小平谢庆阁
关键词:口蹄疫病毒受体整联蛋白细胞定位
Expression and Identification of the Type-specific Antigen of FMDV of Serotype C被引量:4
2009年
[Objective]The aim was to provide a theoretical basis for preparation of polyclonal antibodies and monoclonal antibody that of type specificity, as well as Foot-and-mouth Disease Virus (FMDV) typing.[Method] The recombinant plasmid pGEM-CP1 that contained VPI gene of FMDV of serotype C was used as template for the VP1 and its C terminus coding fragments of FMDV of serotypes C amplification. The coding fragments of VP1 and its C terminus were respectively cloned into prokaryotic expression vector for prokaryotic expression and the reactionogenicity was detected. The purified fusion protein of FMDV VP1 and its C terminus of serotype C were used to construct the indirect ELISA method to detect positive sera of four serotypes A, O, C and Asia 1 of guinea pig and determine the cross reactivity of FMDV antibody of VP1 and its C terminus of serotype C with other three serotypes. [ Result] The recombinant prokaryotic expression plasmids of PPRO-CVP1 and pPRO-CVPlc were constructed, FMDV VP1 and its C terminus of serotype C were expressed in high level, and the molecular weight of target proteins was 33 kD and 20 kD respectively. Western blot result showed that the fusion protein of VP1 and its C terminus could react with the positive sera of guinea pig of the same serotype. ELISA results revealed that VP1 and its C terminus of serotype C are type-specific and no cross-reactivities were shown between guinea pig positive sera of FMDV of serotype C with the other three serotypes, and the C terminus showed better type-specificity. [ Conclusion] FMDV specific antigen of serotype C was obtained.
高闪电独军政常惠芸丛国正邵军军林彤宋帅谢庆阁
关键词:SEROLOGYSEROTYPING
用protein G纯化口蹄疫病毒单克隆抗体的特性分析被引量:3
2009年
目的为了获得高效价和高纯度的O型口蹄疫病毒单克隆抗体。方法用O型口蹄疫乳鼠毒(LD50=10-8.5)感染免疫小鼠,按有限稀释法和ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单抗腹水,所收腹水用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀,再用proteinG亲和层析柱进行亲和层析纯化单体,并用SDS-PAGE和单抗检测方法分析其纯化抗体的纯度和活性。结果经3次亚克隆获得了一株杂交瘤细胞株(10E6),抗体亚类鉴定为IgG2a;SDS-PAGE电泳显示,纯化的抗体纯度较高,只有IgG2a的重链和轻链,而没有其它杂蛋白带;单抗ELISA检测方法显示,纯化的抗体具有良好的活性,其效价为1∶102400,高于腹水效价。结论用proteinG亲和层析法获得了高纯度和高效价的单克隆抗体,将为O型口蹄疫病毒的基础研究和应用研究奠定基础。
宋帅林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸
关键词:O型口蹄疫病毒单克隆抗体
基因工程抗体研究进展被引量:20
2009年
随着对分子生物学研究和抗体分子结构功能的深入研究,利用细胞工程和遗传工程对抗体分子进行改建并赋予其新的功能,进而开发了新的抗体应用领域,使单克隆抗体技术又向前发展了一步。基因工程抗体是按人类设计所重新组装的新型抗体分子,可保留或增加天然抗体的特异性和主要生物学活性,去除或减少无关结构,从而可克服单克隆抗体在临床应用方面的缺陷。
李菁林彤宋帅高闪电邵军军丛国政独军政常惠芸
关键词:基因工程抗体人源化抗体小分子抗体核糖体展示
抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体轻链可变区的克隆及序列分析
2009年
应用分子生物学技术,从分泌抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞9F12中提取总RNA,经反转录,PCR扩增及克隆,得到VL基因。序列测定结果表明,9F12的VL基因为336 bp,可编码112个氨基酸。用NCBI GenBank分析表明,VL基因符合小鼠抗体可变区特征,为功能性重排的抗体可变区基因。根据Kabat分类体系,9F12的VL基因片段隶属于抗体κ轻链20家族。9F12的VL基因的克隆为抗O型口蹄疫病毒单链抗体的构建与表达奠定了基础。
宋帅林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸
关键词:O型口蹄疫病毒轻链可变区基因克隆
C型口蹄疫病毒型特异性抗原的表达与鉴定被引量:2
2009年
[目的]为C型FMDV型特异性多克隆抗体、单克隆抗体的制备及FMDV定型提供理论依据。[方法]以含有C型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白基因VP1的重组质粒pGEM-CP1为模板,设计特异性表达引物,扩增VP1及其C端编码区。对C型口蹄疫病毒VP1及其C端进行原核表达,并测定反应原性。利用纯化的C型VP1及其C端融合蛋白建立间接ELISA,分别对O、A、C、Asia 1 4型豚鼠阳性血清进行检测,确定C型VP1及其C端与其他3型FMDV抗体的型间交叉反应性。[结果]构建了pPRO-CVP1、pPRO-CVP1c重组原核表达质粒,实现了C型口蹄疫病毒VP1及其C端的高效表达,目的蛋白的分子量大小分别为33和20 kD。Western blot显示,VP1及其C端融合蛋白均可与对应血清型的豚鼠阳性血清反应。C型VP1及其C端与其他血清型的FMDV阳性血清均未发生交叉反应,且以VP1C端的型特异性最好。[结论]获得了C型FMDV特异性抗原。
高闪电独军政常惠芸丛国正邵军军林彤宋帅谢庆阁
关键词:血清学血清分型
O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和鉴定被引量:4
2009年
利用O型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选和7次亚克隆后获得2株能稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经间接ELISA检测,2株杂交瘤细胞株(3E1、7E6)的腹水效价分别为1∶25600、1∶102400。间接免疫荧光试验和特异性试验表明2株McAb可与不同株的O型FMDV反应,而不与其他血清型的FMDV反应。Western blot和叠加试验表明2株单抗可识别O型FMDV结构蛋白VP1上的同一个抗原表位。此特异性McAb的获得将为O型FMDV疫苗的研制和诊断方法的建立奠定基础。
宋帅林彤邵军军丛国正独军政高闪电常惠芸
关键词:O型口蹄疫病毒单克隆抗体间接ELISA
抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体相对亲和力的测定被引量:4
2009年
目的:对3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力进行测定。方法:用纯化的O型口蹄疫病毒作为包被抗原建立一种检测方法,将3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)制备腹水并纯化,并用建立的检测方法测定3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力。结果:检测方法中抗原、酶标抗体的最佳稀释度分别为1∶800和1∶10000,单抗的相对亲和力分别为:4A9约在5.242μg/ml(1∶600),4C3约在0.763μg/ml(1∶5000),9F12约在0.127μg/ml(1∶40000),即9F12>4C3>4A9。结论:用建立的ELISA方法测定了3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力,将为进一步研究口蹄疫病毒而选取合适的单抗提供理论依据。
宋帅林彤邵军军常惠芸
关键词:O型口蹄疫病毒单克隆抗体
口蹄疫病毒L^(pro)蛋白的致病机理
2010年
李菁林彤宋帅高闪电邵军军丛国政独军政常惠芸
关键词:口蹄疫病毒致病机理动物疫病传染性发病率
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