宋长绪
- 作品数：179 被引量：659H指数：15
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省农业科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 1株猪葡萄球菌强毒株的分离鉴定及致病性试验被引量：13
- 2015年
- 为确定广东省增城某猪场产房仔猪暴发渗出性皮炎的致病菌,从病猪心脏、肺脏、病变皮肤分离并纯化细菌,经形态学观察,镜检,生化特性及gap基因的序列分析,确定为猪葡萄球菌,命名为ZC-4株。药敏试验结果显示该菌株对头孢拉定、头孢唑啉、新生霉素高度敏感,对头孢噻肟、万古霉素、庆大霉素中度敏感,对青霉素、阿莫西林、磺胺类药物、链霉素、恩诺沙星等均耐药。对分离株毒素基因进行检测,结果显示,分离株携带ExhA毒素基因,测序结果表明,其编码区全长为822bp,编码274个氨基酸;氨基酸序列与丹麦分离株ExhA基因(AF515453)的同源性最高,为99.6%;遗传进化分析显示,分离株所携带的毒素基因与参考菌株猪葡萄球菌ExhA毒素基因聚类紧密,位于一个小的分支内。分离株致病性试验结果显示,分离株接种25日龄健康断奶仔猪后24h,病猪耳根、四肢内侧、背部、腹部、臀部、尾根等部位出现蜕皮并露出有液体渗出的鲜红创面,继而皮肤形成一层厚厚的结痂,说明该菌株具有较强的致病性。本试验为猪葡萄球菌疫苗的研制及致病机制研究提供了理论依据。
- 李艳张乐宜宋长绪
- 关键词：猪渗出性皮炎猪葡萄球菌
- 荧光定量RT-PCR检测猪日本脑炎病毒被引量：6
- 2007年
- 通过RT-PCR方法克隆了日本脑炎病毒(JEV)N基因片段序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,同时根据GenBank中的靶序列设计了荧光定量RT-PCR的1对引物和1条TaqMan探针。通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了JEV检测的荧光定量PCR方法。结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108和1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为17.33、20.52和23.90,变异系数分别为0.54%、0.74%和0.53%,均小于5%。对阳性组织病料的检测表明该方法的灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nested-PCR,nPCR)具有相近的灵敏度。
- 孙彦伟刘建营徐维加田云王晶钰宋长绪
- 关键词：日本脑炎病毒荧光定量PCRTAQMAN探针
- 一种猪饲料中猪源蛋白的检测方法
- 本发明公开了一种猪饲料中猪源蛋白的检测方法。方法包括将猪源IgG的抗体包被在基材上，然后加入受检样品，之后加入用标记物标记的另一种不同动物源的抗猪源IgG的抗体，接着加入底物显色。本发明方法敏感性好、重复性好、检测限低、...
- 宋长绪蒋智勇蔡汝健朱丹
- 文献传递
- 基于TaqMan探针的猪圆环病毒1型实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2007年
- 采用PCR方法克隆了猪圆环病毒1型(PCV1)ORF2基因,构建了重组质粒pMD-ORF2并将其作为标准阳性模板。通过对反应条件进行优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了检测PCV1的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的检测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL;对起始浓度为1.0×107、1.0×106、1.0×105拷贝/μL标准品的最终实际测得值分别为1.001×107、0.869×106和0.988×105拷贝/μL,变异系数分别为4.758%、1.865%和3.836%。表明,此方法具有良好的准确性和重现性。
- 张福良宋长绪朱道中徐维加
- 关键词：猪圆环病毒1型实时荧光定量PCRTAQMAN探针
- 猪葡萄球菌ExhB基因在E．coli中的表达及生物学活性分析被引量：3
- 2009年
- 以猪葡萄球菌基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ExhB基因,克隆测序鉴定后,插入质粒pET32a,构建重组表达载体pET32a-ExhB,通过大肠杆菌BL21表达重组融合蛋白,利用Ni亲和层析的方法纯化重组的融合蛋白,并用纯化的蛋白攻毒裸鼠,鉴定其生物学活性。结果显示,扩增出了猪葡萄球菌ExhB基因并纯化出了重组的融合蛋白,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白的相对分子质量约为45 000,主要以包涵体形式存在;通过ELISA和琼脂扩散试验表明,所表达的包涵体蛋白可以与用菌体制得的多克隆抗血清发生特异性结合;用复性的蛋白在裸鼠身上攻毒后可以产生皮炎病变。结果表明,成功的表达了ExhB基因的重组融合蛋白,并且鉴定出重组蛋白可与猪葡萄球菌阳性血清发生特异性免疫反应和重组蛋白在裸鼠身上的致病性,为进一步研究猪葡萄球菌的致病机理及建立该菌完备准确的防治和检测方法奠定基础。
- 杨彩娟张曦蒋智勇陈德坤宋长绪
- 关键词：猪葡萄球菌基因表达生物活性
- 猪圆环病毒Ⅱ型GD株ORF1基因重组腺病毒的构建及其表达
- 根据PCV2 ORF1基因的序列设计两条引物从PCV2的PK15细胞培养物中扩增出ORF1基因(945bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pMD-ORF1。将PCV2 ORF1基因...
- 祝卫国宋长绪王贵平杨增歧王旭荣黄忠张春红
- 关键词：重组腺病毒
- 文献传递
- 猪溶血性链球菌对复合酚消毒剂的耐药性
- 1998年
- 以亚致死浓度（１∶５００）复合酚多次处理猪溶血性链球菌Ｃ５５１６，得其第１９代菌（Ｆ１９）。Ｆ１９可抵抗推荐浓度复合酚（１∶３００，可完全杀死原代菌）；在普通肉汤多次传代，未见其对复合酚抵抗力下降；用碱裂解法提取Ｆ１９质粒ＤＮＡ，经琼脂糖凝胶电泳，发现１条明亮的电泳带。此电泳带与Ｆ１９对复合酚的抵抗力的关系尚需进一步研究。
- 彭新宇吴惠贤宋长绪谢宏料魏文康温列娜谢明权
- 关键词：复合酚消毒剂耐药性
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒华南株GDjm全基因组测序与遗传进化分析被引量：1
- 2020年
- 为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)基因变异情况,对广东地区某猪场患有猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)仔猪的肺脏样品进行检测及病毒分离,在猪肺泡巨噬细胞(PAM)上成功分离1株病毒并命名为GDjm株,然而分离的毒株不能感染Marc-145细胞。全基因组进化分析、同源性比对及重组分析结果显示,GDjm属于重组毒株,与GDZS2016的同源性为96.2%,与中国高致病性毒株HUN4同源性为96.0%,与美洲型经典毒株VR-2332的同源性为87.4%,与NADC30同源性为82%,与欧洲型毒株Lelystad-virus同源性为57.9%。NSP2序列比对和同源性分析结果显示,GDjm与高致病性毒株HUN4、JXA1、JXwn06相似,在511、534~562位存在氨基酸缺失。GP5序列比对以及同源性分析结果显示,GDjm毒株在GP5抗原表位存在氨基酸突变。经重组分析得出GDjm株为高致病性毒株HUN4与华南地区流行毒株GDZS2016的重组毒株,重组区域为6723~9521 bp、11998~15019 bp。
- 张驰董建国于林洋王爽云范兰兰张乐宜刘燕玲王磊宋长绪
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传进化
- 猪圆环病毒Ⅱ型GD株ORF2基因重组腺病毒的构建及其表达
- PCV2ORF2基因的序列设计两条引物从PCV2的PK15细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp).将此基因片段克隆入pMD18-T载体,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pMD-ORF2.将PCV2ORF2基因克隆入p...
- 宋长绪蒋智勇王贵平高向阳赵亚华
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2基因重组腺病毒PCR检测
- 两株不同来源的猪圆环病毒1型ORF2基因的克隆与序列分析
- 根据GenBank中猪圆环病毒1型(PCV1)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR方法从PK-15细胞和疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的仔猪组织病料中分别扩增出PCV1 ORF2全基因(702 bp)....
- 张福良孙丽华宋长绪杨鸣琦郝永清刘燕玲武占银
- 关键词：猪疾病圆环病毒PCV1ORF2
- 文献传递
