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鸽TLR7基因的克隆、鉴定及表达分析被引量：3: 2014年; 【目的】克隆鸽Toll样受体(Toll-like receptor 7,TLR7)全基因,预测其主要功能区域并分析在鸽的各种组织中的表达情况.【方法】通过RT-PCR、RACE、相对荧光定量PCR、生物信息学软件分析方法进行研究.【结果和结论】研究发现鸽TLR7基因cDNA全长3 516 bp,ORF全长3 175 bp,编码1 048个氨基酸.其蛋白结构主要由胞外的富含亮氨酸的结构域(LRRs)、跨膜域(TM)和胞内的Toll/白介素-1受体结构域(TIR)3部分构成.鸽TLR7基因编码的氨基酸序列与鸿雁Anser cygnoides、绿头鸭Anas platyrhynchos、鸡Gallus gallus和麻雀Taeniopygia guttata的相似性均高于78%,与哺乳动物的相似性约为60%,与鱼类的相似性低于55%.鸽TLR7基因在小肠、脾脏、肾脏、肝脏中表达量较高,而在大脑、肺脏、气管、心脏、胰腺、肌肉、皮肤中表达量相对较低.该研究克隆了鸽TLR7全基因,并预测其主要功能区域.; 韩翡焦培荣韦良孟何静宋亚芬康银峰崔进张烁廖明任涛; 关键词：受体表达

新城疫病毒V和W基因真核表达产物对DF-1细胞凋亡的影响: 2014年; 将含新城疫病毒（NDV）疫苗株LaSota和强毒株GM V和W基因的真核表达质粒pEGFP-La V、pEGFP-La W、pEGFP-GM V和pEGFP-GM W转染鸡胚成纤维细胞（DF-1）。转染24h后，用荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白GFP在细胞中显著表达。分别于转染后24、36h和48h用流式细胞仪测定表达产物对DF-1细胞凋亡的影响。结果表明，随着转染时间的增加，细胞早期凋亡率逐渐上升。在质粒转染后24h ， pEGFP-GM V、pEGFP-GM W、pEGFP-La V和pEGFP-La W真核表达产物诱导DF-1细胞的凋亡率在14 T.26％～17.09％之间，差异不大，但都明显高于空载体组。而在质粒转染后36h ，pEGFP-GM V、pEGFP-GM W真核表达产物诱导细胞凋亡率分别为45.05％和43.4％，明显高于pEGFP-La V 和pEG-FP-La W诱导的31.44％和38.64％的凋亡率。在质粒转染后48h ，pEGFP-GM W和pEGFP-La W真核表达产物诱导细胞凋亡率均超过50％， pEGFP-GM W 真核表达产物诱导细胞凋亡率达到了43.4％，而pEGFP-La V真核表达产物诱导细胞凋亡率最低，为33.44％。由此表明，来源于不同毒力 NDV毒株非结构蛋白V和W均能诱导早期细胞凋亡，但是诱导细胞凋亡能力存在一定的差异。; 汪招雄康银峰孙敏华高诗敏谢鹏任涛; 关键词：新城疫病毒真核表达细胞凋亡

一种高效新城疫DNA疫苗的分子佐剂及其制备方法和应用: 本发明公开了一种高效新城疫DNA疫苗的分子佐剂及其制备方法和应用，属于疫苗技术领域。所述的高效新城疫DNA疫苗的分子佐剂为将鸡白细胞介素12的构建到真核表达载体pCAGGS中，获得重组鸡白细胞介素12的真核表达载体pCA...; 任涛李艳玲康银峰谢鹏; 文献传递

NDV调控PI3K介导的信号通路研究: 新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）感染引起的一种高度接触性传染病。强毒NDV能引起感染鸟类消化道和呼吸道出血或中枢神经系统损伤。自192...; 康银峰; 关键词：PI3K/AKT信号通路病毒复制抗凋亡作用

白介素12真核表达质粒及电穿孔对新城疫F基因DNA疫苗的免疫增强作用研究: 将60只14日龄的SPF鸡分为6组,每组10只,分别为ddH2O/IM对照组、pCAGGS/IM对照组、pCAG-F/IM组、pCAG-F/EP组、pCAG-F+pCAG-IL12/EP组和pCAG-IL12/EP组。所...; 李艳玲康银峰任涛; 关键词：DNA疫苗 F基因电穿孔白介素12; 文献传递

家禽的气雾免疫被引量：1: 2016年; 气雾免疫主要适用于一些对呼吸道有亲嗜性的疫苗,例如鸡新城疫Ⅱ系、Ⅳ系疫苗和传染性支气管炎弱毒疫苗等^([1])。气雾免疫省时省力,因此关于气雾免疫的应用报道也逐渐增多。本文对其原理、优缺点以及一些注意事项进行综述^([2])。; 李艳玲康银峰任涛; 关键词：家禽气雾免疫

鸭α、γ干扰素融合基因的表达及其抗病毒活性研究: 为探索鸭α干扰素(DuIFN-α)与γ干扰素(DuIFN-γ)融合基因的抗病毒效果,本研究将已构建好的重组表达质粒pET-32a-IFNα-IFNγ进行原核表达,用SDS-PAGE和Western blot分析表达的蛋白...; 高佩黎玉莲向斌李亚玲孙敏华康银峰谢鹏李艳玲任涛; 关键词：融合PCR 抗病毒活性

鸭α、γ干扰素融合基因的表达及其抗病毒活性研究: 为探索鸭α干扰素(DuIFN-α)与γ干扰素(DuIFN-γ)融合基因的抗病毒效果,本研究将已构建好的重组表达质粒pET-32a-IFNα-IFNγ进行原核表达,用SDS-PAGE和Western blot分析表达的蛋白...; 高佩黎玉莲向斌李亚玲孙敏华康银峰谢鹏李艳玲任涛; 关键词：融合PCR 抗病毒活性; 文献传递

猪α干扰素与白介素-18融合基因的克隆、原核表达及其抗病毒活性的初步研究被引量：1: 2014年; 为探索猪α干扰素(poIFN-α)与白介素-18(poIL-18)融合基因的抗病毒效果,本研究通过融合PCR,以质粒pMD18-T/poIFN-α和pMD18-T/poIL-18为模板扩增猪IFNα-IL18(poIFNα-IL18)融合基因。将poIFNα-IL18融合基因插入原核表达载体pET-28b(+)构建重组表达质粒pET-28b/poIFNα-IL18,转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE分析重组表达蛋白;经镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化后,用微量细胞病变抑制法在PK-15/VSV系统上进行抗病毒活性测定。结果表明成功构建重组表达质粒pET-28b/poIFNα-IL18;SDS-PAGE可检测到分子质量为37ku左右的蛋白条带,与目的蛋白大小相近;经镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化,获得高纯度重组蛋白;用微量细胞病变抑制法在PK-15/VSV系统上检测到重组蛋白poIFNα-IL18比单一蛋白poIFN-α和poIL-18的抗病毒活性显著,其抗水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)活性分别为1.03×105、1.28×104及0.11×104 U/mg。; 张盼盼何静康银峰向斌任涛; 关键词：融合基因克隆抗病毒活性

鸡α干扰素/白细胞介素18基因的融合表达及抗病毒活性研究被引量：5: 2015年; 【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具有互补末端的引物,形成具有重叠链的PCR产物,通过PCR产物重叠链的延伸将鸡α干扰素(Chicken interferon alpha,Ch IFN-α)与鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,Ch IL-18)基因构建Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因并克隆入p ET-28a原核表达载体中进行原核表达.通过镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDSPAGE分析、Western-blot鉴定.采用细胞病变抑制法检测r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)及新城疫病毒(NDV)增殖活性.【结果和结论】成功构建并克隆了p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因.融合基因在大肠埃希菌中表达的r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白相对分子质量约为38 000,蛋白经纯化后纯度在90%以上.r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在鸡胚成纤维(CEF)细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和NDV的活性明显高于单一r Ch IFN-α、r Ch IL-18蛋白的抗病毒活性.; 何静张盼盼孙敏华康银峰谢鹏向斌韩翡谭阳通任涛; 关键词：鸡白细胞介素18 融合PCR 抗病毒活性

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康银峰