张呈文
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：华南农业大学资源环境学院昆虫学系更多>>
- 发文基金：公益性行业科研专项国家重点基础研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 死亡素与泛素在大肠杆菌中的高效融合表达被引量：5
- 2009年
- 死亡素是由21个氨基酸残基组成的广谱抗菌肽。为了高效表达可溶性的死亡素,本研究利用递归式PCR(recursive PCR,rPCR)扩增了死亡素基因thanatin,并将其和家蝇Musca domestica泛素基因ubiquitin构成嵌合基因,克隆到表达载体pET-32a,再与硫氧还蛋白融合后构建表达载体pET-TRX-UBI-THA。将酶切和测序鉴定正确的质粒转化表达宿主菌BL21,经0.6mmol/L IPTG诱导,TRX-UBI-THA融合蛋白得到了高效可溶性表达。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明融合蛋白的分子量为28.9kD,与预期的结果一致,表达量占菌体总蛋白的46%。Western blot分析结果显示融合蛋白能与Ni-NTA鏊合物特异性的结合,表明在融合蛋白的N-端带有6×His标签。利用C-端带有6×His标签的泛素C-端水解酶对融合蛋白进行切割,切割产物经Ni2+-NTA亲和柱和HPLC纯化(纯化量为5.4mg/L),Tricince-SDS-PAGE电泳得到单一的泛素蛋白条带。电喷雾质谱(ESI-MS)分析表明,纯化的泛素分子量为2.57kD,与通过氨基酸预测的分子量完全一致。利用琼脂孔穴扩散法对泛素活性进行检测,结果显示纯化的泛素对大肠杆菌K12D31和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus具有较强的活性抑制。本研究表明,利用泛素融合技术可以高效表达可溶性的死亡素。
- 金丰良张呈文许小霞孙强任顺祥
- 关键词：抗菌肽泛素纯化活性检测
- 斑腹刺益蝽死亡素与家蝇泛素基因的高效融合表达
- 昆虫抗菌肽(Antibacterial peptide)是昆虫遭受外界异物的刺激或病原微生物的感染而快速产生的一类具有生物活性的短链多肽。具有抗菌谱广、热稳定性强、分子量小及无免疫原性等特点，其杀菌机制独特，不易产生耐药...
- 张呈文
- 关键词：家蝇泛素基因抗菌蛋白
- 文献传递
