张国俊
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国科学院沈阳应用生态研究所更多>>
- 发文基金：沈阳市科技计划项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 增强型金黄色葡萄球菌肠毒素C2突变体及其超抗原活性被引量：5
- 2013年
- 金黄色葡萄球菌肠毒素C2(Staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)作为一种超级抗原蛋白,极微量即可有效激活机体免疫系统,这一特性可应用于对肿瘤和感染性疾病的辅助治疗。为了增强SEC2的超抗原活性,应用over-lap PCR方法将SEC2中的102～106位GKVTG氨基酸残基分别突变为WWH、WWT和WWP,获得3种突变体ST-1、ST-2和ST-3。三种突变体刺激小鼠淋巴细胞增殖活性和肿瘤细胞生长抑制活性与野生型SEC2相比均有显著提高。ST-1和ST-3的致热活性与野生型SEC2相当,而ST-2的致热活性明显高于野生型SEC2。此外,三种突变体体外刺激淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平也显著提高,这可能是导致突变体具有较高肿瘤细胞生长抑制活性的原因。进一步实验发现,三种突变体刺激下,小鼠脾淋巴细胞mVβ8.2基因的转录水平较野生型SEC2显著增加,暗示突变体对TCR mVβ8.2分子亲和力的提高,可能是其超抗原活性增强的主要原因。
- 张国俊徐明恺孙健李洪义杨宏丽张惠文张成刚
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素C2CELL
- 活性增强的SEC2截短突变蛋白的构建及其生物活性研究
- <正>目的:为得到一种分子量较小和超抗原活性高的改构SEC2分子,通过基因工程手段获得超抗原活性增强的截短突变蛋白SEC14-239M。方法:在实验前期获得的截短突变蛋白SEC14-239的基础上,利用over-lap ...
- 张国俊邹谨徐明恺周隽逸张惠文
- 文献传递
- 纳豆激酶基因的克隆表达以及活性分析被引量：3
- 2012年
- 应用PCR的方法从分泌纳豆激酶的枯草杆菌基因组DNA中扩增得到全长为1056bp的前导肽+成熟肽纳豆激酶原基因(pro-NK),并构建了纳豆激酶的重组表达载体pET-28a-pro-NK;转化E.coliBL21(DE3)后,在IPTG的诱导下实现了纳豆激酶的高效表达,经SDS-PAGE显示在28ku处有一特异带;表达产物经Ni2+亲和层析纯化后,纤维平板法测得的纳豆激酶的比活力为34245.1IU/mg;纯蛋白经透析和冷冻干燥处理后,纳豆激酶的比活力为16271.5IU/mg;在此基础上,对冻干保护剂的添加进行优化,最佳保护效果为甘露醇与纳豆激酶质量比为1:2,可比不加保护剂时比活力提高了30.9%。这可为基因工程方法生产纳豆激酶纯品,稳定其活性便于贮运,并将其开发成为临床药物提供技术参考。
- 谭焕波张国俊徐明恺张惠文
- 关键词：纳豆激酶克隆表达活性分析冷冻干燥
- 活性增强的SEC2截短突变蛋白的构建及其生物活性研究
- 目的:为得到一种分子量较小和超抗原活性高的改构SEC2分子,通过基因工程手段获得超抗原活性增强的截短突变蛋白SEC14-239M.方法;在实验前期获得的截短突变蛋白SEC 14-239的基础上,利用over-lap PC...
- 张国俊邹谨徐明恺周隽逸张惠文
- 豚鼠和BALB/c小鼠对SEC2超抗原作用敏感性的比较
- 2015年
- 比较分析豚鼠和BALB/c小鼠对金黄色葡萄球菌肠毒素C2(Staphylococcus enterotoxin C2,SEC2)超抗原作用的敏感性差异,确定更适合用于SEC2超抗原作用研究的模式动物。体外试验,以梯度浓度SEC2刺激豚鼠和BALB/c小鼠的外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和脾淋巴细胞,MTS染色法检测其增殖;体内实验,SEC2腹腔注射豚鼠和BALB/c小鼠,每隔3 d检测豚鼠和小鼠的体重、体温变化情况;每隔7 d采血,ELISA法检测血清中IL-4、IFN-γ、IL-2和TNF-α分泌水平。不同浓度的SEC2均能刺激小鼠的PBMC和脾淋巴细胞显著增殖(P<0.05),而对豚鼠的PBMC和脾淋巴细胞无效。腹腔注射后,SEC2组和对照组豚鼠和小鼠的体温均无显著性变化(P>0.05);豚鼠SEC2组体重在给药后期显著低于对照组(P<0.05),小鼠的SEC2组体重在给药后第3-30天均显著低于对照组(P<0.05),此后恢复到正常水平(P>0.05);给药后各时间点,小鼠的SEC2组血清中细胞因子IL-4、IFN-γ、IL-2和TNF-α的分泌水平均显著高于对照组(P<0.05),而豚鼠的SEC2组血清中细胞因子分泌水平与对照组无显著性差异(P>0.05)。与豚鼠相比,BALB/c小鼠对SEC2超抗原活性的敏感程度更高,且表现出很好的剂量和时间效应,适合作为模式动物用于SEC2的超抗原活性研究。
- 孟北乾张惠文张国俊徐明恺李旭张成刚
- 关键词：小鼠金黄色葡萄球菌肠毒素C2
- 活性增强的SEC2截短突变蛋白的构建及其生物活性研究被引量：1
- 2012年
- 目的:分析金黄色葡萄球菌肠毒素C2的截短蛋白SEC14-239中7和9位氨基酸对其超抗原和抗肿瘤活性的影响。方法:利用基因工程方法将SEC14-239中7和9位Thr和Gly分别替换为Leu和Glu后,获得截短突变蛋白SEC14-239M。体外细胞学实验对其超抗原活性和抗肿瘤活性进行分析。结果:突变蛋白SEC14-239M体外刺激小鼠T细胞增值活性较SEC14-239显著增强(P<0.05),与未截短的SEC2相当(P>0.05)。在相同剂量条件下,SEC14-239M诱导的抗肿瘤活性尽管低于SEC2(P<0.01),但要显著高于SEC14-239(P<0.05)。结论:截短蛋白SEC14-239的第7和9位氨基酸突变后能显著增强其超抗原活性和抗肿瘤活性,但二者增强程度有差异。这一结果说明以定点突变改造SEC2截短体的活性是可行的,同时也暗示超抗原的T细胞增殖和诱导肿瘤细胞抑制并不完全关联。
- 张国俊邹谨徐明恺周隽逸张惠文
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素C2抑瘤活性
