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张志谦: 作品数：39 被引量：115H指数：6; 供职机构：北京大学临床肿瘤学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>

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食管癌组织中HSP70的基因表达及其多肽复合物的分离: 2006年; 目的研究食管癌组织中HSP70的表达情况,探索HSP70-多肽复合物分离的可行性途径。方法采用人HSP70基因探针P17与人食管癌组织中提取的RNA进行Northern杂交;用亲和柱层析法分离HSP70-多肽复合物。结果癌组织提取物出现了比正常组织较强的杂交信号,从食管癌组织中提取蛋白质,经一系列层析柱(Con-Asepharose、ADP-agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱),分离到HSP70-多肽复合物。结论HSP70基因在食管癌组织中的高表达,为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了可行性方法。; 赵安芳高富荣张玉焕李新利陈兰英张志谦; 关键词：HSP70表达 NORTHERN杂交食管癌

生长激素信号肽可诱导重组蛋白外分泌表达被引量：4: 2005年; Signal peptide capable of efficiently directing many protein secretion in mammalian cells is one of the key elements in recombinant protein production,gene therapy and the development of DNA vaccines.In order to explore the possibility of rat growth hormone signal peptide as such an element,a new vector based on the mammalian expression vector pcDNA3 was constructed by employing rat growth hormone(rGH) signal peptide as leading sequence,followed by multiple cloning sites,the myc epitope-tag and 6×his purification tag in the expression cassette.The vector was validated by successfully expressing and secretion of chick MMP-2 C-terminal PEX domain,a potential angiogenesis inhibitor,and tandem peptide repeats of myc epitope-tag in COS-7 cells.These results suggest that rat growth hormone signal peptide is effective in the mediation of recombinant protein expression and secretion,and this vector provides a new tool for universal cloning and secretion of exogenous proteins in mammalian cells.; 张志谦李金萍胡颖; 关键词：重组蛋白生长激素信号肽 SIGNAL SIGNAL PCDNA3 COS-7

基质金属蛋白酶9及其复合物在乳腺癌患者尿中的表达被引量：5: 2003年; 目的　探讨基质金属蛋白酶 9(MMP 9)及其复合物在乳腺癌患者尿中表达的临床意义。　方法　采用明胶酶电泳法、Western印迹法 ,观察 97例乳腺癌患者、4 1例乳腺良性疾病患者和 6 0例正常人尿中MMP 9及其复合物的表达状况。　结果　乳腺癌患者MMP 9及其复合物表达率分别为76 2 9%、6 4 95 % ;乳腺良性疾病患者为 4 6 34%、4 3 90 % ;正常人为 2 3 33%、2 3 33%。乳腺癌患者MMP 9及其复合物表达水平与乳腺良性疾病患者和正常人比较 ,差异有非常显著性意义 (χ2 =7 4 5 6 ,P <0 0 1)。乳腺癌患者尿中MMP 9及其复合物表达与淋巴结转移有关 (χ2 =5 2 0 6 ,P <0 0 5 ) ,与肿瘤大小、TNM分期、年龄、绝经前后、雌激素受体表达无关。　结论　尿中MMP 9及其复合物表达对判定乳腺癌淋巴结的转移具有重要意义。对乳腺癌早期预防及普查可能具有重要意义。; 申哲洙赵威顾晋张志谦严立; 关键词：基质金属蛋白酶9 复合物乳腺癌

利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9系统敲减α2δ1对人肝癌细胞系Hep-12干性的影响: 2020年; 目的通过规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统敲减人肝癌细胞系Hep12中电压依赖性钙离子通道α2δ1的表达,观察α2δ1敲减后对肝癌细胞干性的影响。方法设计3对靶向α2δ1的向导(sgRNA),长度为20 bp,构建到lenti CRISPRv2-puro载体上,然后在体外检测sgRNA切割活性,利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒,将包装好的病毒感染Hep-12细胞,2 d后加入嘌呤霉素筛选。利用Western blotting验证α2δ1的敲减效果和干性相关基因的表达。通过成球实验检测其体外自我更新能力的变化。结果测序结果显示,sgRNA成功插入载体质粒;体外切割实验显示,3条sgRNA均有切割活性;Western blotting结果显示,α2δ1基因的表达显著降低,干性相关基因B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1(BMI1)和Nanog的表达显著被抑制;无血清培养基成球实验结果表明,敲减α2δ1导致Hep-12细胞的体外自我更新能力减弱。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建敲除α2δ1基因的Hep-12细胞系;敲除α2δ1基因后能抑制Hep-12细胞肿瘤干细胞样特性。; 何琦赵威张志谦; 关键词：肝癌干细胞免疫印迹法

GST-snail融合蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备: 2006年; 目的制备snail多克隆抗体,为深入研究其功能和探讨其与肿瘤等疾病的相关性提供工具。方法PCR扩增编码人snail 264个氨基酸的cDNA全长片段,DNA重组入原核表达质粒pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基--βD-硫代半糖苷(IPTG)诱导表达GST/Snail融合蛋白。经电泳纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔,制备抗血清。通过ELISA、免疫荧光和免疫印迹法鉴定血清特异性和效价。结果成功构建了pGEX-4T-1/snail原核表达载体,转化BL21后可高效表达融合蛋白GST-snail,免疫产生的snail多抗可特异检测snail真核表达载体转染COS-7细胞后snail的表达及定位情况。结论获得了效价和特异性都良好的snail抗体,适合对snail的检测应用。; 王冰晶张志谦; 关键词：SNAIL 融合蛋白多克隆抗体免疫荧光染色免疫印迹法

Tet-on慢病毒调控系统的构建及其调控作用被引量：1: 2011年; 目的构建四环素诱导基因表达的3代慢病毒系统,为慢病毒介导的基因治疗提供实验依据。方法将四环素调控的转录激活因子(rtTA和M2rtTA)分别克隆入带有新霉素(neo)筛选标记的慢病毒载体中,得到pELNS-rtTA-IRES-Neo和pELNS-M2rtTA-IRES-Neo质粒,将四环素顺式应答作用元件(TETO和TREpitt)和绿色荧光蛋白(GFP)克隆入带有杀稻瘟素(blasticidin)筛选标记的慢病毒载体中,得到plenti6-TETO-GFP和plenti6-TREpitt-GFP质粒,将pELNS-rtTA-IRES-Neo与plenti6-TETO-GFP和pELNS-M2rtTA-IRES-Neo与plenti6-TREpitt-GFP分别以10∶1共同转染293细胞,用四环素类似物强力霉素(Dox)诱导GFP基因表达,48h后检测GFP表达。结果成功构建了1代四环素调控体系pELNS-rtTA-IRES-Neo和plenti6-TETO-GFP重组质粒。共转染293细胞后,Dox诱导组的细胞有较强的GFP表达,阳性率约为90%,而未加Dox组细胞GFP阳性表达率约为30%。成功构建了2代四环素调控体系pELNS-M2rtTA-IRES-Neo和plenti6-TREpitt-GFP重组质粒。共转染293细胞后,Dox诱导组的细胞有较强的GFP表达,阳性率约为95%,而未加Dox组细胞未见GFP表达。结论 2代四环素调控体系3代慢病毒系统可以高效诱导目的基因表达,且目的基因背景表达值低。; 韩海勃赵威张志谦; 关键词：四环素慢病毒基因调控基因工程基因克隆

检测妇女尿中MMP2、MMP9、及MMP9-NGAL的表达对筛查早期乳腺癌病人的临床意义: ＜正＞目的：探讨妇女尿中 MMP-2、MMP-9及 MMP-9/NGAL 复合物的表达,对乳腺癌高危发病的妇女是否具有普查筛选意义。方法：采用明胶酶底物电泳法、Western blot 方法,检测正常女性（n=60）、乳...; 申哲洙顾晋赵威张志谦; 文献传递

离子通道蛋白X是肝癌肿瘤起始细胞的标志物和治疗分子靶点: 目的肿瘤起始细胞(或称为肿瘤干细胞)的存在被认为是肿瘤复发转移、耐受常规治疗的根本原因.对于这类细胞的分离鉴定和研发针对性的治疗用生物技术类药物是肿瘤学研究领域亟待解决的关键科学问题.本研究对离子通道蛋白X是肝癌肿瘤起...; 张志谦赵威王力民韩海勃; 关键词：肝癌标志物分子靶标

质粒载体介导捕获转录因子抑制基因表达新方法研究: 目的:许多阻抑基因表达的新方法如反义技术、Ribozyme 技术及转录因子诱饵技术等近年来被提出、测试,但这些技术多利用人工合成的寡聚核苷酸,有许多不易克服的缺点:（1）不稳定,易降解;（2）不易进入细胞内;（3）作用不...; 张志谦江世文胡颖; 文献传递

RKIP蛋白在多个人肺癌细胞系中的表达下调被引量：19: 2007年; 目的检测肺癌细胞系中RKIP的表达情况,探讨其与肺癌细胞侵袭、转移的关系。方法RT-PCR法检测多个人肺癌细胞系中RKIP的表达情况,构建表达人RKIP的融合蛋白,纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。ELISA鉴定血清特异抗体效价,Western blot鉴定血清特异抗体并检测肺癌细胞系中RKIP表达。结果成功构建表达人RKIP的融合蛋白,制备的多抗效价达到106,可特异检测细胞内RKIP表达;有转移性的3个肺癌细胞系中RKIP表达明显下调,且在转移性较高的A549细胞中下调更明显。结论获得了效价和特异性都良好的RKIP多抗,适合应用于RKIP的检测。RKIP表达下调与肺癌细胞侵袭、转移有关,有可能成为肺癌治疗的靶点。; 韩海勃张志谦赵威; 关键词：RKIP 多克隆抗体肺癌

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