朱远茂
- 作品数：108 被引量：332H指数：11
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 我国牛副流感病毒3型山东分离株的研究
- 近年来牛呼吸道疾病综合征严重威胁着我国养牛业的发展,造成很大的经济损失。牛副流感病毒3型是引起牛呼吸道疾病综合征的主要病毒性病原之一。本实验室从我国山东省采集的牛鼻腔棉拭子中分离出4株牛副流感病毒3型,开展了病毒分离鉴定...
- 朱远茂薛飞蔡红董秀梅吕闯史鸿飞严昊马磊王姝王雪枝
- 关键词：全基因组
- 文献传递
- 牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立被引量：17
- 2006年
- 经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向插入pET32a表达载体中,转化表达菌BL21。SDS-PAGE电泳分析表明,诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在,大小约为29.2 ku,与预测值相符。亲和纯化后重组蛋白浓度为2.000 mg/mL,纯度为79.2%。间接ELISA检测证明,表达蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为50μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,阳性标准定为S/P>0.395。交叉试验表明对牛流热(BEV)、牛肺疫(CBPP)、牛病毒性腹泻(BVD)、牛结核(BTB)、牛副结核(PBB)以及牛赤羽病(BAD)等其它6种疾病阳性血清不发生交叉反应。与中和试验相比较,特异性、敏感性和符合率分别为83.3%、90.9%和88.9%;与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为92%、92.7%和92.5%。上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性,显示了良好的应用前景。
- 李兆利薛飞朱远茂王延辉
- 关键词：IBRVGB基因纯化间接ELISA
- 牛传染性鼻气管炎病毒重组毒株、其构建方法及应用
- 本发明公开了一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组转移载体，其构建方法。本发明还公开了用该重组转移载体与IBRV基因组DNA共转染后所得到的重组毒株IBRV46。本发明重组转移载体中gE基因包括起始密码子ATG在内的1...
- 薛飞朱远茂童光志王延辉
- 文献传递
- 牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白研究进展被引量：9
- 2006年
- 牛传染性鼻气管炎病毒能引起牛多系统感染,是导致养牛业重大经济损失的一种重要病原。该病毒是有囊膜的双股DNA病毒,病毒囊膜蛋白在病毒致病中发挥了重要作用,其中gB蛋白对病毒的吸附、侵入、复制和细胞间扩散是必需的,可刺激机体产生大量的中和抗体。对gB蛋白的研究不仅是理解病毒分子生物学功能特征的需要,而且在临床诊断和疾病预防中也具有重要意义。文章就gB蛋白的结构特征、生物学功能以及在免疫学和诊断方面的研究做了综述,并对上述方面进行了展望。
- 李兆利薛飞朱远茂
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒免疫学
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的截短表达与鉴定被引量：10
- 2008年
- 利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)BA株接种MDBK细胞,提取病毒RNA。参照已发表的BVDV基因组序列,利用Oligo 6生物学软件设计扩增E2基因的1对引物,引入酶切位点并去掉E2蛋白的跨膜区及疏水区。通过RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E2基因片段,克隆到pMD18-T载体上,酶切并测序鉴定。然后将目的片段进一步定向克隆到pET30a表达载体,转化BL21表达菌。取转化菌培养,并用IPTG诱导,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,用免疫印迹与间接ELISA检测表明纯化的重组蛋白具有良好的免疫原性,为牛病毒性腹泻病毒诊断试剂的研制奠定了基础。
- 李娇薛飞朱远茂祖立闯
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白截短表达
- 马传贫驴白细胞弱毒疫苗株跨膜蛋白主要免疫决定区基因的克隆与表达被引量：2
- 2003年
- 从感染驴白细胞的马传贫驴白细胞弱毒疫苗株前病毒DNA中克隆了编码跨膜蛋白主要免疫决定区 (TMIR)的基因 ,并在大肠杆菌中进行了表达。所表达的融合蛋白有一部分是可溶的 ,其氨基端带有 6个组氨酸的标签 ,因此可以用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下进行纯化。在间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)和免疫印迹试验中 ,重组的TMIR蛋白可与马传贫阳性血清样品发生反应 ,而与健康马血清无任何反应。这表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性 ,可用于马传贫弱毒疫苗株在体内外复制、接种马体内免疫应答及马传贫诊断的研究。
- 薛飞贾斌朱远茂杨建德王晓钧相文华赵立平吕晓玲沈荣显
- 关键词：马传染性贫血间接ELISA免疫印迹试验
- 牛病毒性腹泻病毒RNA 5'端非编码区的检测与遗传分析研究
- 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)可引起以牛发热、粘膜糜烂溃疡、白细胞减少、腹泻、咳嗽及怀孕母牛流产或产出畸形胎儿为主要特征的一种传染病,呈世界性分布。目前BVDV是我国养牛业面临的一个
- 任宪刚薛飞李娇朱远茂祖立闯冯军科
- 文献传递
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：3
- 2013年
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)糖蛋白E2单克隆抗体(MAb),利用原核表达并且纯化的重组糖蛋白E2(rE2)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BVDV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗E2特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4E3与1G11。用4E3与1G11杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rE2及BVDV包被的ELISA测得的效价分别是6.21×106和6.83×105及6.83×105和7.5×104。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定4E3与1G11均为IgM/κ。特异性试验表明4E3与1G11这2株MAb均不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型反应;其中4E3不与猪瘟病毒反应,而1G11则可与猪瘟病毒发生交叉反应,这种反应特性可试用于BVDV与猪瘟病毒的鉴别诊断。所制备的4E3与1G11 MAb可以用于BVDV抗原的检测,为建立检测BVDV E2蛋白血清抗体的ELISA奠定了基础。
- 王姝朱远茂蔡红马磊史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2单克隆抗体IGM
- 猪病毒性腹泻二联疫苗
- 马思奇佟有恩冯力王明李伟杰周金法于文涛魏凤祥孟宪松朱远茂
- 该项目属预防兽医学领域，包括猪传染性胃肠炎(TGE)和猪流行性腹泻(PED)二联灭活疫苗与弱毒疫苗。是预防猪病毒性腹泻的主要手段，配套使用的系列疫苗，主要用于妊娠母猪的被动免疫以保护仔猪，也用于主动免疫保护不同年龄的猪只...
- 关键词：
- 关键词：病毒性腹泻二联灭活苗预防兽医学
- 牛传染性鼻气管炎病毒重组gD蛋白间接ELISA方法的建立及应用被引量：19
- 2008年
- 用大肠杆菌表达的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组gD蛋白纯化后作为包被抗原,建立了检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体的间接ELISA方法。交叉反应试验表明,该重组抗原与其它常见的5种牛病阳性血清不发生交叉反应;阻断反应试验表明,IBRV病毒悬液能在很大程度上阻断重组抗原与阳性血清的反应,而对阴性血清没有明显影响。在重复性试验中,批内重复的变异系数小于5%,批间重复的变异系数小于15%。与中和试验相比较,符合率、敏感性和特异性分别为84.1%、85.0%和83.4%。应用该诊断方法和本实验室已建立的以IBRV全病毒作为包被抗原的ELISA诊断方法,同时检测了采集于国内11个省份的2012份血清样本,IBRVgD-ELISA检测的平均阳性率为46.0%(926/2012),而且相对于IBRV全病毒ELISA诊断方法的符合率、敏感性和特异性分别为91.9%、94.2%和90.2%。本研究所建立的IBRVgD-ELISA具有良好的敏感性和特异性,为国内IBR流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。
- 祖立闯朱远茂王延辉辛九庆李娇任宪刚冯军科薛飞
- 关键词：牛传染性鼻气管炎间接ELISA
