杨焕良
- 作品数：97 被引量：395H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家重点基础研究发展计划哈尔滨市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 具有HI活性的H1亚型流感病毒特异性单克隆抗体的制备与应用
- 2010年
- 为了制备具有HI活性的HI亚型流感病毒特异性单克隆抗体(MAb),本研究以H1N1亚型猪流感病毒(SIV)株A/Swine/Guangdong/718/01(H1N1)为免疫原,免疫BALB/c小鼠,经常规细胞融合后,血凝抑制(HI)方法进行检测,融合细胞经稀释克隆纯化后,获得11株能稳定分泌抗血凝素特异性HI MAb的杂交瘤细胞株。鉴定表明,所获MAb与其他具有血凝活性的病毒以及其他14个HA亚型的流感病毒均不具有HI交叉反应,表明这11株MAb均具有良好的流感病毒亚型特异性。其中A6F、2BBF和2BB与其他H1亚型流感病毒分离株的HI试验证实我国不同地区分离株之间的抗原性存在一定差异。11株MAb对H1SIV抗原的HI试验结果显示其HI效价有明显差异。叠加实验表明这些MAb分别识别HA抗原的不同表位。间接免疫荧光试验表明,2BBF、8HB、1DH、7FC和2BB均可与2009年流行H1N1病毒A/California/04/2009HA抗原发生特异性反应。这些MAb特异性的研制为H1亚型流感病毒的疫情病原学快速诊断以及病毒抗原性变异的相关研究提供了物质基础。
- 李印邓国华王桂芹杨焕良乔传玲陈化兰
- 关键词：血凝抑制单克隆抗体间接免疫荧光
- 甲型H1N1流感病毒A/Sichuan/01/2009株反向遗传操作系统的建立被引量：2
- 2011年
- 选取甲型H1N1流感病毒A/Sichuan/01/2009(SC/01)株为亲本毒株,构建了SC/01的八质粒反向遗传操作系统,并获得了甲型H1N1流感病毒救获株Rescue-A/Sichuan/01/2009(R-SC/01)。对救获毒株R-SC/01进行全基因序列测定,证明救获毒株与亲本毒株的核苷酸序列完全一致。R-SC/01的小鼠半数感染量及受体结合特性与亲本野毒SC/01一致。SC/01反向遗传操作系统的成功建立为进一步开展甲型H1N1流感病毒的生物学特性研究,特别是跨宿主传播机制研究奠定了基础。
- 张乾义张莹胡永浩娄慧姜永萍李雁冰田国斌邓国华施建忠关云涛杨焕良陈化兰
- 关键词：甲型H1N1流感病毒
- 高致病性禽流感防治技术
- 童光志刘明张云刘春国李海燕乔传玲杨焕良王君伟华育平崔尚金李书华郭绍林孙刚崔玉东朱战波王靖飞张毅吴春艳
- 该课题建立了能在细胞上繁殖、免疫原性好、生物安全性高的重组疫苗株rH5N3和配套鉴别诊断ELISA方法。建立了可捕捉鸭、鹅、猪血清中H5、H7亚型流感病毒抗体的酶联免疫吸附实验（ELISA）监测技术组装试剂盒；鸭、鹅、猪...
- 关键词：
- 关键词：高致病性禽流感
- 流感疫苗研究进展
- 1概况 流行性感冒病毒(简称流感病毒)属正粘病毒科,根据其核蛋白(NP)和基质蛋白(M)的抗原性的不同,流感病毒可分为A、B、C 3型。3个型没有共同抗原,都能感染人;但A型流感病毒感染范围更广。家畜和家禽的流感都是由流...
- 杨焕良李海燕辛晓光于康震
- 文献传递
- 部分省市猪群猪流感的血清学调查及猪流感病毒的分离与鉴定被引量：128
- 2003年
- 对黑龙江、吉林、辽宁、安徽、山东、内蒙、河南、河北、江苏、安徽、浙江、湖北、福建、广东、海南、上海等省、市猪群进行了猪流感的血清学和病原学调查研究。从 130 6份猪鼻棉拭子样品和死亡猪肺、气管样品中分离到 39株H3N2亚型猪流感病毒 ,12株 H1亚型猪流感病毒及其它亚型猪流感病毒 ,病毒粒子在透射电镜下呈现典型的正粘病毒特征 ,有囊膜和纤突 ,多为椭圆形、圆形、或杆形 ,直径约 80～ 12 0 nm。对 1997- 2 0 0 1年 3895份猪血清的血清学调查结果表明 ,近年中国多个地区猪群存在抗SWTN77(H1)、SWCO77(H3)、DKAT6 9(H1)、TKUK6 3(H3)流感病毒抗体 ;1998年来自河北的猪血清中抗 SWTN77阳性率高达 33.3% ;1999年来自内蒙的猪血清中抗 TKUK6 3和SWCO77阳性率分别为 13.3%和 2 6 .7% ;2 0 0 0- 2 0 0 1年调查的所有省市的猪群中均存在抗SWCO77抗体 ,阳性率从 3.2 %～ 10 0 %。说明近年我国猪群中
- 李海燕于康震辛晓光李雁冰蔡雪辉杨焕良毕英佐王自振
- 关键词：猪群猪流感血清学调查流感病毒
- 欧亚类禽型H1N1猪流感病毒HA蛋白的表达及免疫原性评估被引量：4
- 2019年
- 【目的】表达欧亚类禽型(eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)的血凝素(HA)蛋白,并对其免疫原性进行测定。【方法】利用RT-PCR技术扩增病毒A/swine/Zhejiang/245/2013(H1N1)(ZJ245)的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),将其转染293T细胞,采用间接免疫荧光(IFA)检测和Western blot检测HA蛋白在体外的表达;将重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)经肌肉注射途径、以100μg/只剂量免疫16只6周龄BALB/c小鼠(I组和II组),间隔3周后进行加强免疫(二免);同等数量的小鼠以相同方式注射100μL无菌PBS作为非免疫对照组(III组和IV组)。首免和二免每周采血,分别采用血凝抑制(HI)试验和病毒中和(VN)试验两种方法测定不同类型的血清抗体效价;二免2周后,其中两组小鼠(I组和III组)用50μL(106.0EID50)的ZJ245病毒经滴鼻感染途径进行攻毒,另外两组(II组和IV组)用A/swine/Heilongjiang/44/2009(H1N1)(HLJ44)病毒进行攻毒。攻毒后14 d内每天观察小鼠的临床症状、统计发病与死亡情况,且每天称量小鼠体重,在体重下降比率超过25%时判定为小鼠死亡。攻毒后第3天,每组随机剖杀3只小鼠,分别采集脑、鼻甲、肺、脾和肾等脏器,匀浆处理后通过接种10日龄的非免疫鸡胚测定脏器的病毒含量。通过小鼠体重变化以及脏器滴定的病毒含量评估重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫保护效果。【结果】经酶切鉴定和测序验证表明ZJ245的HA基因的已正确克隆至真核表达质粒p CAGGS中获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),经体外转染293T细胞后,IFA和Western blot证实了病毒的HA蛋白能够正确表达,并具有良好的生物学活性;小鼠的免疫与攻毒试验结果表明,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)首免后一周可检测到针对同源病毒ZJ245的低水平HI和VN抗体,加强免疫后抗体水平明显升高,HI抗体达到76.88、VN抗体达到152.5;同时针对异源病毒HLJ44也产生了较低水平的HI和VN
- 贾云慧许程志隋金钰吴运谱许榜丰陈艳杨焕良乔传玲陈化兰
- 关键词：HA蛋白重组质粒DNA疫苗
- 猪流感病毒NP基因重组复制缺陷型腺病毒的构建与表达被引量：1
- 2010年
- 以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆至质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-NP-EGFP。利用脂质体转染法将穿梭质粒pDC315-NP-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选到重组腺病毒rAd-NP-EGFP。经PCR和Western blotting鉴定,结果表明NP基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物学活性。重组腺病毒rAd-NP-EGFP经增殖、纯化后其TCID50可达1.26×1010/mL,为进一步研究该重组病毒的免疫原性奠定了基础。
- 展小过乔传玲陈艳杨焕良孔维吴运谱辛晓光陈化兰
- 关键词：猪流感病毒NP基因重组腺病毒
- 猪流感抗体间接ELISA诊断方法的建立
- 猪流感(SI)即猪流行性感冒,是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。猪感染流感病毒后,一般表现为突然发生、迅速传播,一般不引起死亡并可快速康复,更多见与其它疫病并发或继发感染使病情复杂化、严重化,导致猪的...
- 陈艳辛晓光杨焕良李婷李海燕乔传玲陈化兰
- 文献传递
- 鸭、鹅、猪H5、H7亚型和A型流感病毒通用型抗体检测力法的研究
- 李海燕王君伟杨焕良马波陈艳乔传玲辛晓光陈化兰
- 以杆状病毒为表达载体，表达了禽流感病毒的核蛋白基因，与流感病毒核蛋白具有相同的生物活性。重组病毒表达产物与流感病毒抗血清作免疫琼脂双向扩散试验，均出现明显清晰的沉淀线，与全病毒琼扩抗原出的沉淀线完全吻合。用重组杆状病毒的...
- 关键词：
- 关键词：流感病毒抗体检测
- 猪流感抗体间接ELISA诊断方法的建立
- 猪流感病毒(SIV)感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯SIV,纯化的 SIV经NP-40处理并反复冻融,作为SI间接ELISA抗原,建立了间接ELISA诊断方法．对29份HI检测 SI为阴性血清的...
- 陈艳辛晓光杨焕良李婷李海燕乔传玲陈化兰
- 文献传递
