洪亦眉
- 作品数：8 被引量：87H指数：6
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- 雷公藤甲素干预白细胞介素13诱导足细胞损伤的作用研究
- 足细胞是微小病变肾病(MCD)和局灶节段肾小球硬化(FSGS)肾组织病变形成的主要受损靶细胞。许多研究表明，T细胞功能异常，Th2细胞产生的细胞因子(IL-4，IL-13等)在FSGS和MCD病变的发生发展中起了重要的作...
- 洪亦眉
- 关键词：足细胞雷公藤甲素蛋白尿白细胞介素
- 文献传递
- 雷公藤甲素干预C5b-9诱导足细胞损伤的体外研究被引量：36
- 2009年
- 目的：体外观察雷公藤甲素对膜攻击复合物C5b-9介导的足细胞损伤的影响,探讨雷公藤甲素治疗膜性肾病的疗效机制。方法：以纯化的C5b6及C7C9体外组装C5b-9,建立足细胞亚溶破模型。免疫荧光染色分析C5b-9对足细胞骨架相关蛋白F-actin表达和分布的影响;在观察雷公藤甲素对C5b-9导致的足细胞损伤的治疗机制研究中,免疫荧光观察和流式细胞仪定量分析雷公藤甲素对C5b-9在足细胞膜上组装和活性的影响。并进一步在C5b-9组装完成后加入雷公藤甲素,观察雷公藤甲素对C5b-9诱导的足细胞内活性氧（ROS）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的影响。流式细胞仪分析荧光探针CM-H2DCFDA标记的细胞内ROS,MAPK信号通路的活性采用W estern b lot检测p-38,ERK 1/2和JNK MAPK磷酸化水平,以及MAPK信号通路选择性阻断剂SB202190,U0126和SP600125对C5b-9作用的影响。结果：免疫荧光和LDH释放试验显示C5b-9在足细胞膜组装成功,亚溶解剂量C5b-9对足细胞膜完整性没有明显影响,但可呈时间依赖性的破坏足细胞骨架结构,表现为细胞骨架的极性消失,排列紊乱,部分足细胞F-actin的丝状结构完全消失。C5b-9可诱导足细胞内ROS的明显增加,激活p-38 MAPK信号通路,但C5b-9对ERK MAPK和JNK MAPK信号通路没有明显的影响。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）、p-38 MAPK通路特异性抑制剂SB202190均能够拮抗C5b-9对足细胞的损伤,而ERK MAPK和JNKMAPK通路抑制剂U0126和sp600125对C5b-9诱导的足细胞损伤没有明显的保护作用。雷公藤甲素（10 ng/m l）对C5b-9复合物在足细胞膜上组装量和活性没有明显的影响。当C5b-9在足细胞膜上组装完成后加入雷公藤甲素,雷公藤甲素对C5b-9诱导的细胞内ROS的产生没有明显的抑制作用,但能够有效遏制p-38 MAPK信号通路的活化,p-38 MAPK的磷酸化水平显著降低。结论：雷公藤甲素的疗效机制除了免疫抑制和抗炎
- 陈朝红刘志红洪亦眉秦卫松张明超曾彩虹黎磊石
- 雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ诱导足细胞损伤的保护作用及其机制研究被引量：20
- 2010年
- 目的:观察雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导足细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:免疫荧光染色分析足细胞骨架肌动蛋白(F-actin)和细胞间连接蛋白1(ZO-1)表达和分布;流式细胞仪分析荧光探针CM-H2DCFDA标记的细胞内活性氧(ROS);Western blot检测p-38,细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和C-Jun氨基端激酶(JNK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平。结果:AngⅡ呈剂量依赖性破坏足细胞骨架结构和细胞间连接,表现为F-actin在胞质中的应力纤维解聚,F-actin的边聚。细胞间连接的断裂,细胞皱缩。雷公藤甲素呈剂量依赖性的拮抗AngⅡ诱导的骨架蛋白解聚和细胞间连接分子的重排,10ng/ml雷公藤甲素的作用最为明显。雷公藤甲素对足细胞AngⅡ的1型受体(AT1R)和2型受体(AT2R)的表达无明显影响。细胞内ROS及其下游的MAPK信号通路研究显示,AngⅡ(10-7mol/L)诱导足细胞内ROS的明显增加,激活p-38,ERK和JNK三条MAPK信号通路,雷公藤甲素(10ng/ml)或抗氧化剂N乙酰半胱氨酸(NAC)(10mmol/L)预处理细胞后,能够有效遏制AngⅡ诱导的细胞内ROS的产生,抑制MAPK信号通路的活化。结论:雷公藤甲素可稳定足细胞的骨架结构和细胞间连接,拮抗AngⅡ对足细胞的损伤。雷公藤甲素的上述作用与细胞内ROS及下游的p-38、ERKMAPK信号通路密切相关。雷公藤甲素干预AngⅡ诱导的足细胞损伤可能部分参与了其对肾小球疾病的疗效。
- 陈朝红洪亦眉秦卫松曾彩虹刘志红
- 关键词：雷公藤甲素蛋白尿足细胞
- IL-13诱导足细胞损伤及其作用机制的研究
- 洪亦眉陈朝红郑春霞黎磊石刘志红
- 雷公藤甲素干预白细胞介素13诱导足细胞损伤的作用研究被引量：9
- 2010年
- 目的足细胞骨架及相关蛋白的异常是引起以足细胞损伤为特征的局灶节段肾小球硬化(focal segmental glo-merular sclerosis,FSGS)的原因之一,而雷公藤甲素在FSGS的治疗中有着积极意义。文中旨在观察雷公藤甲素对足细胞的保护和治疗作用,进一步探讨其作用机制。方法以50 ng/ml白细胞介素13(IL-13)诱导小鼠足细胞系(heat-sensitive mousepodocytes,HSMP)建立足细胞损伤模型,保护实验予雷公藤甲素(3 ng/ml)或/和地塞米松(1μmol/L)预处理足细胞30 min,治疗实验则在IL-13作用足细胞24 h后,换雷公藤甲素或(和)地塞米松干预72 h。免疫荧光法分析足细胞骨架相关蛋白F-actin和细胞间连接蛋白ZO-1的变化情况,Western blot方法检测细胞内信号通路STAT6的磷酸化水平。结果足细胞骨架蛋白F-actin和ZO-1的染色结果显示:雷公藤甲素和地塞米松均可明显阻断和治疗IL-13诱导的足细胞损伤,F-actin的表达得以部分恢复,细胞骨架重排,ZO-1表达增强,连续性得以恢复,两者联合使用无明显协同作用。进一步研究表明,雷公藤甲素和地塞米松均可抑制IL-13诱导的足细胞内细胞因子相关的STAT6信号通路的活化,地塞米松的效果更强,而联合用药无明显协同作用。结论雷公藤甲素在体外对IL-13诱导损伤的足细胞有明显的保护和治疗作用,其作用与地塞米松相似。其保护作用可能与其抑制IL-13诱导STAT6信号通路的活化有关,而治疗作用的机制尚待进一步研究。
- 汤天凤洪亦眉陈朝红张明超黎磊石刘志红
- 关键词：白细胞介素13足细胞雷公藤甲素
- 白细胞介素13诱导足细胞损伤及其作用机制被引量：6
- 2009年
- 目的:探讨Th2细胞因子IL-13是否直接介导足细胞损伤,并初步探讨其作用机制。方法:RT-PCR和免疫组化方法检测温度敏感的小鼠足细胞系(HSMP)上IL-13受体的mRNA和蛋白质表达。使用不同浓度(10 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml)的IL-13干预足细胞不同时间(8h、12h、24h),免疫荧光法分析足细胞骨架相关蛋白F-actin和细胞间连接蛋白ZO-1的变化情况。并进一步应用Western blot方法检测细胞内信号通路STAT6的磷酸化水平,探讨IL-13损伤足细胞的作用机制。结果:HSMP上存在IL-13 I型受体mRNA和蛋白质表达。骨架蛋白F-actin和ZO-1的染色结果显示:IL-13可呈剂量和时间依赖性对足细胞造成损伤。50ng/ml IL-13作用24h即可造成足细胞明显损伤。F-actin变细、紊乱,向细胞边缘聚集;ZO-1明显减弱和断裂。进一步的研究还表明,IL-13可诱导足细胞内细胞因子相关的STAT6信号通路的活化。STAT6信号通路特异性抑制剂leflunomide可阻断IL-13对足细胞骨架蛋白结构和细胞间连接蛋白的影响。结论:足细胞表面存在IL-13受体,IL-13可通过与其受体结合损伤足细胞的骨架结构和细胞间连接蛋白。IL-13对足细胞的损伤作用与STAT6信号通路的活化有关。
- 洪亦眉刘志红陈朝红张明超郑春霞黎磊石
- 关键词：白细胞介素13蛋白尿足细胞
- 利用体外培养足细胞针对局灶节段性肾小球硬化患者的循环因子进行检测被引量：13
- 2009年
- 目的:局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)患者蛋白尿的发生与循环中存在某类物质相关。但循环因子的本质,其作用的靶细胞等问题都没有研究清楚。足细胞病变在大量蛋白尿发生中的重要性得到了充分的认识。本研究利用体外培养的分化足细胞作为检测循环因子的靶细胞,探讨了该方法的临床应用,并对循环因子的理化性质及其损伤足细胞的作用机制进行了研究。方法:经肾活检明确诊断的FSGS患者80例和足细胞病(podocytopathy)患者74例作为研究对象,同时选取临床表现为肾病综合征,组织形态学改变为膜性肾病(MN)65例、IgM肾病(IgMN)14例,IgA肾病(IgAN)41例,糖尿病肾病(DN)13例,狼疮性肾炎(LN)23例,系膜增殖性肾炎(MPGN)15例作为疾病对照,患者血清以10%浓度作用足细胞24h,免疫荧光法观察足细胞骨架蛋白F-actin和足细胞膜连接分子(ZO-1)分布变化。同时,取上述患者0.1ml血清注射大鼠,0h、4h、8h、12h和24h分别观察大鼠蛋白尿的产生,验证体外实验结果。阳性血清经灭活去补体,硫酸葡聚糖镁去脂,盐析法去IgG,阳性血清与患者或正常人尿液共孵育,及阳性血清与细胞因子IL-13中和抗体共孵育等不同处理后再作用足细胞,观察F-actin和ZO-1的变化,鉴定循环因子性质;Westernblot检测患者血清对足细胞内细胞因子相关信号通路JAK-STAT6,应激和细胞生存相关信号通路MAPK(p38,ERK,JNK)及骨架蛋白调节信号通路Rho-ROCK的影响,进一步深入研究循环因子对足细胞功能影响的分子机制。结果:13例FSGS患者(16.3%)和9例足细胞病患者(12.2%)的血清可明显破坏足细胞的骨架结构和ZO-1的分布,胞质内F-actin表达减弱,细胞骨架断裂,排列紊乱,部分开始向细胞边缘聚集,形成毛刺样结构,足细胞失去原有的细胞张力,胞体回缩;相邻足细胞的紧密连接消失,ZO-1的连续性破坏,出现断裂,皱褶,分层。其它肾病患者(MN,IgMN,IgAN,DN,LN,MPGN
- 陈朝红刘志红秦卫松张炯洪亦眉张文黎磊石
- 关键词：局灶节段性肾小球硬化足细胞蛋白尿信号通路
- 足细胞损伤的病因和发病机制被引量：13
- 2009年
- 洪亦眉陈朝红
- 关键词：足细胞损伤病因
