潘晓瑜
- 作品数：21 被引量：20H指数：3
- 供职机构：广东食品药品职业学院更多>>
- 发文基金：贵州省科学技术基金贵州省优秀科技教育人才省长资金项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制被引量：7
- 2013年
- 按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo.通过脂质体介导重组表达载体转染HEK293细胞(human embryonic kidney 293 cell)再接种HSV-2.采用实时荧光定量PCR(real-timefluorescent quantitative PCR)技术检测UL27各组的mRNA转录水平,终点滴定法检测细胞上清液中的病毒滴度,四甲基偶氮唑盐(four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,Western印迹法检测蛋白表达效果.结果显示,UL27shRNA75组对UL27基因mRNA表达抑制效果最佳,同时能显著抑制感染细胞的CPE(cytopathic effect,CPE),降低上清液中的病毒感染滴度,提高细胞的生存率,抑制UL27基因的蛋白表达.提示本研究构建的pGPU6/GFP/Neo-UL27表达载体能在细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL27基因表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中复制.
- 吕延成潘晓瑜周丹丹袁俊杰黄畅
- 关键词：RNA干扰
- 分子印迹聚合物在抗肿瘤药物传递系统中的研究进展
- 2023年
- 本文围绕分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymer,MIP)在抗肿瘤药物传递系统(drug delivery system,DDS)中的应用进行综述,介绍了分子聚合物的方法及提高分子印迹聚合物载药量和联合给药的策略,从内源和外源性敏感刺激的角度分析了分子聚合物在抗肿瘤药物传递系统的应用,并指出分子聚合物作为抗肿瘤药物的载体目前仍存在的生物相容性和可降解性问题,展望了分子聚合物在抗肿瘤药物传递系统应用中的前景及发展方向。
- 潘晓瑜宋其芳朱俊访
- 关键词：分子印迹聚合物抗肿瘤药物药物传递系统
- UL54和UL29基因干扰对HSV-2复制的影响被引量：1
- 2014年
- 目的利用RNAi技术同时沉默Ⅱ型单纯疱疹病毒的UL54和UL29基因,探讨双基因干扰对HSV-2复制的影响。方法采用pGPU6/GFP/Neo质粒分别构建UL54、UL29基因的shRNA重组表达质粒,单独或同时转染HEK293细胞,通过实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法检测UL54、UL29基因的表达,终点滴定法检测培养细胞上清液中病毒感染滴度;MTT法测定细胞的存活效率。结果转染后48h后,与空白组相比,各干扰组均可不同程度降低上清液中的病毒滴度,提高细胞存活率,降低目的基因mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。与单干扰组相比,双基因干扰组能更有效降低病毒滴度并提高细胞存活率(P<0.01),增加了对UL54和UL29基因mRNA的抑制率,降低了蛋白的表达(P<0.01)。结论 pGPU6/GFP/Neo-UL54、pGPU6/GFP/Neo-UL29重组表达质粒同时转染细胞可抑制HSV-2的复制,采用双基因干扰比单独基因干扰具有更高的效率。
- 吕延成潘晓瑜黄畅丁娟
- 关键词：短发夹RNA
- 超滤和分子印迹技术联用分离延胡索生物碱
- 2022年
- 目的利用超膜分离技术和分子印迹技术对延胡索生物碱进行分离。方法以生物碱透过率和高分子截留率为指标,筛选超滤膜、操作压力、料液温度和过膜速率等因素,使用紫外引发聚合制备分子印迹膜,研究其对超滤液中延胡索生物碱的分离性能。结果确定以5μm微滤膜抽滤,在料液温度为29.5℃,操作压力为0.37 MPa,过膜速率为419 mL·min^(-1),使用截留分子量为5000的超滤膜超滤,超滤液比原提取液生物碱含量提高了23%。结论超滤结合分子印迹技术可有效去除延胡索提取液中大分子杂质,提高有效成分含量。
- 朱俊访李博潘晓瑜杨悦
- 关键词：延胡索生物碱膜分离分子印迹技术
- UL29shRNA表达质粒与ACV对HSV-2抑制效果的比较
- 2016年
- 目的:通过将筛选的UL29shRNA表达质粒与抗病毒药物阿昔洛韦(ACV)的抗病毒效果及细胞毒性进行比较,探讨RNA干扰在细胞水平上对HSV-2病毒的抑制效果。方法:将筛选的干扰效果最好的表达质粒UL29-shRNA1641作为RNA干扰组与抗病毒药ACV进行对HSV-2的抑制效果的比较研究,分为RNAi组、ACV组和RNAi+ACV组。采用实时荧光定量PCR检测UL29mRNA的相对表达量,Karber法检测细胞上清液中病毒滴度的变化、蛋白印迹法(Western blot)检测ICP8的相对表达量,对RNAi与ACV抑制效果进行比较,通过WST-1(Water-Soluble Tetrazolium-1)法对质粒转染复合物(质粒+转染试剂)和ACV的细胞毒性进行比较。结果:RT-PCR检测三组mRNA的相对表达水平,其中RNAi组UL29基因相对表达量高于ACV组(P<0.05);RNAi+ACV组UL29基因相对表达量明显低于RNAi组和ACV组(P<0.05)。Karber法检测三组细胞上清液病毒滴度表明,RNAi组病毒滴度高于ACV组(P<0.05),RNAi+ACV组的病变病毒滴度明显低于RNAi组和ACV组(P<0.05)。Western blot检测ICP8相对表达量,ACV组的ICP8(UL29编码的单链DNA结合蛋白,主要作用是在HSV-2 DNA复制过程中与复制叉产生了单链DNA结合,防止其重新配对形成ds DNA或被核酸酶降解)相对表达量比RNAi组低(P<0.05)。RNAi+ACV组ICP8相对表达量降低最为明显,与ACV组和RNAi组相比有显著差异(P<0.05)。WST-1法对转染复合物与ACV的细胞毒性进行比较,其中RNAi中质粒和转染试剂对细胞的毒性明显小于ACV。结论:在RNAi与ACV对HSV-2抑制效果的比较中,ACV要好于RNAi,两者联合使用的抑制效果好于单独使用RNAi或ACV。在抑制效果都较好的情况下比较,RNAi中使用的质粒与转染试剂对细胞的影响比ACV小。
- 仵立佳吕延成兰小凇潘晓瑜丁娟
- 关键词：RNA干扰
- 普鲁卡因传导麻醉作用的药理学信息化实验教学设计
- 2020年
- 信息化教学是新时代高职教育改革和发展的要求,通过对“普鲁卡因的传导麻醉作用”信息化教学设计,系统优化教学过程,合理运用技术、方法和资源等组织、实施教学,最终达到较好的教学效果,为今后其他药理学实验课程开展信息化教学设计提供参考。
- 潘晓瑜朱俊访韩晋辉罗燕娜
- 关键词：普鲁卡因药理学实验信息化教学教学设计
- 单纯疱疹病毒2型UL27和UL29双基因shRNA慢病毒表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
- 2020年
- 目的构建单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27和UL29双基因shRNA慢病毒表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法针对HSV-2 UL27、UL29基因,各筛选干扰效率最佳的shRNA片段相连接,构建双基因共表达慢病毒载体,并转染HEK293细胞作为干扰组,另设空白对照组(不做任何处理)和阴性对照组(转染不针对任何基因的慢病毒载体)。转染48或24 h后接种HSV-2,RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中目的基因mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测各组细胞的存活率。结果干扰组UL27和UL29基因mRNA的表达抑制率可达(78.61±2.14)%和(84.86±1.52)%,同时gB和ICP8蛋白的相对表达量明显下降(P均<0.05),细胞的存活明显率提高(P均<0.05)。结论构建的HSV-2 UL27、UL29双基因shRNA重组慢病毒表达载体能在HEK293细胞中表达,为后续HSV-2的基因治疗奠定了实验基础。
- 潘晓瑜林婧娴韩晋辉朱俊访罗燕娜
- 关键词：单纯疱疹病毒2型慢病毒载体短发夹RNAHEK293细胞
- 靶向UL5小干扰RNA对Ⅱ型单纯疱疹病毒的抑制被引量：2
- 2012年
- 背景:解旋酶-引发酶复合体是Ⅱ型单纯疱疹病毒进行复制的必需基因,UL5基因为Ⅱ型单纯疱疹病毒解旋酶-引发酶复合体的组成单位之一。目的:应用RNA干扰技术分析特异性小干扰RNA对Ⅱ型单纯疱疹病毒UL5基因的干扰作用。方法:以Ⅱ型单纯疱疹病毒UL5基因为靶目标,设计、合成5对特异性小干扰RNA。通过LipofeCtamine 2000脂质体将特异性小干扰RNA转染HEK293细胞。48h后行荧光定量RT-PCR检测UL5基因转录水平,终点滴定法测定干扰后病毒滴度,观察其干扰效果。结果与结论:小干扰RNA成功转染入细胞内。荧光定量RT-PCR结果显示,siRNA722、siRNA2394、siRNA2513和siRNA2627均可不同程度降低靶mRNA表达,病毒滴度检测结果显示siRNA722、siRNA2394、siRNA2513和siRNA2627均可不同程度降低上清液中病毒感染滴度,阴性对照组和siRNA374对病毒感染滴度无影响。针对UL5基因的有效小干扰RNA可以特异性降低Ⅱ型单纯疱疹病毒的复制水平。
- 潘晓瑜吕延成王志勇樊俊周丹丹袁俊杰
- 关键词：小干扰RNARNA干扰RT-PCR
- shRNA靶向干扰UL27、UL54基因对HSV-2复制的影响
- 2021年
- 为探讨单纯疱疹病毒-2型(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL 27、UL 54基因的重组表达载体shRNA(small hairpin RNA,shRNA)联合干扰对HSV-2复制的影响,将重组质粒表达载体转染HEK293细胞,利用流式细胞术检测重组质粒转染HEK293的效率,实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测UL 27、UL 54基因及其蛋白的表达情况。此外,采用TICD 50(50%tissue culture infective dose,TCID 50)法和噻唑蓝(methyl thiazolyl terazolium,MTT)比色法检测病毒的滴度变化和HEK293细胞的存活率。结果检测显示:UL27 shRNA75+UL54shRNA1081联合干扰组的UL 27、UL 54基因mRNA的表达抑制率分别为(88.10±1.95)%和(85.53±2.28)%,gB蛋白、ICP27蛋白表达及子代病毒滴度均明显降低,HEK293细胞的存活率为(97.30±2.91)%,与单干扰组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。说明UL27shRNA75和UL54 shRNA1081这两个靶点联合干扰能显著抑制HSV-2在HEK293细胞中复制,为今后的HSV-2多基因的治疗提供研究基础。
- 潘晓瑜吕延成宋其芳韩晋辉朱俊访
- 关键词：小分子干扰RNA
- 基于天蚕素A和胡蜂毒素的杂合肽设计及活性鉴定被引量：7
- 2020年
- 为了进一步改善胡蜂毒素(mastoparan,MP)的抗菌、抗肿瘤活性并减少细胞毒性,本研究通过分子杂合方法对其进行改造,并初步鉴定设计的杂合多肽的生物活性。以天蚕素A的N-端1-8序列片段和胡蜂毒素的保守序列为模板进行杂合设计,获得一条新型杂合肽KL-21。以胡蜂毒素MP-L作为参照,采用生物信息学方法、微量倍比稀释法、杀菌动力学方法、溶血试验、CCK-8法分别对KL-21和MP-L进行理化参数分析、结构预测、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)测定、杀菌动力学研究、溶血活性测定及肿瘤细胞毒性试验。结果表明,KL-21可以在短时间内迅速杀灭细菌,对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)和阴性菌(大肠杆菌)的MIC均为4~8μg/mL,MBC均为8~16μg/mL;KL-21对真菌(白色念珠菌)的最小MIC为32μg/mL,MBC为64μg/mL。兔红细胞溶血试验表明,KL-21在128μg/mL时溶血活性仅为20%,较MP-L的溶血活性明显降低。细胞毒性试验表明,KL-21对肺癌细胞A549具有良好的抑制作用,16μg/mL的体外抑制率达86%。研究表明,新型杂合肽KL-21较MP-L的抗菌和抗肿瘤活性有较大提高,细胞毒性显著降低,可以作为先导肽进一步研究和开发。
- 翟培韩晋辉潘晓瑜
- 关键词：天蚕素抗菌肽抗肿瘤细胞
