牛锋
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人NDRG2两亚型基因原核表达载体的构建及表达与纯化
- 2009年
- 目的构建两种人NDRG2亚型原核重组体pPROEX-HTb-NDRG2并进行表达、纯化、浓缩和鉴定。方法根据人NDRG2基因序列设计合成特异引物,聚合酶链反应(PCR)扩增,亚克隆入6×His融合表达载体pPROEX-HTb,在大肠杆菌BL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,并用Protino Ni-TED Resin进行纯化。结果构建的重组质粒经酶切后分别可见约1100bp大小的片段,与预期结果一致,基因测序结果表明序列正确。在IPTG的诱导下重组体分别表达出分子量约45kD的表达产物,Western blot结果证实重组6×His融合蛋白可与抗-NDRG2蛋白抗体发生特异性反应;并通过Protino Ni-TED Resin成功获得了纯化蛋白。结论两种人NDRG2亚型基因分别被亚克隆至6×His融合表达载体pPROEX-HTb中,并获得成功表达和纯化,为该蛋白的生物活性及抑瘤作用的研究奠定了基础。
- 牛锋邓艳春秦娜刘新平
- 关键词：NDRG2纯化
- ndrg2基因2种亚型重组腺病毒载体的构建被引量：2
- 2009年
- 目的:构建表达N-myc下游调节基因2(ndrg2)2种亚型的重组腺病毒载体,为与ndrg2相关肿瘤的基因治疗奠定基础.方法:采用腺病毒表达系统ViraPowerTM Adenoviral Expression System构建腺病毒载体.首先将ndrg22种亚型(长短2种亚型分别命名为ndrg2L,ndrg2S)利用酶切、连接、转化、扩增后提取质粒等方法克隆入入门载体pENTR2B以获得入门克隆pENTR2B-NDRG2L和pENTR2B-NDRG2S,经双酶切及PCR鉴定正确后,用重组酶LR ClonaseTMⅡ Enzyme Mix进行入门克隆与表达载体pAd-CMV/V5-DEST间的重组反应,以获得表达克隆pAd-CMV/V5-DEST-NDRG2L和pAd-CMV/V5-DEST-NDRG2S的质粒.表达克隆经PCR鉴定后用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒(分别命名为Ad-NDRG2L和Ad-NDRG2S),经过反复的感染扩增后,用半数组织培养感染剂量法(TCID50)检测病毒滴度,用Western Blot法检测重组病毒载体是否能正确表达NDRG2蛋白.结果:证实入门克隆pENTR2B-NDRG2L/S和表达克隆pAd-CMV/V5-DEST-NDRG2L/S经酶切鉴定和PCR鉴定质粒构建正确,转染HEK293A细胞并反复扩增后获得的病毒滴度分别为:Ad-NDRG2L,4.0×1012空斑形成单位(PFU)/L;Ad-NDRG2S,6.3×1012PFU/L.且这2个病毒能正确表达NDRG2蛋白.结论:成功构建了ndrg2基因长短2种亚型的重组腺病毒载体,并包装扩增病毒,可为肿瘤基因治疗的研究提供依据.
- 秦娜邓艳春车红磊牛锋刘新平
- 关键词：NDRG2重组腺病毒基因治疗法肿瘤治疗
- 肿瘤干细胞与脑胶质瘤干细胞的研究现状被引量：3
- 2007年
- 以往认为，肿瘤是由体细胞突变而成，每个肿瘤细胞都可以无限制地生长。但这无法解释肿瘤细胞似乎具有无限的生命力以及并非所有肿瘤细胞都能无限制生长的现象。肿瘤细胞生长、转移和复发的特点与干细胞的基本特性十分相似，因此，有学者提出肿瘤干细胞的理论，这一理论为我们重新认识肿瘤的起源和本质，以及临床肿瘤治疗提供了新的方向和视觉角度。其中的脑胶质瘤起源于脑胶质瘤干细胞（brain gliomastem cells．BGSCs）的学说对正确认识和理解脑胶质瘤的发生、发展及其生物学行为如侵袭性、转移、肿瘤的耐药性等均具有十分重要的理论意义和潜在的应用价值。
- 牛锋邓艳春
- 关键词：肿瘤干细胞神经胶质瘤
